mikrobiologi dasar dan lingkungan
TRANSCRIPT
7/23/2019 Mikrobiologi dasar dan Lingkungan
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiologi-dasar-dan-lingkungan 1/7
Pendahuluan
Mikroba sulit dilihat dengan cahaya karena tidak mengadsorbsi atau
membiaskan cahaya. Alasan inilah yang menyebabkan zat warna digunakan untukmewarnai mikroorganisme. Zat warna mengadsorbsi dan membiaskan cahaya
sehingga kontras mikroba dengan sekelilingnya dapat ditingkatkan. Penggunaan zat
warna memungkinkan pengamatan strukur seperti spora, flagela, dan bahan inklusi
yng mengandung zat pati dan granula fosfat (Entang, !""#$
Pewarnaan diferensial membutuhkan paling sedikit tiga substansi kimia yang
diberikan substansi kimia yang diberikan pada olesan yang telah mengalami fiksasi
panas. Pereaksi pertama disebut dengan pewarna primer yang berfungsi mewarnai
seluruh sel. %ntuk memperoleh kontras maka pereaksi kedua adalah zat pemucat.
&erdasarkan komposisi kimiawi komponen selular maka zat pemucat dapat atau tidak
dapat menyingkirkan pewarna primer atau pewarna dari seluruh atau sebagian
struktur sel yang pertama. Pewarna teraknir atau pwearna tandingan member warnakontras terhadap pewarna pertama. 'etelah proses pemucatan, apabila pewarna
pertama tidak dapat disingkirkan maka pewarna tandingan tidak dapat menembus sel
dan komponen sel akan mempertahankan warna pewarna pertama.etapi bila
pewarna pertama tersingkirkan maka komponen sel yang pucat akan menerima
pewarna tandingan. )engan cara ini maka tipe sel dan struktur dapat dibedakan
dengan tipe berdasarkan warna yang dipertahankannya (*ina Martini $
Pewarnaan +ram atau metode +ram adalah suatu metode empiris untukmembedakan spesies bakteri menadi dua kelompok besar, yakni gram positif dan
gram negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka. Metode ini diberinama berdasarkan penemunya, ilmuwan )enmark ans -hristian +ram (/0#12#/$yang mengembangkan teknik ini pada tahun //3 untuk membedakan antara
pneumokokus dan bakteri 4lebsiella pneumoniae. Pada ui pewarnaan +ram, suatu
pewarna penimbal (counterstain$ ditambahkan setelah metil ungu, yang membuat
semua bakteri gram negatif menadi berwarna merah atau merah muda. Penguian ini berguna untuk mengklasifikasikan kedua tipe bakteri ini berdasarkan perbedaan
struktur dinding sel mereka.(*iana 5estari, !"!$
'pora bakteri adalah bentuk bekteri yang sedang dalam usaha mengamankan
diri terhadap pengaruh buruk dari luar. 'pora bakteri mempunyai fungsi yang sama
seperti kista amoeba, sebab bakteri dalam bentuk spora dan amoeba dalam bentukkista merupakan suatu fase dimana kedua mikroorganisme itu berubah bentuk untuk
melindungi diri terhadap faktor luar yang tidak menguntungkan. Endospora ada yang
lebih kecil dan ada pula yang lebih besar daripada diameter sel induk.
