pewarnaan tunggal dan differensial_popy sarah c_260110130136

7/23/2019 Pewarnaan Tunggal Dan Differensial_Popy Sarah C_260110130136

1/22

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI FARMASI

PEWARNAAN SEDERHANA

Senin, 2 Maret 2015

Kelompok I

Senin, Pukul 13.0016.00 WIB

Nama NPM

Popy Sarah Chairunnisa 260110130136

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS PADJADJARAN2015

Nilai TTD

(Dhiya) (Emanuella) (Puspagita)


2/22

I.

Tujuan

Mengamati ukuran, bentuk dan struktur-struktur tertentu dari bakteri, dengan

menggunakan satu macam zat pewarna.

II. Prinsip

1. Ikatan ion

Pewarnaan bakteri didasarkan atas adanya ikatan ion antara komponen seluler

dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarnaan yang disebut kromogen.

Terjadi ikatan ion karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler

maupun pada pewarnaan. Berdsarkan adanya muatan ini maka dapat

dibedakan pewarna asam dan pewarna basa.

2. Pewarnaan sederhana

Pewarnaan sederhana didasarkan pada zat warna yang digunakan hanya

terdiri dari satu zat yang dilarutkan dalam bahan pelarut ya

3.

Teknik aseptis

Teknik aseptis adalah proses tanpa kontaminasi untuk menjamin preparasi

bebas dari mikroba kontaminan. Teknik aseptic digunakan sepanjang

percobaan berlangsung baik alat, bahan, lingkungan sekitar maupun

praktikan. Untuk alat dan bahan dapat diterapkan metode sterilisasi.

III. Teori Dasar

Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan

sifat-sifat yang khas begitu pula dengan bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak

berwarna dan kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri yang ada di suspensikan.

Salah satu cara unutk mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah di

identifikasi adalah dengan cara metode pengenceran atau pewarnaan. Hal tersebut

berfungsi untuk mengetahuisifat fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding

sel bakteri melalui serangkaian pengecetan atau pewarnaan (Dwidjoseputro,

1998).


3/22

Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit, karena

selain bakteri itu tidak berwarna juga transparan dan sangat kecil. Unutk

mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri

sehingga sel dapat terlihat jelas dan mudah diamati. Oleh karena itu teknik

pewarnaan sel bakteri ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam

penelitian-penelitian mikrobiologi (Dwidjoseputro, 1998).

Berbagai macam tipe morfologi bakteri (kokus, basil, spirilum, dan

sebagainya) dapat dibedakan dengan menggunakan pewarna sederhana. Istilah

pewarna sederhana dapat diartikan dalam mewarnai sel-sel bakteri hanyadigunakan satu macam zat warna saja (Gupte, 1990). Kebanyakan bakteri mudah

bereaksi dengan pewarna-pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat

basofilik (suka akan basa) sedangkan zat-zat warna yang digunakan untuk

pewarnaan sederhana umumnya bersifat alkalin (komponen kromoforiknya

bermuatan positif). Faktor-faktor yang mempengaruhi pewarnaan bakteri yaitu

fiksasi, peluntur warna , substrat, intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat

warna penutup. Suatu preparat yang sudah meresap suatu zat warna, kemudian

dicuci dengan asam encer maka semua zat warna terhapus. sebaliknya terdapat

juga preparat yang tahan terhadap asam encer. Bakteri-bakteri seperti ini

dinamakan bakteri tahan asam, dan hal ini merupakan ciri yang khas bagi suatu

spesies (Dwidjoseputro, 1994).

Teknik pewarnaan warna pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat

macam yaitu pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan diferensial

dan pengecatan struktural. Pemberian warna pada bakteri atau jasad- jasad reniklain dengan menggunakan larutan tunggal suatu pewarna pada lapisan tipis, atau

olesan, yang sudah difiksasi, dinamakan pewarnaan sederhana. Prosedur

pewarnaan yang menampilkan perbedaan di antara sel-sel microbe atau bagian-

bagian sel microbe disebut teknik pewarnaan diferensial. Sedangkan pengecatan

struktural hanya mewarnai satu bagian dari sel sehingga dapat membedakan

bagian-bagian dari sel. Termasuk dalam pengecatan ini adalah pengecatan

endospora, flagella dan pengecatan kapsul (waluyo, 2010).


