wanda aziizah rahayu p1 fkm2015

Download Wanda Aziizah Rahayu P1 FKM2015

If you can't read please download the document

Upload: wandaar

Post on 28-Jan-2016

28 views

Category:

Documents


12 download

DESCRIPTION

mikrobilogi dasar

TRANSCRIPT

Jurnal Praktikum Mikrobiologi DasarLaboraturium Mikrobiologi dan Genetika Molekuler, Biologi, FMIPA UnmulPeralatan, Sterilisasi dan Media Pertumbuhan MikrobaWanda Aziizah Rahayu, Bayu Resandy, Geafanni Emilia Alya, Nur Jannah, Nuraenun Ayu L, Wirda Alawiah, dan Wulandari.Kelompok 1A Praktikum Mikrobiologi DasarFakultas Kesehatan MasyarakatAbstrakDalam prakteknya sterilisasi alat medium dapat dilakukan secara pemanasan, penyinaran, dan penyaringan. Adapun media pertumbuhan mikroba yang digunakan adalah media hidup, media buatan, dan lain - lain. Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui cara mensterilkan dan fungsi dari peralatan yang akan digunakan dalam praktikum dan melakukan pembuatan medium dasar. Bahan yang digunakan yaitu medium PDA yaitu ekstrak kentang 250 ml, dextrose 2,5 gram, dan agar 3,75 gram. Medium NA ekstrak daging 250 ml, agar 3,75 gram, dan pepton 1,25 gram. Hasil yang didapat pada praktikum ini ialah untuk membuat medium kita harus teliti sehingga hasil akhirnya menjadi sempurna dengan cara mensterilkan alat-alat praktikum dengan metode uap bertekanan atau autoclave.Kata Kunci: Sterilisasi/ Potato Dextrose Agar/ Nutrient Agar Tanggal Praktikum : 23 November 2015; Diserahkan tanggal 27 November 2015PendahuluanMikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari tentang mikroorganisme yang tidak dapat dilihat dengan mata telanjang untuk meneliti apa saja yang terkandung di dalam mikroorganisme. Dalam meneliti mikroorganisme diperlukan teknik dan cara-cara khusus [4].Didalam pekerjaan mikrobiologi seringkali kita tidak terlepas dari Tentang fungsi dan sifat-sifat dari alat yang digunakan. Peralatan yang digunakan pada laboratorium mikrobiologi yaitu berupa alat-alat gelas antara lain: tabung reaksi, cawan petri, pipet ukur dan pipet volumetrik, labu ukur, labu erlenmeyer, gelas piala, pH meter, gelas arloji, termometer, botol tetes, pembakar spiritus, kaki tiga dengan kawat alat-alat yang berada dalam laboratorium. Untuk itu diperlukan pemahaman [4]. Untuk mempelajari serta untuk meneliti mikroorganisme baik sifat maupun karakteristiknya, tentu diperlukan adanya pengenalan alat yang akan digunakan serta mengetahui cara penggunaan alatalat yang berhubungan dengan penelitian yang akan dilakukan [4].Alat-alat yang digunakan dalam praktikum mikrobiologi juga harus dalam keadaan steril atau bebas dari kuman serta bakteri, virus dan jamur. Dan untuk mensterilkannya diperlukan pula pengetahuanAsisten pendamping: 1.Tunik Khoiriyah 2.Yusnaini 3.Ersaniany 4.Nurul PratiwiQodrie, 4.Cep Hikmat Maulan Yusuf 5. 6.Riska PrihatiningsihPenanggung jawab: Koordiantor mata Kuliah Mikrobiologi Dasar: Dr. rer. nat. Bodhi Dharma M.Si dan Eko Kusumawati S. Si, M. P Serta Kepala Laboratorium Mikrobiologi dan Genetika Molekuler Dr. rer. nat. Bodhi Dharma M.Si, FMIPA Unmultentang cara- cara/ teknik sterilisasi. Hal ini dilakukan karena alat- alat yang digunakan pada laboratorium mikrobiologi memiliki teknik sterilisasi yang berbeda. Sterilisasi merupakan Metode praktis yang dirancang untuk membersihkan dari mikroorganisme. [4] Pada tahun 1832 William Henry, seorang Dokter Manchester, mempelajari efek panas pada penularan dengan menempatkan bahan yang terkontaminasi, yaitu pakaian yang dikenakan oleh penderita dari tifus dan demam, di udara dipanaskan oleh air kemudian dalam bejana yang ditekan. Dia menyadari bahwa dia bisa mencapai suhu lebih tinggi dari 100 C dengan menggunakan bejana tertutup dilengkapi dengan katup pengaman yang tepat. Ia menemukan bahwa pakaian diperlakukan