()widoseputro, !""$
5etak endospora di dalam sel serta ukurannya selama pembentukannya
tidaklah sama bagi semua spesies. 'ebagai contoh, beberapa spora adalah sentral
7/23/2019 Mikrobiologi dasar dan Lingkungan
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiologi-dasar-dan-lingkungan 2/7
yaitu dibentuk di tengah6tengah sel, yang lain terminal yaitu dibentuk di uung7 danyang lain lagi subterminal yaitu di dekat uung. (Pelczar,2/8$
Metode pewarnaan spora berfungsi untuk mempermudah pengamatan agar peneliti atau pengamat mampu melihat spora, membedakan dengan sel 9egetati9e
ataupun mengamati bentuknya. Endospora tidak mudah diwarnai dengan zat pewarna
pada umumnya. al tersebut yang menadi dasar dari metode pengecatan endospora
dengan larutan hiau malasit. Metode 'haeffor, foton endospora diwarnai pertamadengan larutan hiau malasit. Pengecatan tersebut sifatnya kuat karena dapat
berpenetrasi ke dalam endospora dengan perlakuan larutan hiau malasit. eknik
tersebut akan menghasilkan warna hiau pada endospora dan merah pada sel9egetati9e (:ames !""!$
uuan
Praktikum pewarnaan gram bertuuan untuk mengenal dan mempelaari
prosedur pewarnaan gram, serta memahami pentingnya setiap langkah dalam
prosedur tersebut. uuan dari praktikum pewarnaan spora adalah mempelaari
landasan kimiawi pewarnaan spora, dan mempelaari prosedur untuk membedakan bentuk spora 9egetati9e dan spora bakteri.
Alat dan &ahan
alat yang digunakan dalam praktikum pewarnaan gram &unsen untuk
melakukan fiksasi serta untuk membuat sekitar tempat kera menadi steril adalah auose untuk mengambil biakan bakteri, oek glass tempat untuk menaruh biakan bakteriyang akan diwarnai, bak perwarna untuk melakukan pewarnaan agar pewarna tidak
mengenai bau atau mea dan mikroskop untuk melihat hasil pewarnaan. &ahan yang
digunakan adalah satu set pewarnaan gram ( 4ristal 9iolet, iodium, alcohol,dan
safranin$ a;uades steril , serta alcohol <"= untuk mensterilkan.
alat dan bahan yang digunakan dalam melakukan percobaan pewarnaan spora
adalah pembakar &unsen, hot plate untuk melakukan fiksasi, bak perwarna, lupinokuasi untuk mengambil biakan bakteri yang akan diwarnai. obek glass, kertas
lensa untuk membersihkan lensa yang tadinya sudah diberi minyak emersi, dan
mikroskop. sedangkan bahan yang digunakan adalah malachite green, 4ristal 9iolet,'afranin dan a;uades.
7/23/2019 Mikrobiologi dasar dan Lingkungan
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiologi-dasar-dan-lingkungan 3/7
Prosedur
5angkah kera yang dilakukan untuk pewarnaan gram adalah alit dan bahan
disiapkan. &unsen dinyalakan agar tetap steril. 5alu bilas obek glass dengan a;udes.&iakan bakteri diambil dengan digunakannya arum ose dan dioleskan dipermukaan
obek glass. 5akukan fiksasi dengan &unsen sampai terdapat uap air yang berwarna
putih. 5alu larutan ungu 4ristal diteteskan ke obek glass sebanyak !6# tetes tunggu
sampai menit. 'etelah itu dibilas dengan menggunakan a;uades. >odin diteteskansebanyak !6#ke obek glass tunggu sampai menit. &ilas kembalidengan A;uades.
5arutan alcohol diteteskan ke atas obek glass sebanyak !6# tetes biarkan selama
menit. &ilas kembali dengan a;uades. etesi obek glass dengan 'afranin dan biarkanselama 30 detik. 'etelah itu )ibilas kmbali dengan a;udes dan dikeringkan. 5alu
diamati dengan menggunakan mikroskop perbesaran ""?" dan digunakannya
minyak emersi. 'etelah selesai pengamatan lensa mikroskop dibesihkan dengankertas lensa.