4/22

Mikroba sulit dilihat dengan cahaya karena tidak mengadsorbsi atau

membiaskan cahaya. Alasan inilah yang menyebabkan zat warna digunakan untuk

mewarnai mikroorganisme. Zat warna mengadsorbsi dan membiaskan cahaya

sehingga kontras mikroba dengan sekelilingnya dapat ditingkatkan. Penggunaan

zat warna memungkinkan pengamatan strukur seperti spora, flagela, dan bahan

inklusi yng mengandung zat pati dan granula fosfat (Entjang, 2003).

Pewarnaan sederhana yaitu pewarnaan dengan menggunakan satumacam

zat warna dengan tujuan hanya untuk melihat bentuk sel bakteri dan untuk

mengetahui morfologi dan susunan selnya . pewarnaan ini dapat menggunakanpewarnaan basa pasda umumnya antara lain kristal violet , metylen blue , karbol ,

fuchsin , dan safranin (lay ,1994).

Pewarnaan sederhana merupakan teknik pewarnaan yang paling banyak

digunakan. Disebut sederhana karena hanya menggunakan satu jenis zat warna

untuk mewarnai organisme tersebut. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan

pewarnaan-pewarnaan sederhana karena sitoplasamanya bersifat basofilik (suka

dengan basa). Zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan sederhana

umumnya bersifat alkolin. Dengan pewarnaan sederhana dapat mengetahui bentuk

dan rangkaian sel-sel bakteri. Pewarna basa yang biasa digunakan untuk

pewarnaan sederhana ialah metilen biru, kristal violet, dan karbol fuehsin yang

mana pewarnaan sederhana ini dibagi lagi menjadi dua jenis pewarnaan (Lestari,

2013)

Berbagai macam tipe morfologi bakteri (kokus, basil, spirilum, dan

sebagainya) dapat dibedakan dengan menggunakan pewarna sederhana, yaitu

mewarnai sel-sel bakteri hanya digunakan satu macam zat warna saja.

Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarna-pewarna sederhana karena

sitoplasmanya bersifat basofilik (suka akan basa) sedangkan zat-zat warna yang

digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat alkalin (komponen

kromoforiknya bermuatan positif) (Lestari, 2013)


5/22

Pada umumnya, olesan bakteri terwarnai mengungkapkan ukuran,

bentuk, susunan dan adanya struktur internal seperti spora dan butiran zat pewarna

khusus diperlukan untuk melihat bentuk kapsul atau pun flagella, dan hal-hal

terperinci tertentu di dalam sel. Zat pewarna adalah garam yang terdiri atas ion

positif dan ion negatif, yang salah satu diantaranya berwarna (Volk dan Whleer,

1998).

IV.Alat dan Bahan

Alat

1. Bak pewarna

2. Cawan petri

3. Kaca obyek

4. Kapas

5. kertas saring

6. Mikroskop majemuk

7. Ose

8.

pembakar spirtus

Bahan

1. Zat warna karbol fuksin, biru metilen dan karbol gentian violet

2. Sampel air liur

3. Alkohol 70 %

4. air suling dalam botol semprot

5.

minyak celup.

Gambar Alat

1. Bak Pewarna


6/22

2.

Cawan petri

9.

4.

kaca obyek

5.

Kapas

6. Kertas Saring

7.

Mikroskop Majemuk


7/22

8.

Ose

9. Pembakar Spiritus

V. Prosedur

Alat dan bahan mula-mula disiapkan. Dimasukkan air liur dari

relawan secukupnya dalam cawan petri yang telah disterilkan dan dalam tertutup.