bisa dikenakan dengan impunitas oleh orang lain, yang tidak kontrak penyakit. Louis Pasteur juga menggunakan bejana tekanan dengan katup pengaman untuk sterilisasi [1].Komposisi media tumbuh bervariasi tergantung pada jenis mikroorganisme yang akan ditumbuhkan, namum semua mikroorganisme mempunyai kebutuhan dasar yang sama dalam media tumbuhnya, yaitu air, karbon, energi, mineral dan faktor tumbuh.Derajat keasaman (pH) media sangat menentukan pertumbuhan mikroorganisme, pada ummnya mikroorganisme hidup pada kisarah pH netral (7), tetapi mikroorganisme patogen biasanya hdup pada pH basa. Pada praktikum ini kita menggunakan media NA dan PDA. Praktikum ini bertujuan untuk sterilisasi terhadap peralatan yang akan digunakan dalam pembuatan media. Manfaat dari praktikum ini adalah agar praktikan mengetahui bagaimana cara mensterilisasikan peralatan yang akan digunakan sebelum dipakai untuk melakukan pembuatan medium dan lai-lain.Metode Waktu dan Tempat Praktikum ini dilaksanakan pada hari Senin, 23 Novemeber 2015 pada pukul 13.00-15.30 WITA. Bertempat di Laboratorium Mikrobiologi dan Genetika Molekuler Gedung, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengatahuan Alam, Universitas Mulawaraman, Samarinda. Alat dan Bahan Alat Alat yang digunakan yaitu gelas erlenmeyer, neraca analitik, ose melengkung, ose lup, lampu Bunsen, hot plate, stirer, autoclave, cawan petri, spatula, karet gelang, kertas, air, kapas, alumunium foil, aquades, kertas label, mikropipet, blue tip, yellow tip, magnetic stirrer, batang mahnetik, vortex, incubator, pinset, kuvet, gelas ukur, shaker, dan refigator. BahanBahan yang digunakan yaitu untuk pembuatan PDA digunakan ekstrak kentang 250 ml, agar 5 gr, dan dextrose 5 gr. Untuk pembuatan NA digunakan Ekstrak Daging 250 ml, agar 3,75 gr dan peptone 2,25 gr. Cara kerja Sterilisasi AlatCara sterilisasi cawan petri yaitu dengan dibungkus dengan kertas, disisi kanan dan kiri dilipat membentuk segitiga, lalu dilipat ke bawah membentuk kotak.Media PDADimasukkan dextrose kedalam mangkuk kecil sebanyak 2,5 gram dan ditimbang menggunakan neraca analitik. Dimasukkan dextrose yang telah diukur kedalam Erlenmeyer. Dimasukkan agar kedalam mangkuk kecil sebanyak 3,75 gr dan ditimbang menggunakan neraca analitik. Dimasukkan agar yang telah dikur kedalam Erlenmeyer. Kemudian dimasukkan ekstrak kentang yang diukur menggunakam tabung ukur sebanyak 250 ml dan dimasukkan kedalam Erlenmeyer. Setelah itu dihomogenkan bahan yang telah dicampur. Ditutup mulut erlemeyer dengan menggunakan kasa yang ditumpuk menggunakan kapas sampai mulut benar-benar tertutup rapat lalu dipanaskan bahan yang telah dihomogenkan dengan hot plate sampai bahan-bahan yang terdapat di Erlenmeyer benar-benar homogen dengan sempurna. Media NA Dimasukkan pepton kedalam mangkuk kecil sebanyak 1,25 gram dan ditimbang menggunakan neraca analitik. Dimasukkan peptone yang telah diukur kedalam Erlenmeyer, dimasukkan agar kedalam mangkuk kecil sebanyak 3,75 gr. Dimasukkan agar yang sudah ditimbang tadi kedalam gelas Erlenmeyer. Dimasukkan ekstrak daging yang sudah diukur sebanyak 250 ml dan diletakkan kedalam gelas Erlenmeyer. Dihomogenkan bahan yang telah dicampur. Kemudian ditutup mulut erlenmeyer dengan menggunakan kasa yang ditumpuk dengan kapas sampai mulutnya bener-benar tertutup. Dipanasakan bahan yang telah dihomegenkan dengan hot plate sampai bahan-bahan yang terdapat di Erlenmeyer benar-benar homogen dengan sempurna Setelah dipanaskan dengan hot plate, dimasukkan Erlenmeyer kedalam autoklave dengan suhu 1210C selama 20 menit.Hasil dan Pembahasan 1.1 Peralatan dan sterilisasiNo Nama AlatKeterangan 1AutoclaveFungsinya untuk mensterilkan bahan dan alat alat dengan uap air panas bertekanan tinggi2Batang pengadukFungsinya untuk mengaduk bahan3Blue tipFungsinya untuk