blck spot

7/23/2019 Blck Spot

1/13

See discussions, stats, and author profiles for this publication at: http://www.researchgate.net/publication/274065812

KARAKTERISASI EKSTRAK KASAR ENZIMPOLYPHENOLOXIDASE DARI UDANG WINDU

(Penaeus monodon) CHARACTERIZATION OF

CRUDE EXTRACT POLYPHENOLOXIDASE

ENZYME FROM BLACK TIGER SHRIMP (Penaeus

m...

ARTICLEJANUARY 2013

READS

48

3 AUTHORS, INCLUDING:

Made Suhandana

Bogor Agricultural University

3PUBLICATIONS 0CITATIONS

SEE PROFILE

Nurhayati Tati

Bogor Agricultural University

22PUBLICATIONS 2CITATIONS

SEE PROFILE

Available from: Nurhayati Tati

Retrieved on: 20 November 2015
http://www.researchgate.net/profile/Made_Suhandana2?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_7http://www.researchgate.net/profile/Nurhayati_Tati?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_7http://www.researchgate.net/profile/Made_Suhandana2?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_4http://www.researchgate.net/profile/Made_Suhandana2?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_5http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_1http://www.researchgate.net/profile/Nurhayati_Tati?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_7http://www.researchgate.net/institution/Bogor_Agricultural_University?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_6http://www.researchgate.net/profile/Nurhayati_Tati?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_5http://www.researchgate.net/profile/Nurhayati_Tati?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_4http://www.researchgate.net/profile/Made_Suhandana2?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_7http://www.researchgate.net/institution/Bogor_Agricultural_University?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_6http://www.researchgate.net/profile/Made_Suhandana2?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_5http://www.researchgate.net/profile/Made_Suhandana2?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_4http://www.researchgate.net/?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_1http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_3http://www.researchgate.net/publication/274065812_KARAKTERISASI_EKSTRAK_KASAR_ENZIM_POLYPHENOLOXIDASE_DARI_UDANG_WINDU_%28Penaeus_monodon%29_CHARACTERIZATION_OF_CRUDE_EXTRACT_POLYPHENOLOXIDASE_ENZYME_FROM_BLACK_TIGER_SHRIMP_%28Penaeus_monodon%29?enrichId=rgreq-13ebb17e-6240-4b99-af5f-aca063e228a1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI3NDA2NTgxMjtBUzoyMTExMDQ4Mjg1MzA2OTNAMTQyNzM0MjcyMTM2Mw%3D%3D&el=1_x_2

7/23/2019 Blck Spot

2/13

Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis, Vol. 5, No. 2, Hlm. 353-364, Desember 2013

Ikatan Sarjana Oseanologi Indonesia danDepartemen Ilmu dan Teknologi Kelautan, FPIK-IPB 353

KARAKTERISASI EKSTRAK KASAR ENZIM POLYPHENOLOXIDASE

DARI UDANG WINDU (Penaeus monodon)

CHARACTERIZATI ON OF CRUDE EXTRACT POLYPHENOLOXIDASE

ENZYME FROM BLACK TIGER SHRIMP (Penaeus monodon)

Made Suhandana1, Tati Nurhayati

1*, dan Laksmi Ambarsari

2

1Departemen Teknologi Hasil Perairan, Institut Pertanian Bogor, Bogor*Email:[email protected];[email protected]

2Departemen Biokimia, Institut Pertanian Bogor, Bogor

ABSTRACT

Shrimp is a very important export commodity with high market value world wide. However, itis still facing problem related to the waste and deterioration quality as main issues for theshrimp industry. In this experiment, polyphenoloxidase from the carapace of Penaeus monodon

was extracted and characterized. The research was carried out to obtain the optimumextraction condition and to evaluate the properties of enzyme i.e., pH, optimum temperature foractivating enzyme, kinetic enzyme, and chelating on metal ion. The best method for PPO enzymeextraction used buffer with 1:3 proportion. The optimum activity of enzyme was at pH 7 andtemperature of 35C. The kinematic enzyme (Km) value and the maximum substrateconcentration were 5.42 mM and 7.5 mM, respectively. Na

+, Ca

2+, Zn

2+, and EDTA with

concentration 5 and 10 mM inhibited enzyme activity. Cu2+

at concentration of 10 mM andMn2+at concentration 5 mM also inhibited enzyme activity