Kemudian diambil kaca preparat yang telah direndam dalam alkohol, dilap

menggunakan kapas yang telah ditetesi etanol 95% hingga kesat (bebas lemak).

Setelah itu dibuat olesan bakteri secara aseptis di dekat api setipis-tipisnya

menggunakan ose yang telah dibakar hingga berpijar sebelumnya dan didinginkan

di dekat api, kemudian digambar lingkaran tempat mengoeskan bakteri di

permukaan bawah kaca preparat menggunakan spidol. Kemudian difiksasikan

dengan melewatkan kaca di dekat api. Setelah dingin, kaca preparat diletakkan

diatas bak pewarnaan, daerah yang telah diolesi sampel air liur diteteskan dengan

salah satu zat warna, kemudian dibiarkan selama beberapa waktu. Bila digunakan

karbol fuksin, dibiarkan olesan terwarnai selama 5 menit. Bila digunakan biru

metilen, dibiarkan olesan terwarnai selama 1-2 menit, Sedang bila digunakan karbol

gentian violet, biarkan olesan terwarnai selama 15-30 detik.

Setelah ditetesi zat warna dan dibiarkan selama beberapa waktu, preparat

dimiringkan agar cairan pewarna mengalir ke bak pewarnaan, setelah itu preparat


8/22

dibilas dengan air suling dengan cara dilewatkan dari salah satu sisi preparat ke sisi

yang lain. Preparat kemudian dikeringkan dengan kertas saring. Setelah itu diteteskan

sedikit minyak emersi pada preparat, dan bakteri dilihat dengan menggunakan

mikroskop. Hasil yang terlihat pada mikroskop kemudian digambar pada buku

gambar sesuai dengan warna yang dihasilkan dari setiap pewarna.

VI.Data Pengamatan

VII. Pembahasan

Pada praktikum Mikrobiologi Farmasi kali ini dilakukan pewarnaan tunggal

dari sampel bakteri yang diperoleh dari air liur relawan. Air liur atau saliva adalah cairan

bening yang dihasilkan dalam mulut manusia yang disekresikan dari kelenjar ludah.

Saliva mengandung zat-zat seperti elektrolit, mukosa, enzim, dan beberapa senyawa

antibakteri seperi tiosianat dan imunoglobulin. Namun selain zat-zat tersebut, saliva juga

mengandung bakteri flora normal yang tidak menggangu sistem imun manusia.

Prosedur pelaksanaan praktikum dimulai dari pemindahan air liur relawan

dari mulut ke cawan petri yang telah disterilisasi, kemudian ditutup untuk mencegah

adanya kontak dengan udara yang apabila terdapat mikroorganisme didalamnya dapat


9/22

mempengaruhi hasil yang diamati. Digunakan kaca preparat yang telah disterilisasi

dengan direndam dalam alkohol dan disapukan dengan kapas yang telah ditetesi alkohol

agar kotoran-kotoran berupa lemak atau material lainnya di permukaan preparat dapat

disingkirkan.

Metode pelaksanaan praktikum ini dilakukan secara aseptis dimana setiap

perlakuan yang melibatkan alat yang bersentuhan langsung dengan sampel harus

disterilkan terlebih dahulu dan selalu di dekat api, agar tidak adanya kontaminan yang

mempengaruhi hasil pengamatan. Untuk cawan petri harus disterilkan dengan autoklaf,

sedangkan ose dibakar di api hingga berpijar, kemudian didinginkan di dekat api. Ose

penting untuk didinginkan agar ketika menyentuh sampel tidak membunuh bakteri yang

terdapat pada sampel tersebut.