Pewarnaan spora langkah keranya adalah oek glass yang akan digunakandibersihkan dengan menggunakan alcohol <"=. &iakan bakteri diambil dengan arum
ose sebanyak satu lup. 5alu dioleskan ke obek glass, obek glass difiksasi hingga uap
air menadi kering. tetesi dengan malakit hiau pada obek glass lalu letakkan obek
glass diatas pemanas hingga kering, 5Alu dibilas dengan a;uades. etesi obek glassdengan laruutan safranin selama 30 detik,lalu bilas kembali dengan a;uades dan
dikeringkan. 'etelah itu diamati dengan menggunakan mikroskop dengan pebesaran
"" ? " dan dengan digunakannya minyak emersi. 'etelah selesai pengamatan lensamikroskop dibesihkan dengan kertas lensa.
7/23/2019 Mikrobiologi dasar dan Lingkungan
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiologi-dasar-dan-lingkungan 4/7
asil dan Pembahasan
asil
Gambar 1 E.colli Gambar 2 Bacillus sp
Gambar 3 pewarnaan spora bacillus sp
Pembahasan
E. coli merupakan bakteri berbentuk batang dengan panang sekitar ! micrometer dan
diamater ".0 micrometer. @olume sel E. coli berkisar ".86".< micrometer kubik.
&akteri ini termasuk umumnya hidup pada rentang !"63" deraat -, optimum pada #<
7/23/2019 Mikrobiologi dasar dan Lingkungan
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiologi-dasar-dan-lingkungan 5/7
deraat. &akteri Escheria -oli merupakan kuman dari kelompok gram negatif, berbentuk batang dari pendek sampai kokus, saling terlepas antara satu dengan yang
lainnya tetapi ada uga yang bergandeng dua6dua (diplobasil$ dan ada uga yang
bergandeng seperti rantai pendek, tidak membentuk spora maupun kapsula,
berdiameter , 1 ,0 B !," 1 8," Cm, dapat bertahan hidup di medium sederhanadan memfermentasikan laktosa menghasilkan asam dan gas, kandungan +D- )A
ialah 0" sampai 0 mol = (Pelczar, 2/8$
&acillus sp merupakan bakteri +ram positif, berbentuk batang, dapat tumbuh
pada kondisi aerob dan anaerob. 'poranya tahan terhadap panas (suhu tinggi$, mampu
mendegradasi ?ylandan karbohidrat. &acillus sp mempunyai sifat yaitu mamputumbuh pada suhu lebih dari 0" o- dan suhu kurang dari 0 o-, mampu bertahan
terhadap pasteurisasi, mampu tumbuh pada konsentrasi garam tinggi (F"=$, mampu
menghasilkan spora dan mempunyai daya proteolitik yang tinggi dibandingkanmikroba lainnya. &acillus adalah salah satu genus bakteri yang berbentuk batang dan
merupakan anggota dari di9isi Girmicutes. &acillus merupakan bakteri yang bersifat
aerob obligat atau fakultatif, dan positif terhadap ui enzim katalase. (-owan dan'tellHs, 2<#$
+ram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat warna metil ungu
sewaktu proses pewarnaan +ram. &akteri enis ini akan berwarna biru atau ungu di bawah mikroskop, sedangkan bakteri gram negati9e akan berwarna merah muda.
Perbedaan klasifikasi antara kedua enis bakteri ini terutama didasarkan pada
perbedaan struktur dinding sel bakteri -iri6ciri bakteri gram positif yaituI 'trukturdinding selnya tebal, sekitar 06/" nm, berlapis tunggal atau monolayer. )inding
selnya mengandung lipid yang lebih normal (63=$, peptidoglikan ada yang sebagai
lapisan tunggal. 4omponen utama merupakan lebih dari 0"= berat ringan.
Mengandung asam tekoat. &ersifat lebih rentan terhadap penisilin. Pertumbuhandihambat secara nyata oleh zat6zat warna seperti ungu kristal. 4omposisi nutrisi yang
dibutuhkan lebih rumit. 5ebih resisten terhadap gangguan fisik. *esistensi terhadap
alkali (= 4J$ larut idak peka terhadap streptomisin oksin yang dibentukEksotoksin Endotoksin (Aditya,!""$.