Keywords: carapace, characterization, polyphenoloxidase, shrimp

ABSTRAK

Udang merupakan komoditas ekspor yang penting, namun tidak luput dari permasalahan limbahdan kemunduran mutu yang dihadapi oleh hasil perikanan lainnya. Pada penelitian ini enzimpolyphenoloxidase diekstraksi dan dikarakterisasi dari karapas Penaeus monodon. Penelitiandilakukan dengan menentukan optimasi ekstraksi, pH optimum dan suhu optimum aktivitasenzim, kinetika enzim, dan pengaruh pemberian ion logam. Metode terbaik untuk ekstaksienzim PPO menggunakan perbandingan buffer 1:3 secara bertingkat. pH optimum kerja enzimPPO adalah 7 dengan suhu optimum 35 C. Konsentrasi substrat untuk memperoleh aktivitasoptimum enzim adalah 7,5 mM. Penghitungan kinetika enzim menunjukkan Km enzim PPOsebesar 5,42 mM. Na+, Ca2+, Zn2+, serta EDTA dengan konsentrasi 5 dan 10 mM menghambatkerja enzim PPO, demikian juga dengan. Cu2+10 mM dan Mn2+ 5 mM menghambat kerja enzimPPO.

Kata kunci: karapas, karakterisasi,polyphenoloxidase, udang

I. PENDAHULUAN

Udang merupakan komoditasekspor yang menjanjikan bagi Indonesia.Tingkat ekspor udang ke luar negeri yangtinggi menjadi sumber pendapatan yangtinggi pula bagi Indonesia. Ekspor udangIndonesia pada tahun 2010 mencapaivolume 145.092 ton dengan nilai

mencapai US$ 1.056.399.000 (KKP,2011). Ekspor udang ke negara-negaraEropa dalam beberapa tahun terakhirmengalami penurunan. Penurunan inidisebabkan oleh adanya residu senyawa-senyawa antibiotik yang ditemukan padaudang. Selain adanya bahan kimia,

penurunan ekspor udang ke luar negerijuga disebabkan oleh penurunan kualitas
mailto:[email protected]:[email protected]:[email protected]:[email protected]

7/23/2019 Blck Spot

3/13

Karakterisasi Ekstrak Kasar Enzim...

354 http://itk.fpik.ipb.ac.id/ej_itkt52

dari udang yang akan diekspor terkaitdengan kemunduran mutu.

Penampakan, bau, tekstur, dannilai gizi adalah empat parameter yang

dinilai oleh konsumen dalam memilihmakanan. Penampakan dipengaruhi olehwarna, dan merupakan parameter pertamayang dinilai untuk mengevaluasimakanan. Warna dapat dipengaruhi oleh

beberapa komponen, yaitu pembentukanpigmen, khlorofil, karotenoid, antosianin,dan lain-lain, atau pembentukan warnamelalui reaksi enzimatis dannonenzimatis. Salah satu reaksi warnayang penting adalah terbentuknya

browning pada buah-buahan, sayur-sayuran, danseafoodkhususnya krustasea(Kim et al., 2000). Pembentukan black

spot pada udang merupakan salah satucontoh pembentukan warna yangdisebabkan oleh aktivitas enzim

polyphenoloxidase (PPO) (Martinez andWhitaker, 1995).

Montero et al. (2001) menyatakanbahwa melanoisis adalah proses yangdipicu oleh mekanisme biokimia akibatoksidasi fenol menjadi quinon melaluikompleks enzim yang disebut

polyphenoloxidase. Proses ini diikuti olehpolimerasi nonenzimatik quinon sehinggamenimbulkan senyawa pigmen dengan

berat molekul tinggi dan sangat gelap.Proses kemunduran mutu pada udangterjadi saat post mortem. Walaupuntimbulnya warna tidak berbahaya bagikonsumen, namun secara drastis

mengurangi nilai jual produk danmenyebabkan kerugian yang cukup tinggi.Penghambatan proses pemben-

tukan blackspot dapat dilakukanmenggunakan senyawa inhibitor. Senyawainhibitor digunakan saat penangananudang sehingga proses enzimatis sebagaitahap awal pembentukan melanin dapatdihambat. Penentuan senyawa inhibitoryang efektif dilakukan menggunakan ujiaktivitas penghambatan secara in vitro

dengan enzim PPO sebagai substratnya.

Oleh karena itu perlu dilakukan usahauntuk mengekstraksi PPO dari udang.Fakta menunjukkan bahwa PPOdiperlukan untuk substrat pengujian, dan

juga merupakan enzim yang penting bagiudang terutama dalam hal pembentukancangkang baru. Selain itu enzim tersebutterlibat dalam hal penyembuhan luka.PPO juga berperan dalam pertahanan diridan perlindungan terhadap serangan

patogen. Penelitian lebih lanjut diperlukanuntuk menguak potensi PPO tersebut.