Maka sebelum pengolesan sampel ke kaca preparat, terlebih dahulu

pembakar spiritus dinyalakan. Ose kemudian dibakar di api hingga berpijar dan

didinginkan, setelah itu cawan petri dibuka dan lubangnya difiksasikan di dekat api agar

tidak ada bakteri yang masuk. Sampel diambil dengan ose yang telah dingin, kemudian

dioleskan diatas kaca preparat, pengolesan sampel harus setipis mungkin agar tidak ada

bakteri yang menumpuk dan bakteri mudah dilihat, setelah dioleskan lubang pada cawan

kembali difiksasikan dan segera ditutup. Tempat pengolesan sampel tadi ditandai dengan

spidol di permukaan bawah preparat, agar pada saat pemberian zat pewarna dan

pengamatan melalui mikroskop lebih mudah. Setelah itu preparat dilewatkan di api agar

bakteri menempel pada permukaan preparat. Preparat tidak boleh dilewatkan di api terlalu

lama, karena dapat membunuh bakteri.

Setelah preparat yang mengandung sampel tersedia, diambil pewarna karbon

gentian violet dan diteteskan diatas permukaan preparat yang telah diolesi sampel dan

didiamkan selama 30 detik. Pendiaman ini dilakukan agar warna dapat diabsorbsi oleh

bakteri sehingga dapat dilihat bentuknya di mikroskop. Prosedur yang sama juga

dilakukan untuk pewarna metilen blue hanya saja didiamkan selama 2 menit agar warna

dapat diabsorbsi.

Hasil pengamatan menunjukkan adanya bakteri berbentuk cocci yang

menyerap warna biru dari metilen blue dan warna merah-ungu dari karbol gentian violet.

Hasil ini dapat diamati karena Selsel bakteri mempunyai muatan yang agak negatif bila

pH lingkungannya mendekati netral. Muatan negatif dari sel bakteri akan bergabung


10/22

dengan muatan positif dari ion zat warna misalnya methylen blue, sehingga selnya akan

berwarna. Perbedaan muatan inilah yang menyebabkan adanya ikatan atau gabungan

antara zat warna dan sel bakteri

Pewarnaan tunggal ini merupakan teknik pewarnaan sederhana yang

bertujuan untuk melihat bentuk sel, bentuk, dan ukurannya dan tidak membutuhkan reaksi

kompleks, sehingga prosesnya tidak panjang. Namun karena keterbatasan alat, perbesaran

yang digunakan pada mikroskop tidak begitu memadai untuk melihat struktur yang jelas

dari suatu bakteri

VIII. Kesimpulan

Ukuran, bentuk dan struktur-struktur tertentu dari bakteri, dengan

menggunakan satu macam zat pewarna.


11/22

DAFTAR PUSTAKA

Dwidjoseputro. 1998.Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Penerbit Djambatan.

Entjang, I. 2003.Mikrobiologi dan Parasitologi untuk Akademi Keperawatan.

Citra Aditya Bakti. Bandung.

Lay, Bibiana. 1994 .Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta : Rajawali

Lestari, Rina. 2013. MAKALAH PEWARNAAN SEDERHANA, NEGATIF,

KAPSUL dan GRAM. Tersedia online dihttps://www.academia.edu/10414811/Pewarnaan_Bakteri_1_MAKALAH_PEWARNAA

N_SEDERHANA_NEGATIF_KAPSUL_dan_GRAM

Volk, W. A. dan Margareth F. W., 1998.Mikrobiologi Dasar Jilid I. Jakarta :

Erlangga.

Waluyo, Iud. 2004.Mikrobiologi Umum. Malang: UMM Press.
https://www.academia.edu/10414811/Pewarnaan_Bakteri_1_MAKALAH_PEWARNAAN_SEDERHANA_NEGATIF_KAPSUL_dan_GRAMhttps://www.academia.edu/10414811/Pewarnaan_Bakteri_1_MAKALAH_PEWARNAAN_SEDERHANA_NEGATIF_KAPSUL_dan_GRAMhttps://www.academia.edu/10414811/Pewarnaan_Bakteri_1_MAKALAH_PEWARNAAN_SEDERHANA_NEGATIF_KAPSUL_dan_GRAMhttps://www.academia.edu/10414811/Pewarnaan_Bakteri_1_MAKALAH_PEWARNAAN_SEDERHANA_NEGATIF_KAPSUL_dan_GRAMhttps://www.academia.edu/10414811/Pewarnaan_Bakteri_1_MAKALAH_PEWARNAAN_SEDERHANA_NEGATIF_KAPSUL_dan_GRAM


12/22

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI FARMASI

PEWARNAAN DIFFERENSIAL

Senin, 2 Maret 2015

Kelompok I

Senin, Pukul 13.0016.00 WIB

Nama NPMPopy Sarah Chairunnisa 260110130136

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS PADJADJARAN

2015

Nilai TTD

(Dhiya) (Emanuella) (Puspagita)


13/22

IX.

