kristalisasi, multi eluen dan dua dimensi

7/23/2019 kristalisasi, Multi Eluen Dan Dua Dimensi

1/19

KRISTALISASI, MULTI ELUEN DAN DUA DIMENSI

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Di Indonesia penggunaan obat tradisional yang lebih dikenal

sebagai jamu, telah meluas sejak zaman nenek moyang hingga kini dan

terus dilestarikan sebagai warisan budaya. Bangsa Indonesia yang terdiri

dari berbagai suku bangsa, memiliki keanekaragaman obat tradisional

yang dibuat dari bahan-bahan alami bumi Indonesia, termasuk tanaman

obat.

Berbicara mengenai obat, sumber penggunaanya dapat ditelusiri

dari budaya dan konsep kesehatan dari beberapa prinsip pandang. Di

Indonesia sendiri, landasan ilmiah konsep pengobatan tradisional belum

didokumentasikan secara sistematis, namun manfaatnya telah dirasakan

terutama oleh masyarakat yang hidup jauh dari fasilitas modern.

Manfaat keanekaragaman hayati tersebut bagi manusia sangat

beragam seperti sebagai obat, kosmetik, pengharum, penyegar, pewarna,

dan penghasil senyawa organik yang jenisnya dan jumlahnya tak

terhingga.

romatografi adalah cara pemisahan campuran yang didasarkan

atas perbedaan distribusi dan komponen cairan tersebut diantara dua fae,

yaitu fase diam dan fase gerak. !ntuk pemilihan teknik kromatografi

sebagian besar bergantung pada sifar kelarutan senyawa yang akan

YAYU RAHMI RAMADANI SAPATI MUH. IKBAL150 2012 0020


2/19


dipisahkan. romatografi digunakan sebagai cara untuk memisahkan

substansi campuran menjadi komponen-komponennya.

B. Maksud Percobaan

"dapun maksud dilakukannya praktikum ini yaitu, untuk melakukan

penentuan senyawa pada isolat aktif daun #aja dengan menggunakan

metode romatografi $apis %ipis Multi &luen dan Dua Dimensi.

C. Tujuan Percobaan

"dapun tujuan dilakukannya praktikum ini, yaitu untuk menentukan

atau menetapkan senyawa yang telah diisolasi dari isolat aktif daun #aja

dengan menggunakan metode romatografi $apis %ipis Multi &luen dan

Dua Dimensi.



3/19


BAB II

TINJAUAN PUTA!A

TE"#I UMUM

romatografi merupakan suatu proses pemisahan yang mana

analit-analit dalam sampel terdistribusi antara ' fase, yaitu fase diam dan

fase gerak. (ase diam dapat berupa bahan padat atau porus dalam

bentuk molekul kecil, atau dalam bentuk cairan yang dilapiskan pada

pendukung padat atau dilapiskan pada pendukung padat atau dilapiskan

pada dinding kolom )#ohman, '**+.

ada kromatografi, komponen-komponen yang akan dipisahkan

berada diantara dua fase yaitu fase diam )stationary dan fase bergerak

)mobile. (ase diam adalah fase yang akan menahan komponen

campuran sedangkan fase gerak adalah fase yang akan melarutkan zat

komponen campuran. omponen yang mudah tertahan pada fase diam

akan tertinggal atau tidak bergerak sedangkan komponen yang mudah

larut dalam fase gerak akan bergerak lebih cepat )udarmadji, '**/.

uatu metode pemisahan komponen kimia berdasarkan prinsip

partisi dan adsorpsi antara fase diam )adsorben dan fase gerak )eluen,

komponen kimia bergerak naik mengikuti cairan pengembang karena

daya serap adsorben )silica gel terhadap komponen-komponen kimia

tidak sama sehingga komponen dapat bergerak dengan kecepatan yang

berbeda-beda berdasarkan tingkat kepolarannya dan hal inilah yang

menyebabkan terjadinya pemisahan )"dnan, 0+/1.



4/19


(ase diam yang digunakan dalam $% merupakan penjerap

berukuran kecil dengan diameter partikel antara 0*-2* 3m. emakin kecil

ukuran rata-rata pertikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran

fase diam, maka semakin baik kinerja $% dalam hal efisiensi dan

resolusinya )Markham, 0+11.

(ase gerak pada $% dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering

dengan mencoba-coba karena waktu yang diperlukan hanya

sebentar.istem yang paling sederhana ialah campuran ' pelarut organik

karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur

sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal

)4andjar, '**1.