memindahkan cairan yang bervolume 1000 l.4Cawan petriFungsinya sebagai wadah penyimpanan dan pembuatan media.5Corong Fungsinya untuk memudahkan suatu larutan masuk kedalam suatu wadah6EvavoratorFungsinya untuk menguapkan bahan7Gelas ukurFungsinya untuk mengukur larutan8Hockey stickFungsinya untk meratakan media dalam cawan petri9Hot plateFungsinya untuk memanaskan bahan10InkubatorFungsinya untuk menginkubatorkan bahan12Kuvet Fungsinya untuk mengukur pertumbuhan bakteri13Lampu Bunsen/ SpiritusFungsinya untuk mensterilkan jarum ose atau bahan bahan yang terbuat dari platina atau khorm dengan cara pemijaran14Magnetic stirrerMagnetic stirrer adalah perangkat laboratorium yang menggunakan medan magnet berputar didalam cairan. 14Mikropipet Fungsinya untuk memindahkan media cair pada tempat yang satu ke tempat yang lain15Neraca analitikFungsinya untuk mengukur bahan yang akan digunakan 16Ose lupFungsinya untuk mengisolasi bakteri17Ose melengkungFungsinya untuk mengambil jamur/fungi yang berfilamen18Pinset Fungsinya untuk memndahkan atau mengambil bahan medium19PipetFungsinya untuk mengambil bahan- bahan yang bersifat cair20Shaker Fungsinya untuk mengaduk dengan otomatis21InkubatorMenginkubasi media22SpektrofotometerFungsinya untuk menghitung bakteri pada kuvet23Tabung ErlenmeyerFungsinya sebagai wadah untuk media cair24VortexFungsinya untuk menghomogen bahan25OvenMenginkubasi media26Yellow tipFungsinya untuk memindahkan cairan yang bervolume 100 l.Pada tabel diatas dapat kita lihat berbagai macam alat dan pembuatan media. Masing-masing alat mempunyai fungsi berbeda-beda. Setiap alt tersebut harus disterilkan terlebih dahulu sebelum digunakan.Cara sterilisasi yang tepat tergantung pada jenis dan sifat bahan yang disterilkan. Pada praktikum ini digunakan sterilisasi uap bertekanan, sterilisasi uap bertekanan menggunakan autoklaf. Autoklafadalah sterilisasi untuk alat dan medium kultur jaringan. Alat-alat yang berupagelas erlenmeyer dan cawan petrisebelum digunakan harus disterilkan dahulu. Dengan pemanasan di dalam autoklaf maka bakteri dan mikrobia dapat mati akibat suhu yang tinggi (121C) dan tekanan uap air yang besar selama 20 menit.Autoklaf adalah alat steril yang memanfaatkan uap air panas bertekanan tinggi biasanya digunakan untuk mensterilkan peralatan yang tahan panas dan tidak rusak oleh panas. Sterilisasi menggunakan autoklaf merupakan cara yang paling baik karena uap air panas dengan tekanan tinggi menyebabkan penetrisi uap air panas kedalam sel-sel mikroba menjadi optimal sehingga langsung mematikan mikroba [3].Autoklaf mempunyai cara kerja yang hampir sama dengan alat masak pressure cooker, sebab alat ini merupakan sebuah bejana yang diisi air dan ditutup rapat-rapat. Autoklaf ada yang model listrik tetapi ada pula yang harus diletakkan diatas kompor gas. Jika alat ini dipanaskan, maka akan terjadi uap air yang tidak dapat keluar karena bejana tertutup rapat, sehingga tekanan di dalam autoklaf naik sampai melebihi tekanan normal [2]. Medium yang disterilkan ditempatkan di dalam autoclave selama 15-20 menit. Isi tempat air hingga batas angsang didalam bejana. Bungkus terlebih dahulu alat yang akan disterilkan. Setelah pintu autoclave ditutup rapat, barulah kran pada pipa uap dibuka dan temperatur akan terus-menerus naik sampai 1210C dengan tekanan 2 atm. Setelah sterilisasi selasai jangan langsung membuka penutup autoklaf, tetapi tunggu sebentar hingga termometer turun hingga angka nol.NoMediaKeterangan1Ekstrak kentangKomposisi Ekstrak kentang : 250 mlAgar :3,75 gramDextrose :2,5 gram2Ektrak daging sapiKomposisi :Ekstrak daging sapi : 250 mlAgar : 3,75 gramPepton : 1,25 gramPada praktikum pembuatan media NA dan PDA. Medium PDA atau disebut juga Potato Dextrose Agar merupakan media yang berasal dari ekstrak kentang, dextron, agar