Tujuan

Mengamati dua kelompok bakteri yaitu Gram positif dan Gram negatif,

dengan menggunakan prosedur pewarnaan Gram, Memahami setiap langkah dan

reaksi-reaksi kimia yang terjadi dalam prosedur tersebut.

X.

Prinsip

1. Ikatan ion

Pewarnaan bakteri didasarkan atas adanya ikatan ion antara komponen

seluler dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarnaan yang disebut

kromogen. Terjadi ikatan ion karena adanya muatan listrik baik pada

komponen seluler maupun pada pewarnaan. Berdsarkan adanya muatan ini

maka dapat dibedakan pewarna asam dan pewarna basa.

2. Pewarnaan sederhana

Pewarnaan sederhana didasarkan pada zat warna yang digunakan hanya

terdiri dari satu zat yang dilarutkan dalam bahan pelarut ya

3. Teknik aseptis

Teknik aseptis adalah proses tanpa kontaminasi untuk menjamin preparasi

bebas dari mikroba kontaminan. Teknik aseptic digunakan sepanjang

percobaan berlangsung baik alat, bahan, lingkungan sekitar maupun

praktikan. Untuk alat dan bahan dapat diterapkan metode sterilisasi.

4. Absorpsi

suatu fenomena fisika/kimia atau proses atom, molekul, dan ion

memasuki suatu fase besar gas, cair, atau padat.

XI.

Teori Dasar

Teknik pewarnaan warna pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat

macam yaitu pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan diferensial

dan pengecatan struktural. Pemberian warna pada bakteri atau jasad- jasad renik

lain dengan menggunakan larutan tunggal suatu pewarna pada lapisan tipis, atau

olesan, yang sudah difiksasi, dinamakan pewarnaan sederhana. Prosedur

pewarnaan yang menampilkan perbedaan di antara sel-sel microbe atau bagian-


14/22

bagian sel microbe disebut teknik pewarnaan diferensial. Sedangkan pengecatan

struktural hanya mewarnai satu bagian dari sel sehingga dapat membedakan

bagian-bagian dari sel. Termasuk dalam pengecatan ini adalah pengecatan

endospora, flagella dan pengecatan kapsul (waluyo, 2010).

Proses pewarnaan diferensial ini memerlukan 4 jenis reagen. Bakteri terbagi

atas dua kelompok berdasarkan pewarnaan ini, yaitu bakteri gram positif dan

bakteri gram negatif. Perbedaan ini berdasarkan warna yang dapat dipertahankan

bakteri. Reagen pertama disebut warna dasar, berupa pewarna basa, jadi pewarna

ini akan mewarnai dengan jelas. Reagen kedua disebut bahan pencuci warna(decolorizing agent). Tercuci tidaknya warna dasar tergantung pada komposisi

dinding sel, bilakomponen dinding sel kuat mengikat warna, maka warna tidak

akan tercuci sedangkan bila komponen dinding sel tidak kuat menelan warna

dasar, maka warna akan tercuci. Reagen terakhir adalah warna pembanding, bila

warna tidak tercuci maka warna pembanding akan terlihat, yang terlihat pada hasil

akhir tetap warna dasar. Bakteri hidup sulit untuk dilihat dengan mikroskop

cahaya terang biasa karena bakteri itu tampak tidak berwarna jika diamati secara

sendiri, walaupun biakannya secara keseluruhan mungkin berwarna. Bakteri

sering diamati dalam keadaan olesan terwarnai daripada dalam keadaan hidup.