&akteri gram negati9e adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna
metil ungu pada metode pewarnaan +ram. &akteri gram positif akan
mempertahankan warna ungu gelap setelah dicuci dengan alcohol, sementara bakterigram negati9e tidak. -iri6ciri bakteri gram negatif yaituI 'truktur dinding selnya
tipis, sekitar " 1 0 mm, berlapis tiga atau multilayer. )inding selnya mengandunglemak lebih banyak (6!!=$, peptidoglikan terdapat didalam. 5apisan kaku, sebelah
dalam dengan umlah sedikit "= dari berat kering, tidak mengandung asam tekoat.4urang rentan terhadap senyawa penisilin. Pertumbuhannya tidak begitu dihambat
oleh zat warna dasar misalnya kristal 9iolet. 4omposisi nutrisi yang dibutuhkan
relatif sederhana. idak resisten terhadap gangguan fisik. *esistensi terhadap alkali
7/23/2019 Mikrobiologi dasar dan Lingkungan
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiologi-dasar-dan-lingkungan 6/7
(= 4J$ lebih pekat. Peka terhadap streptomisin. oksin yang dibentukEndotoksin,
&akteri gram negatif memiliki # lapisan dinding sel. 5apisan terluar yaitu
lipoposakarida (lipid$ kemungkinan tercuci oleh alkohol, sehingga pada saat diwarnaidengan safranin akan berwarna merah. &akteri gram positif memiliki selapis dinding
sel berupa peptidoglikan yang tebal. 'etelah pewarnaan dengan kristal 9iolet, pori6 pori dinding sel menyempit akibat dekolorisasi oleh alkohol sehingga dinding seltetap menahan warna biru (Gitria, !""2$.
5etak endospora di dalam sel serta ukurannya selama pembentukannyatidaklah sama bagi semua spesies. 'ebagai contoh, beberapa spora adalah sentral
yaitu dibentuk di tengah6tengah sel, yang lain terminal yaitu dibentuk di uung7 dan
yang lain lagi subterminal yaitu di dekat uung . 'erta o9al dan mengembang adalah bentuk o9al dan mengembang (Pelczar,2/8$. bacillus adalah contoh dari spora o9al.
4esimpulan
&acillus sp merupakan bakteri +ram positif, berbentuk batang, dapat tumbuh
pada kondisi aerob dan anaerob. 'poranya tahan terhadap panas (suhu tinggi$, mampu
mendegradasi ?ylandan karbohidrat. &akteri Escheria -oli merupakan kuman darikelompok gram negatif, berbentuk batang dari pendek sampai kokus
)aftar Pustaka
Aditya, Mushofa. 2010. Teknik Pewarnaan Bakteri. Jakarta: Erlangga
Cowan dan Steel's. 1!". Manual for Identication of Medical Bacteria.Se#ond Ed.
Ca$%ridge &ni. (ress
)wid*ose+utro, ).2001. Dasar- dasar Mikrobiologi. Jakarta: ( (ener%it)*a$%atan.
-itria, ita./200. Pewarnaan Gram Positif Dan Gram Negatif. Jakarta:
sale$%a$edika
Joy#e. 2002. Prinsip-Prinsip ains !ntuk "eperawatan. etno ndah,+ener*e$ah. Jakarta : Erlangga. er*e$ahan dari : Principles of cience forNurses
7/23/2019 Mikrobiologi dasar dan Lingkungan
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiologi-dasar-dan-lingkungan 7/7
3estari ina 2012. Pewarnaan eder#ana$ Negarif$ "apsul Dan Gram. 4ogyakrta: sekolah tinggi kesehatan 4ogyakarta
Martin, ina. r dkk. Penuntun Praktikum Mikrobilogi. 5ogor: )i+lo$a (5
(el#6ar, M J.dan E.C.S Chan.178.Dasar- dasar Mikrobiologi %ilid &. Jakarta:& (ress.Ja$es