dan aquades, yang biasa digunakan untuk menumbuhkan jamur dan merupakan salah satu media cair. Media NA atau disebut juga dengan Nutrien Agar merupakan media yang terbuat dari agar, peptone dan aquades. Media ini digunakan untuk pertumbuhan bakteri.Salah satu media yang baik digunakan untuk membiakkan suatu organisme (bakteri atau mikroba) adalah Potato Dextrose Agar (PDA). Macam-macam media pertumbuhan Medium berdasarkan sifat fisikMedium padat, yaitu media yang mengandung agar 1-1,5% sehingga setelah dingin media menjadi padat. Medium setengah padat, yaitu media yang mengandung agar 0,3-0,4% sehingga menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. Media semi solid dibuat dengan tujuan supaya pertumbuhan mikroba menyebar ke seluruh media tetapi tidak mengalami pencampuran sempurna jika tergoyang. Medium cair yaitu media yang tidak mengandung agar, contohnya adalah NB (nutrient broth), LB (lactose broth) [5].Medium berdasarkan komposisiMedium sintesis yaitu media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis dan takarannya secara pasti, misalnya glukosa agar, mac conkey agar. Media semi sintesis yaitu media yang sebagian komposisinya diketahui secara pasti. Misalnya PDA (potato dextrose agar) yang mengandung agar, dekstrosa dan ekstrak kentang. Untuk bahan ekstrak kentang, kita tidak dapat mengetahui secara detail tentang komposisi senyawa penyusunnya. Medium non sistesis yaitu media yang dibuat dengan komposisi yang tidak dapat diketahui secara pasti dan biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya, misalnya tomato juice agar, brain heart infusion agar, pancreatic extract [5].Medium berdasarkan tujuan Media untuk isolasi. Media ini mengandung semua senyawa esensial untuk pertumbuhan mikroba, misalnya nutrient broth, blood agar. Media selektif/penghambat. Media yang selain mengandung nutrisi juga ditambah suatu zat tertentu sehingga media tersebut dapat menekan pertumbuhan mikroba lain dan merangsang pertumbuhan mikroba yang diinginkan.[5]Media diperkaya (enrichment). Media yang mengandung komponen dasar untuk pertumbuhan mikroba dan ditambah komponen kompleks seperti darah, serum, kuning telur. Media diperkaya juga bersifat selektif untuk mikroba tertentu. Bakteri yang tumbuh pada media ini tidak hanya membutuhkan nutrisi sederhana untuk berkembangbiak, tetapi membutuhkan komponen kompleks: blood tellurite agar, bile agar, serum agar . Media untuk peremajaan kultur. Media umum atau spesifik yang digunakan untuk peremajaan kultur. Media untuk menentukan kebutuhan nutrisi spesifik. Media ini digunakan untuk mendiagnosis atau menganalisis metabolisme suatu mikroba. Media untuk karakterisasi bakteri. Media yang digunakan untuk mengetahui kemampuan spesifik suatu mikroba. Kadang-kadang indikator ditambahkan untuk menunjukkan adanya perubahan kimia. Media differsial. Media ini bertujuan untuk mengidentifikasi mikroba dari campurannya berdasakan karakter spesifik yang ditunjukkan pada media diffentia [5]. Kesimpulan Kesimpulan untuk membuat medium kita harus teliti sehingga hasil akhirnya menjadi sempurna dengan cara mensterilkan alat-alat praktikum dengan metode uap bertekanan atau autoclave.Referensi Ayliffes, Hugo, dan Rusell. 2004. Principles and practice of disinfection, preservation and sterilization. Hong kong: blackwellpublishing.Halaman 5Hendrayono, D.P dan Wijayani, A. Teknik Kultur Jaringan Yogjakarta: Kanisius 2012. Halaman 55Sumasih, Sri. 2010. Untung Besar Usaha Bibit Jamur Tiram. Jakarta: PT Niaga Swadaya. Halaman 30Suriantika, Cipto DKK. 2013. Laporan Kelompok Praktikum Mikrobiologi-Virologi Sterilisasi Dan Pengenalan Peralatan Mikrobiologi, Jakarta: Universitas Muhammadiyah Prof. Dr. Hamka. Halaman 4Volk dan Wheeler. 1993. Mikrobiologi Dasar Jilid 1 Edisi ke 5. Jakarta: Erlangga. Halaman 5