Yang dimaksud dengan bakteri terwarnai adalah oganisme yang telah diwarnai

dengan zat pewarna kimia agar mudah dilihat dan dipelajari (Volk dan Whleer,

1998).

Sel-sel mikroorganisme yang tidak diwarnai umumnya tampak hampir

tembus pandang (transparan) bila diamati dengan mikroskop cahaya biasa hinggasukar dilihat karena sitoplasma selnya mempunyai indeks bias yang hampir sama

dengan indeks bias lingkungannya yang bersifat cair. Kontras antara sel dan latar

belakangnya dapat dipertajam dengan cara mewarnai sel-sel tersebut dengan zat-

zat warna (Hadioetomo, 1990).

Pada umumnya, olesan bakteri terwarnai mengungkapkan ukuran, bentuk,

susunan dan adanya struktur internal seperti spora dan butiran zat pewarna khusus

diperlukan untuk melihat bentuk kapsul ataupun flagella, dan hal-hal terperinci


15/22

tertentu di dalam sel. Zat pewarna adalah garam yang terdiri atas ion positif dan

ion negatif, yang salah satu diantaranya berwarna (Volk dan Whleer, 1998).

Sel bakteri dapat teramati dengan jelas jika digunakan mikroskop dengan

perbesaran 100x10 yang ditambah minyak imersi. Jika dibuat preparat ulas tanpa

pewarnaan, sel bakteri sulit terlihat. Pewarnaan bertujuan untuk memperjelas sel

bakteri dengan menempelkan zat warna ke permukaan sel bakteri. Zat warna

dapat mengabsorbsi dan membiaskan cahaya, sehingga kontras sel bakteri dengan

sekelilingnya ditingkatka. Zat warna yang digunakan bersifat asam atau basa.

Pada zat warna basa, bagian yang berperan dalam memberikan warna disebutkromofor dan mempunyai muatan positif. Sebaliknya pada zat warna asam bagian

yang berperan memberikan zat warna memiliki muatan negatif. Zat warna basa

lebih banyak digunakan karena muatan negatif banyak banyak ditemukan pada

permukaan sel. Contoh zat warna asam antara lain Crystal Violet, Methylene

Blue, Safranin, Base Fuchsin, Malachite Green dll. Sedangkan zat warna basa

antara lain Eosin, Congo Red dll (Irawan, 2008).

Pewarna yang digunakan pada umumnya berbentuk senyawa kimia khusus

yang akan memberikan reaksi kalu mengenai bagian tubuh jasad. Karena

pewarnaan tersebut berbentuk ion yang bermuatan positif ataupun negative. Sel

bakteri bermuatan mendekati negatif kalau dalam keadaan pH mendekati netral.

Sehingga kalau kita memberikan pewarnaan yang bermuatan positif ataupun

negatif (Suriawiria, 1985).

Pewarnaan Sederhana (Pewarnaan Positif). Sebelum dilakukan pewarnaan dibuat

ulasan bakteri di atas object glass yang kemudian difiksasi. Jangan menggunakansuspensi bakteri yang terlalu padat, tapi jika suspensi bakteri terlalu encer, maka

akan diperoleh kesulitan saat mencari bakteri dengan mikroskop. Fiksasi

bertujuan untuk mematikan bakteri dan melekatkan sel bakteri pada object glass

tanpa merusak struktur selnya (Campbell dan Reece, 2005)).

Pewarnaan Gram adalah pewarnaan diferensial yang sangat berguna dan

paling banyak digunakan dalam laboratorium mikrobiologi, karena merupakan

tahapan penting dalam langkah awal identifikasi. Pewarnaan ini didasarkan pada


16/22

tebal atau tipisnya lapisan peptidoglikan di dinding sel dan banyak sedikitnya

lapisan lemak pada membran sel bakteri. Jenis bakteri berdasarkan pewarnaan

gram dibagi menjadi dua yaitu gram positif dan gram negatif. Bakteri gram positif

memiliki dinding sel yang tebal dan membran sel selapis. Sedangkan baktri gram

negatif mempunyai dinding sel tipis yang berada di antara dua lapis membran sel

(Irawan, 2008).