!#"MAT"$#A%I LAPI TIPI DUA DIMENI

$% dua dimensi merupakan salah satu metode untuk mengetahui

kemurnian suatu senyawa dari hasil isolat )astrohamidjojo, 0+15. 6ang

bertujuan untuk meningkatkan resolusi sampel ketika komponen-

komponen solute mempunyai karakteristik kimia yang hampir sama,

karenanya nilai #f juga hampir sama sebagaimanadalam asam-asam

amino. elain itu, ' sistem fase gerak yang sangatberbeda dapat

digunakan secara berurutan sehingga memungkinkan untukmelakukan

pemisahan analit yang mempunyai tingkat polaritas yang berbeda )Ibnu,

'**1.

$% dua arah adalah cara yang memungkinkan pemakaian lapisan

fase diam yang lebih luas untuk memisahkan campuran yang



5/19


mengandung banyak komponen. elain itu, dua sistem pelarut yang

sangat berbeda dapat digunakan secara berurutan pada campuran

tertentu, jadi memungkinkan pemisahan campuran yang mengandung

komponen yang kepolarannya sangat berbeda. &kstrak ditotolkan dan

dielusi seperti pada $% normal kemudian diputar +** untuk

pengembangan kedua )4ibbons, '**7.

enyerap umum yang digunakan adalah silica gel, aluminium

oksida, keiselgur, selulosa dan turunannya, poliamida dll. ilica gel

adalah penyerap umum yang banyak digunakan karena mempunyai daya

pemisahan yang baik, hal ini telah diseleksi oleh tahl untuk pertama kali

pada tahun 0+51 )tahl, 0+15.

alah satu aplikasi untuk mengetahui kemurnian senyawa hasil

isolat dengan metode ini yaitu dengan mengelusi noda pada dua arah

yang berbeda dan menggunakan eluen yang berbeda, isolat dikatakan

murni apabila noda yang dinampakkan adalah tunggal )tahl, 0+15.

ecara singkat pengerjaan $% dua dimensi ialah sebagai berikut8

ampel ditotolkan pada lempeng lalu dikembangkan dengan satu sistem

fase gerak sehingga campuran terpisah menurut jalur yang sejajar

dengansalah satu sisi. $empeng diangkat, dikeringkan dan diputar +*9,

dan diletakkan dalam bejana kromatografi yang berisi fase gerak

kedua,sehinggabercak yang terpisah pada pengembangan pertama

terletak dibagian bawah sepanjang lempeng, lalu dikromatografi lagi

)#ohman, '**+.



6/19


!#"MAT"$#A%I MULTI ELUEN

Multi eluen merupakan penggunaan eluen atau fase gerak yang

berbeda yang memungkinkan pemisahan analit dengan berdasarkan

tingkat polaritas yang berbeda )astrohamidjojo, 0+15. 6ang bertujuan

untuk mendapatkan resolusi yang baik dari hasil $%.Memfokuskan zona

pemisahan multi eluen, cocok digunakan untuk sampel yang memiliki

noda dengannilai #f di bawah *.5. ampel disentrifuge terlebih dahulu

dengan menggunakan methanol p.a, sebab untuk menjamin kemurnian

senyawa. ebab, methanol p.a merupakanpelarut yang khusus digunakan

untuk analisis dan bebas dari pengotor.Berbeda dengan methanol teknis

yang bisa saja mengandung pengotor seperti plasticizer dari wadah yang

digunakan untuk menampung pelarut. agar seluruh area lempeng dapat

digunakan sehingga senyawa yang masih menumpuk dalam satu noda,

dapat ter-elusi kembali melalui sisi lempeng yang lain )Mary, 0++7.

rinsipnya, :like dissol;e like: yang dapat digunakan untuk

pemilihan pelarut dalam menentukan jenis senyawa kimia yang mungkin

terekstraksi dari organisme. Dimana pelarut non polar akan mengestraksi

senyawa-senyawa non polar akan terekstraksi oleh pelarut polar, serta

dapat juga digunakan untuk menganalisis kemurnian suatu isolat


7/19


0* menit. romatografi tersebut kemudian dielusi lagi dalam eluen segar

dari pelarut yang sama dalam arah yang sama untuk jarak yang sama.

roses ini, yang dapat diulangi berkali-kali, meningkatkan resolusi

komponen dengan nilai #( bawah *,5. Beberapa pengembang dilakukan

dengan pelarut yang berbeda dalam arah yang sama, masing-masing

yang menjalankan jarak yang sama atau berbeda, disebut elusi bertahap.

=ebuah fase kurang polar dapat digunakan pertama, diikuti oleh fase

yang lebih polar, atau sebalinya:. emindahan material nonpolar kebagian

atas lapisan, meninggalkan zat terlarut polar terganggua darimana dia

berasal. etelah kering, zat terlarut polar dipisahkan oleh pengembang

dengan eluen )(ried, 0+++.

euntungannya adalah kadang-kadang pelat $% tampaknya tidak

cukup lama untuk memberikan pemisahan yang diperlukan pada

komponen sampel )>all,'**5.



