tes tes biokimia

7/23/2019 Tes Tes Biokimia

1/23

Tes tes biokimia


2/23

Kegunaan tes tes biokimia

1. u/ melihat met bakteri thp KH & zat lain yg

berhub.

2. Met bakteri thp protein & as amino

3. Met lemak oleh bakteri

4. Enzim-enzim yg dihasilkan oleh bakteri


3/23

Tes oksido-fermentasi

Tujuan: lihat pemecahan KH dlm keadaanaerobik/oksidatif a/ anaerobik/fermentatif

Cara:

1. Bakteri ditanam pd 2 medium semisolidmedium OF. Berisi glukosa & bromotymol

blue dgn indikator pH jadi kuning bila pH

asam2. Bgn atas 1 medium ditutup parafin cair( u/

anaerob) lainnya biar terbuka (aerob)

3. Diinkubasi semalam 35oC


4/23

Hasil : positif bila jadi kuning ada pemecahan glukosa, bl neg.lanjutkan sp 4 hr baru bilang neg.

Oksidatif tabung terbuka jadi kuning, yg tertutup tak berubah

Fermentatif; kedua tabung jadi kuning

Non-oksidatif: kedua tabung tak berubah selama 4 hr.

Contoh: P aeruginosa: oksidatif u/ glukosa, non-fermentatif u/maltosa; Alkaligenes faecalis, non-oksidatif u/ glukosa &maltosa

Note: Tes OF hanya u/ basil yg tak meragikan gula-gula sbgpengganti tex peragian gula-gula dgn medium TSI


5/23

Tes peragian gula-gula

Tujuan: melihat kemampuan bakteri meragikan gula-gula t3 dgn hasilkan asam & gas a/ asam saja.

Cara01

Bakteri ditanam dlm medium cair ada pepton dr salahsatu gula: glukosa, laktosa, sukrosa, maltosamannitol.

Indikator pH phenol red jadi kuning bl asam

Tabung durham u/ tanda ada gas.Hasil: pos; ada peragian KH warna jadi kuning

Neg. tak ada peragian KH, warna tetap merah.


6/23

Tes peragian gula-gula02

Cara02

Bakteri ditanam TSI medium dgn tusuk ke butt & olespd slant, ada 3 KH: glukosa, laktosa, sukrosa, FeCL,As amino dgn gugus sulfur.

Indikator pH phenol red jadi kuning bl asamPecah dan terangkat agar u/ tanda ada gas.

Hasil: Alkali/asam; ada peragian KH scr fermentasi;butt kuning (asam) slant merah (alkali)

Asam/asam; ada peragian KH scr aerobik/anaerobikslant & butt kuning (asam/asam)

Alkali/alkali; tak ada perubahan tetap merah (alkali)


7/23

Tes methyl red

Tujuan: melihat dihasilkan asam stabil pd pemecahan

glukosa

Cara:

Tanam bakteri pd medium MR-VP yg ada pepton &glukosa. Inkubasi 1-2 hr 35oC kmd tetesi Methyl red.

Hasil: pos; dihasilkan asam stabil (merah)E coli

Neg.; tak dihasilkan asam stabil (kuning)enterobactercloacae


8/23

Tes Voges-Proskauer

Tujuan: melihat dihasilkan asam tidak stabil dr pecahanglukosa, shg mudah terurai jadi alkohol kmd jadiacetyl methyl carbinol a/ 2,3 butylene glycol

Cara: bakteri ditanam dlm medium MR-VP inkubasi 1-2hr kmd tambah alfa naftol 5% kmd beberapa saat dgnpotasium hidroksida (KOH) 40%

Hasil: pos; cincin merah diantara lap. Alfa naftol dan

KOH artinya ada acetyl methyl carbinol krn terbtkasam tak stabil dr peragian glukosaenterobactercloacae

Neg. tak ada cincin merah---E coli


9/23

Tes Hidrogen-Sulfida (H2S)

Tujuan: melihat dihasilkan a/ tidak H2S dr pemecahan

asam amino oleh bakteri

Cara: bakteri ditanam pd medium TSI a/ SIM yg ada

asam amino dgn gugus sulfur, ferro chlorida laluinkubasi semalam

Hasil: pos; ada H2S dgn terbtk FeS (hitam) hasil ikatan

antara H2S dan FeCl2Proteus vulgaris

Neg.; tak ada perub (tak ada hitam)shigella sonnei


10/23

Tes Indol

Tujuan: melihat kemampuan bakteri hasilkan indol hslpecahan tryptofan (asam amino lain) yg ada dlmpepton

Cara:bakteri ditanam medium TSI a/ SIM yg adatryptofan & FeCl2. tes ini u/ pembentukan H2S danmotility bakteri. Inkubasi semalam & tetesi lar.Kovac pd permukaan medium.