XII. Alat dan Bahan

Alat

1. Bak pewarna

2.

Cawan petri

3. Kaca obyek

4.

Kapas

5. kertas saring

6.

Mikroskop majemuk7. Ose

8. pembakar spirtus

Bahan

2.

Zat warna karbol gentian violet, lugol (iodium : kalium iodium : air

suling 1 : 2: 100) dan air fuksin.

3.

Suspensi campuran bakteriE. coli dan S. aureus.4.

Alkohol 70 %

5. air suling dalam botol semprot

6.

minyak emersi,

Gambar Alat

1. Bak Pewarna


17/22

2.

kaca obyek

3.

Kapas

4. Kertas Saring

5. Mikroskop Majemuk


18/22

6.

Ose

7.

Pembakar Spiritus

XIII.

Prosedur

Alat dan bahan mula-mula disiapkan. Diambil kaca preparat yang

telah direndam dalam alkohol, dilap menggunakan kapas yang telah ditetesi etanol

95% hingga kesat (bebas lemak). Setelah itu dibuat olesan bakteri dari suspensi

campuran bakteriE. coli dan S. aureussecara aseptis di dekat api setipis-tipisnya,

kemudian digambar lingkaran tempat mengoeskan bakteri di permukaan bawah

kaca preparat menggunakan spidol. Kemudian difiksasikan dengan melewatkan

kaca di dekat api. Setelah dingin, kaca preparat diletakkan diatas bak pewarnaan,

daerah yang telah diolesi sampel diteteskan dengan pewarna karbol gentian violet,

setelah itu didiamkan selama 1 menit. Setelah 1 menit preparat dimiringkan agar

cairan pewarna mengalir ke bak pewarnaan, setelah itu preparat dibilas dengan air

suling dengan cara dilewatkan dari salah satu sisi preparat ke sisi yang lain.

Daerah yang diolesi bakteri kemudian diteteskan dengan cairan lugol

dan didiamkan selama 2 menit, setelah itu preparat dimiringkan agar cairan

pewarna mengalir ke bak pewarnaan, setelah itu preparat dibilas dengan air suling.

Daerah yang diolesi bakteri kemudian dicuci dengan pemucat alkohol

95% tetes demi tetes selama 30 detik lalu dibilas dengan air suling. Setelah itu

daerah tadi diteteskan dengan cairan fuksin dan didiamkan selama 30 detik lalu

dibilas dengan air suling.


19/22

Preparat kemudian dikeringkan dengan kertas saring. Setelah itu

diteteskan sedikit minyak emersi pada preparat, dan bakteri dilihat dengan

menggunakan mikroskop. Hasil yang terlihat pada mikroskop kemudian digambar

pada buku gambar sesuai dengan warna yang dihasilkan dari setiap pewarna.

XIV. Data Pengamatan

XV.Pembahasan

Pada praktikum Mikrobiologi Farmasi kali ini dilakukan pewarnaan

differensial dari sampel suspensi bakteri E.coli dan S.aureus. Kedua bakteri ini

memiliki komponen dinding sel yang berbeda sehingga dalam tahapan

pewarnaannya akan menghasilkan warna yang berbeda.

Prosedur pelaksanaan praktikum dimulai dari pembersihan kaca

preparat yang telah disterilisasi dengan direndam dalam alkohol dan disapukan

dengan kapas yang telah ditetesi alkohol agar kotoran-kotoran berupa lemak atau

material lainnya di permukaan preparat dapat disingkirkan.


20/22

Metode pelaksanaan praktikum ini dilakukan secara aseptis dimana

setiap perlakuan yang melibatkan alat yang bersentuhan langsung dengan sampel

harus disterilkan terlebih dahulu dan selalu di dekat api, agar tidak adanya

kontaminan yang mempengaruhi hasil pengamatan. Ose harus dibakar di api

hingga berpijar, kemudian didinginkan di dekat api. Ose penting untuk

didinginkan agar ketika menyentuh sampel tidak membunuh bakteri yang terdapat

pada sampel tersebut.