8/19


BAB III

MET"DE !E#JA

A. Alat dan Ba&an'. Alat

"lat-alat yang digunakan dalam percobaan ini, yaitu batang

pengaduk, chamber, gelas kimia, gelas ukur, gunting, lempeng $%,

lempeng $% dua dimensi, penggaris, pensil, pinset, pipa kapiler, pipet

tetes, sendok tanduk, !?'5@dan !?277.(. Ba&an

Bahan-bahan yang digunakan dalam percobaan ini, yaitu

aluminium foil, DA, etil asetat, kloroform, label, n-heksan, metanol,

isolat aktif daun raja dan tissue.B. Cara !erja

'. !LT Mult) Eluena. enjenuhan chamber

0 Disiapkan dua buah chamber yang bersih lengkap dengan

penutupnya' Diisi dua macam eluen yang berbeda pada masing-masing

chamber2 Dimasukkan potongan kertas saring yang panjangnya lebih dari

tinggi chamber dan kemudian ditutup@ Dibuarkan hingga eluen naik pada kertas saring hingga

melewati penutup kaca )chamber telah jenuh.

b. enotolan dan pengembangan sampel0 Disiapkan alat dan bahan yang dibutuhkan' Dilarutkan isolate dengan kloroform


9/19


@ Diangin-anginkan lempeng yang telah ditotol untuk menguapkan

pelarutnya lalu dielusi dengan eluen n-heksan 8 etil asetat )080

dan kloroform 8 metanol )0805 Diangkat lemoeng setelah mencapai garis batas atas kemudian

dikembangkan lagi dengan eluen yang sama )pengembangan

berganda.7 Diamati dengan penampak bercak !?'5@, !?277, dan ditentukan

tunggal tidaknya noda.

(. !LT Dua D)*ens)ristal murni


10/19


BAB I+

HAIL DAN PEMBAHAAN

A. Has)l Penga*atan0. $% Dua Dimensi

ELUEN PE#BANDIN$AN

N,Heksan - Et)lasetat 1 8 '!loroor* - Metanol + 8 0

'. $% Multi &luen



11/19


ELUEN PE#BANDIN$AN

N,Heksan - Et)lasetat 1 8 '

!loroor* - Metanol + 8 0

B. Pe*ba&asan

romatografi merupakan suatu proses pemisahan yang mana

analit-analit dalam sampel terdistribusi antara ' fase, yaitu fase diam dan

fase gerak. (ase diam dapat berupa bahan padat atau porus dalam

bentuk molekul kecil, atau dalam bentuk cairan yang dilapiskan pada

pendukung padat atau dilapiskan pada pendukung padat atau dilapiskan

pada dinding kolom.

$% dua dimensi merupakan salah satu metode untuk mengetahui

kemurnian suatu senyawa dari hasil isolat. 6ang bertujuan untuk



12/19


meningkatkan resolusi sampel ketika komponen-komponen solute

mempunyai karakteristik kimia yang hampir sama.

alah satu aplikasi untuk mengetahui kemurnian senyawa hasil

isolat dengan metode ini yaitu dengan mengelusi noda pada dua arah

yang berbeda dan menggunakan eluen yang berbeda, isolat dikatakan

murni apabila noda yang dinampakkan adalah tunggal.

"dapun tujuan dilakukannya percobaan kali ini adalah untuk

menetapkan atau menentukan senyawa yang telah diisolasi dari daun raja

dengan menggunakan metode kromatografi lapis tipis multi eluen dan dua

dimensi.

ada praktikum kali ini percobaan dengan metode multi eluen, yaitu

disiapkan dua buah chamber yang bersih, lengkap dengan penutupnya.

Masing-masing chamber diisi dengan dua macam eluen yang berbeda

)loroform 8 methanol dan n-heksan 8 etil asetat dengan perbandingan

+80 dan 18'. emudian digoyang-goyangkan chamber agar eluen jenuh.

Dimasukkan lempeng yang sebelumnya telah ditotolkan sampel dan

sudah diuapkan pelarutnya. $empeng diangkat setelah mencapai garis

batas atas kemudian dikembangkan lagi dengan eluen yang sama

)pengembangan berganda. "mati dengan penampak bercak !?'5@, !?277,

dan disemprot pereaksi DA bila noda tidak terlihat pada !?'5@dan 277.

edangkan untuk dua dimensi, yaitu kristal murni atau noda

tunggal yang telah diperoleh kemudian ditotol pada lempeng $% dengan

ukuran 5 5, kemudian dielusi dengan menggunakan dua cairan



13/19


pengelusi. Cairan pengelusi yang pertama adalah eluen loroform 8

metanol )+80 dan cairan pengelusi yang yang kedua adalah n-heksan 8

etil asetat )18' )atau eluen yang sesuai petunjuk asisten. !ntuk proses

elusi yang pertama dilakukan dengan cara menotolkan filtrate yang telah

dilarutkan dengan pelarut yang cocok pada lempeng kemudian dielusi.

elajutnya proses elusi yang kedua dilakukan dengan cara memutar

lempeng +* berlawanan arah jarum jam sehingga hasil elusi yang

pertama menjadi titik awal pengelusian untuk proses elusi yang kedua.etelah itu, dilakukan penyemprotan dengan pereaksi spesifik yaitu

"lCl2 dan sitroborat dan diamati lagi kembali di !?'5@dan 277. Dimana

terjadi fluoresensi biru saat diamati pada !?277 sehingga dapat

disimpulkan bahwa senyawa yang terkandung yaitu fla;anoid.