Polyphenoloxidase pada udangbanyak ditemukan pada bagian karapasudang (Montero et al., 2001). Zamorano

et al. (2009) menyebutkan bahwa PPOtertinggi ditemukan pada karapas, diikutiabdominal eksoskeleton, cephalothorax,

pleopod, dan telson. Berdasarkan hasilpenelitian yang telah dilakukansebelumnya, ekstraksi PPO dapatdilakukan menggunakan karapas udang.Karapas udang merupakan salah satu jenislimbah yang dihasilkan dari proses

pengolahan udang. Berdasarkan faktatersebut ekstraksi enzim polyphenol-oxidase dapat berperan sebagai alternatif

pemanfaatan limbah udang. Penelitian inibertujuan untuk mengekstraksi danmengkarakterisasi enzim PPO yangdihasilkan dari karapas udang.

II. METODE PENELITIAN

2.1. Bahan dan AlatBahan yang digunakan pada

penelitian ini adalah karapas udang winduyang diperoleh dari pasar di daerah Bogor.Bahan-bahan lain yang digunakan adalahakuades, buffer sodium fosfat (Merck),

NaCl (Merck), Brij 35 (Merck), BufferTris-HCl (Applichem), L-DOPA (Sigma).Alat-alat yang digunakan pada penelitianini adalah sentrifuse (Sorvall),spektrofotometer (Yamato), pipet mikro(Axygen), inkubator (Thermoline), dan

Freezer.

7/23/2019 Blck Spot

4/13

Suhandana et al.

Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis, Vol. 5, No. 2, Desember 2013 355

2.2. Ekstraksi Enzim PolyphenoloxidaseEkstraksi dilakukan dengan

mengacu modifikasi metode Simpson etal., (1987). Sampel dibuat dalam bentuk

bubuk menggunakan nitrogen cair dalamwaring blender. Sampel (50 g) dicampurdengan 150 mL buffer (0,05 M buffersodium fosfat, pH 7,2; yang mengandung1,0 M NaCl dan 0,2% Brij 35. Campurandiaduk secara kontinu pada suhu 4 oCselama 30 menit, diikuti dengansentrifugasi dengan kecepatan 8000 x g

pada suhu 4 oC selama 30 menitmenggunakan sentrifuse dingin.

2.3. Penentuan Metode EkstraksiTerbaik

Penentuan metode ekstraksiterbaik dilakukan dengan memodifikasi

perbandingan sampel dengan bufferekstraksi yang digunakan. Perbandinganyang digunakan antara lain 1:1, 1:2, 1:3,dan 1:3 secara bertingkat. Metode ektraksiterbaik ditentukan dari nilai aktivitasspesifik enzim. Aktivitas enzimditunjukkan dalam satuan U. Nilai 1Umenunjukkan peningkatan absorban0,001/ menit. Optimasi assay dilakukandengan menguji waktu inkubasi saat

pengujian. Suhu yang digunakan adalah30 dan 35 oC. Pengujian aktivitas enzim

berdasarkan metode Bono et al. (2010)

2.4. Penentuan Suhu dan pH OptimumSuhu dan pH optimum ditentukan

menggunakan metode Bono et al. (2010).

Sampel enzim sebanyak 0,2 mLditambahkan dengan 2,8 mL 0,01 M L-DOPA yang dilarutkan dalam 0,05 M

buffer fosfat pH 6,5. Campuran tersebutdiinkubasi pada suhu 30, 35, 40, 45, 50,55 oC selama 5 menit. Sampel yang telahdiinkubasi diukur pada panjanggelombang 475 nm. pH optimumditentukan dengan melarutkan sampelenzim dalam 2,8 mL 0,01 M L-DOPA

yang dilarutkan dengan 0,05 M bufferfosfat pH 5, 6, 7, 8, 9. Campurankemudian diinkubasi pada suhu optimumyang telah diperoleh sebelumnya selama 5

menit.

2.5. Penentuan Kinetika Enzim

Kinetika enzim ditentukan menggu-nakan metode Bono et al. (2010).Sebanyak 0,2 mL enzim ditambahkandengan 2,8 mL L-DOPA yang dilarutkandalam 0,05 M buffer fosfat dengan pHsesuai pH optimum. Konsentrasi L-DOPAyng digunakan adalah 2.5, 5, 7.5, 10, 12.5mM. Campuran tersebut kemudian

diinkubasi pada suhu optimum yang telahdiperoleh sebelumnya selama 5 menit.Sampel yang telah diinkubasi diukur pada

panjang gelombang 475 nm.. Aktivitasenzim ditunjukkan dalam satuan U. Nilai1U menunjukkan peningkatan absorban0,001/ menit. Konstanta Michaelis-Menten (Km) dan Kecepatan maksimum(V maks) ditentukan dengan plotLineweaver-Burk.