Maka sebelum pengolesan sampel ke kaca preparat, terlebih dahulu

pembakar spiritus dinyalakan. Ose kemudian dibakar di api hingga berpijar dandidinginkan, setelah itu penyumbat tabung suspensi dibuka dan lubangnya

difiksasikan di dekat api agar tidak ada kontaminan yang masuk. Sampel diambil

dengan ose yang telah dingin, kemudian dioleskan diatas kaca preparat,

pengolesan sampel harus setipis mungkin agar tidak ada bakteri yang menumpuk

dan bakteri mudah dilihat, setelah dioleskan lubang tabung kembali difiksasikan

dan segera ditutup. Tempat pengolesan sampel tadi ditandai dengan spidol di

permukaan bawah preparat, agar pada saat pemberian zat pewarna dan

pengamatan melalui mikroskop lebih mudah. Setelah itu preparat dilewatkan di

api agar bakteri menempel pada permukaan preparat. Preparat tidak boleh

dilewatkan di api terlalu lama, karena dapat membunuh bakteri.

Setelah preparat yang mengandung sampel tersedia, diambil pewarna

karbon gentian violet dan diteteskan diatas permukaan preparat yang telah diolesi

sampel dan didiamkan selama 1 menit. Setelah itu preparat dimiringkan untuk

mengalirkan pewarna ke bak pewarnaan dan preparat dibilas dengan air suling

Hasil pengamatan menunjukkan adanya bakteri berbentuk cocci yang

menyerap warna biru dan bakteri berbentuk basil yang menyerap warna merah-

ungu.

Pewarnaan ini dapat membagi bakteri menjadi gram positif dan gram

negative berdasarkan kemampuannya untuk menahan pewarna primer (kristal

ungu) atau kehilangan warna primer dan menerima warna tandingan (safranin).


21/22

Bakteri gram positif menunjukkan warna biru atau ungu dengan pewarnaan ini,

sedangkan bakteri gram negatif menunjukkan warna merah.

Perbedaan respon terhadap mekanisme pewarnaan gram pada bakteri

adalah didasarkan pada struktur dan komposisi dinding sel bakteri. Bakteri gram

positif mengandung protein dan gram negatif mengandung lemak dalam

presentase lebih tinggi dan dinding selnya tipis. Pemberian alkohol (etanol) pada

praktikum pewarnaan bakteri, menyebabkan terekstraksi lipid sehingga

memperbesar permeabilitas dinding sel. Pewarnaan fuksin masuk ke dalam sel

dan menyebabkan sel menjadi berwarna merah pada bakteri gram negatifsedangkan pada bakteri gram positif dinding selnya terdehidrasi dengan perlakuan

alkohol, pori pori mengkerut, daya rembes dinding sel dan membran menurun

sehingga pewarna safranin tidak dapat masuk sehingga sel berwarna ungu, yang

merupakan warna dari Kristal Violet.

XVI. Kesimpulan

Dua kelompok bakteri yaitu Gram positif dan Gram negatifdapat diamati

dengan menggunakan prosedur pewarnaan Gram, serta setiap langkah dan reaksi-

reaksi kimia yang terjadi dalam prosedur tersebut dapat dipahami.


22/22

DAFTAR PUSTAKA

Campbell, N. A. Dan Reece, J. B., 2005.Biologi Jilid 2.Erlangga. Jakarta.Hadioetomo, R, S., 1990.Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Gramedia. Jakarta.

Volk, W. A. dan Margareth F. W., 1998.Mikrobiologi Dasar Jilid I. Jakarta :

Erlangga.

Waluyo, Iud. 2004.Mikrobiologi Umum. Malang: UMM Press.

pewarnaan tunggal dan differensial_popy sarah c_260110130136

Documents