Didapatkan hasil, yaitu terdapat noda tunggal yang paling bagus

pada isolat ketiga dari dan C? yang didapat dari proses isolasi

dengan metode $% dan ditegaskan pada metode $% multi eluen dan

dua dimensi. edangkan pada dua isolat lainnya tidak ditemukkan

senyawa yang terkandung didalamnya baik pada saat di lihat pada !? '5@

dan 277 serta penyemprotan pereaksi spesifik. Dari hasil praktikum dapat

disimpulkan bahwa memang terdapat senyawa aktif yaitu senyawa

fla;anoid )antioksidan pada isolat ketiga dari dan C?.

(aktor kesalahan yang dilakukan, yaitu terjadi kerusakan pada

isolat pertama dan kedua dari dan C? sehingga dilakukan

sentrifuge kembali pada isolat ketiga.



14/19


BAB +

PENUTUP

A. !es)*/ulan

Dari hasil yang diperoleh, dapat ditarik kesimpulan bahwa terdapat

senyawa aktif yaitu senyawa fla;anoid )antioksidan pada isolat ketiga dari

dan C?.

B. aran

ebaiknya kerja sama antar praktikan lebih ditingkatkan lagi agar

praktikum berjalan lancar dan selesai tepat waktu.



15/19


DA%TA# PUTA!A

"dnan, M. 0+/1. Teknik Kromatografi untuk Analisis Bahan Makanan."EDI 6ogyakarta8 6ogyakarta.

(ried, B., dan herma, F. 0+++. Thin Layer Chromatography 4thEdition,Reised and E!panded. Marcel Dekker Inc8 Eew 6ork.

4andjar, I. 4., dan #ohman, ". '**/. Kimia "armasi Analisis. Cetakan II.6ogyakarta8 ustaka pelajar.

Ibnu, 4.4., dan "bdul, #. '**1. Kimia "armasi Analisis. ustaka elajar.

6ogyakarta.

Markham,.#. 0+11. Cara Mengidentifikasi "laonoida. I%B 8 Bandung.

#ohman, ". '**+. Kimia "armasi Analisis. 6ogyakarta8 ustaka elajar.

>all, .&. '**5. Thin#Layer Chromatography, A Modern $ra%ti%al

Approa%h. # C/8 !.

astrohamidjojo,A. 0+15. Kromatografi Edisi kedua. $iberty8 6ogyakarta



16/19


LAMPI#ANA. ke*a !erja

0. $% Multi &luenIsolat murni dilarutkan

Ditotolkan pada lempeng $%

Diuapkan pelarutnya dengan cara diangin-anginkan

Dimasukkan kedalam chamber yang berisi eluen )loroform 8 Metanol dan

E-heksan 8 etil asetat dengan perbandingan +80 dan 18'

Diangkat setelah eluen mencapai batas tanda dilempeng

Diuapkan kembali eluennya

Dilihat pada !?'5@dan 277, apabila tidak terlihat nodanya disemprot

dengan DA dan pereaksi spesifik

Dilihat senyawa yang didapatkan.



17/19


'. $% Dua Dimensi

Isolat murni dilarutkan

Ditotolkan pada lempeng $%

Diuapkan pelarutnya dengan cara diangin-anginkan

Dimasukkan kedalam chamber yang berisi eluen loroform 8 Metanol)+80

Diangkat setelah eluen mencapai batas tanda dilempeng


Diputar +**lempengnya berlawanan arah jarum jam

Dimasukkan kedalam chamber kembali yang berisi eluen yang

berbeda yaitu E-heksan 8 etil asetat )18'


Dilihat pada !?'5@dan 277, apabila tidak terlihat nodanya disemprot

dengan DA, setelah itu disemprot dengan pereaksi spesifik.

Dilihat senyawa yang didapatkan



18/19


B. $a*bar0. $% Multi &luen

(. $% Dua Dimensi


Gambar. Setela!e"#em!r$ta"

%&tr$b$ratGambar. Setela!e"#em!r$ta"

Al'l(


19/19


!?'5@

!?277


kristalisasi, multi eluen dan dua dimensi

Documents