Hasil: pos; reagensia jadi merah--- E coliNeg. Reagensia tetap coklat muda--- enterobacter

cloacae


11/23


12/23

Tes Dekarboksilase

Tujuan: melihat bakteri bisa membentuk amin dr

asam amino dgn rx dekarboksilase.

Cara: bakteri ditanam dlm butt & slant medium

yg ada asam amino: lysine, arginine a/

ornithine. Inkubasi semalam periksa sp 4 hr.

Mis. Tanam pd Lysin Iron Agar (LIA) ada

pepton, ekstrak yeast, lysine, glukose iron

citrate, bromcresol purple indokator agar.


13/23

Hasil: pos; jadi ungu, krn dekarboksilase hanya

pd pH asam, jg dipakai u/ melihat bakteri bisa

meragikan glukosa

Neg. tetap kuning, tapi bl inkubasi lama terj

alkalisasi shg indikator jadi ungu.

LIA bisa melihat H2S juga ada warna hitam pd

agar (FeS2)


14/23

Tes urease

Tujuan: melihat bakteri bisa hasilkan urease a/ tidak

Cara: bakteri ditanam pd medium urease yg ada urea

dgn neutral red sbg indikator pH inkubasi & baca

hasilnyaHasil: pos; warna jadi merah krn pH jadi alkalis akibat

tbtk ammonia dr urea dgn bantuan enzim urease.

proteus vulgaris

Neg. warna pH indikator tak berubah jadi merah---E

coli


15/23

Tes phenilalanine diaminase

Tujuan: menunjukkan terjadinya diaminase dr phenilalanine shg dihasilkanphenylpiruvic acid.

Prinsip tes: alfa keto acid berx dgn ferri chlorida btk warna hijau(phenylpiruvic acid)

Cara:

1. Siapkan reagen ferri chlorida2. Tanam bakteri pd agar miring yg ada kandungan phenylalanine lalu

inkubasi

3. Tetesi 5 tetes reagen dlm biakan bakteri pd agar

4. Goyangkan shg rx lebih intensif

5. Bila ada warna hijau berarti ada phenylpyruvic acid yg akan hilang dlm

10 mntKontrol pos P vulgaris

Neg. E coli


16/23

Tes Oksidase

Tujuan: melihat bakteri yg dites hasilkanoksidase atau tidak

Cara01: ambil sdkt koloni gosokkan pd kertas

saring yg sebelumnya dibasahi dgn lartetramethyl p diamine dihydrochloride

Pos; warna reagen jadi ungu tua dlm 5 mnt

Neg. ; tak berubah warna reagen


17/23

Tes Oksidase02

Cara02: tetesi koloni yg dicurigai dgn lar

tetramethyl p diamine dyhydrochloride

Pos; koloni berubah warna mula-mula merah

muda pelan-pelan jadi ungu tua

Neg. ; koloni tak berubah

Note: segera buat pd saat koloni merah muda(bakteri masih hidup) ungu tua (sudah mati)

Kontrol pos; P aeruginosa Neg. E coli


18/23

Tes katalase

Tujuan: melihat apakah bakteri yg dites hasilkan

enzim katalase a/ tidak

Cara: biakkan bakteri pd medium cairan a/ pd

agar miring kmd tetesi H2O2 5%

Hasil; pos; ada terbtk gel udaraS aureus

H2O2--- H2O + CO2Neg. tak ada gel udara--- St. faecalis


19/23

Tes Koagulase

Tujuan: melihat bakteri yg dites hasilkan

koagulase a/ tidak

Cara 01

Masukkan dlm 1 tab rx steril 1 ml biakan bakteri

yg akan dites & tambahkan 1 ml plasma steril

inkubasi 4 jam 36oC kmd lihat hasilnya.


20/23

Cara 02: buat suspensi tebal bakteri yg akan dites

dlm lar grm fisiologis steril, kmd tambah 1 ml

plasma steril inkubasi 4 jam & baca hasilnya

Cara 03: buat suspensi di atas kaca benda &

tetesi dgn plasma goyang pelan dan perhatikan

hasilnya


21/23

Hasil tes:

Positif: terjadi koagulase--- S aureus

Negatif: tak terjadi koagulase---S epidermidis


22/23

Tes kepekaan antibiotik

Guna:

1. Pedoman dlm memilih AB tepat u/ terapi

2. Pola kepekaan bakteri t3 thp AB

Rutin mnt Kirby and Bauer (tes difusi) gunakan

disc (cakram) dgn konsentrasi sesuai standarNCCLS USA


23/23

Tes kepekaan antibiotik

Cara:

Suspensi bakteri steril nacl 0.9% sesuai McFarland 0.5; diambil dgn kapas lidi steril ,

dioles merata pd medium u/ tes kepekaan,cakram AB diletakkan mendatar, inkubasisemalam 35oC, diukur zona hambatan dgnkaliper u/ masing AB & sesuaikan dgnstandar dr NCCLS apakah resisten atausensitif.

tes tes biokimia

Documents