2.6. Pengaruh Ion Logam dan Inhibitor

terhadap Enzim

Pengaruh ion logam dan inhibitorterhadap enzim ditentukan menggunakanmodifikasi metode Bono et al. (2010).Sampel enzim 0,2 mL ditambahkandengan 0,2 mL larutan Cu2+, Ca2+, Zn2+,Mn2+, Na, Co2+, ethylene diaminetetraacetic acid(EDTA) dilarutkan dalam20 mM buffer Tris-HCl (pH 7,1). Masing-

masing campuran diprainkubasi selama 20menit pada suhu ruang. Sebanyak 2,6 mL0,01 M L-DOPA yang dilarutkan dalam0,05 M buffer fosfat ditambahkan kedalam campuran. Campuran kemudiandiinkubasi pada suhu optimum yang telahdiperoleh sebelumnya selama 5 menit, dandiukur absorbansinya pada panjanggelombang 475 nm.

7/23/2019 Blck Spot

5/13



2.7. Pengujian Aktivitas Enzim (Bono

et al., 2010)Aktivitaspolyphenoloxidase diten-

tukan dengan mereaksikan 0,2 mL enzim

ditambahkan dengan 2,8 mL 0,01 M L-DOPA yang dilarutkan dalam 0,05 M

buffer fosfat pH 6,5. Campuran reaksikemudian diinkubasi pada suhu 35 oCselama 5 menit. Kemudian sampel yangtelah diinkubasi diukur pada panjanggelombang 475 nm. Aktivitas enzimditunjukkan dalam satuan U, dengan 1U

berarti peningkatan absorban 0,001/menit.

2.8. Penentuan Kadar Protein

Kadar protein ditentukan meng-gunakan metode Bradford (1976).Coomassie blue digunakan untuk pewarnadan bovine serum albumin digunakansebagai standar.

III. HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1. Ekstraksi Enzim

PolyphenoloxidaseTahapan ekstraksi enzim kasar

dilakukan melalui beberapa tahap

optimasi. Tahapan ini merupakanmodifikasi dari metode yang dilakukanoleh Simpson et al. (1987). Metodetersebut menggunakan perbandingan

sampel banding buffer sebesar 1:3. Padapenelitian ini dilakukan beberapamodifikasi perbandingan buffer, yaitumenggunakan perbandingan 1:3 secara

bertingkat (SP1), 1:1 (SP2), 1:2 (SP3), 1:3(SP4).

Hasil penelitian menggambarkanekstrak dengan perbandingan sampel :

buffer sebesar 1:3 yang dilakukan secarabertingkat menghasilkan aktivitas spesifikyang lebih besar dibandingkan dengan

yang lain (Gambar 1). Hal ini didugakarena dengan metode bertingkat jumlah

protein yang terekstrak lebih banyakdibandingkan yang lain. Diduga pelethasil ekstraksi tahap pertama masihmenyisakan protein dan protein ini yangterekstrak pada tahap ekstraksi

berikutnya.

Gambar 1. Aktivitas spesifik dari beberapa ekstrak enzimpolyphenoloxidasemenggunakan perbandingan buffer yang berbeda

7/23/2019 Blck Spot

6/13

Suhandana et al.


Ekstrak enzim polyphenoloxidaseSP1 selanjutnya diuji untuk mengetahuiaktivitas spesifik dari masing-masingekstrak. Ekstraksi bertingkat pada sampel

SP1 dilakukan sebanyak 3 kali ekstraksi.Hasil uji ini memperlihatkan bahwa darimasing-masing tahap ekstraksi aktivitasspesifik yang diperlihatkan masih tinggi.Hal ini menunjukkan bahwa padaekstraksi tahap pertama belum terekstrakseluruh protein dalam hal ini enzim padasampel. Sehingga pada ekstraksi tahapkedua dan ketiga masih ditemukanaktivitas enzim.

3.2. Optimasi AssayOptimasi assay dilakukan untuk

mengetahui waktu konversi substrat L-DOPA menjadi produk. Pada tahap ini

juga diberikan perbandingan suhuinkubasi antara suhu 30 dan 35 C. Hasil

penelitian menunjukkan bahwa semakinlama waktu inkubasi nilai absorban akansemakin besar. Namum rasio perubahanabsorbansi dengan waktu (dA/dt) semakinlama semakin menurun, yang berarti

bahwa jumlah substrat yang bisadikonversi menjadi produk semakin kecil.

Gambar 2. Peningkatan absorbansi sampel yang diinkubasi pada suhu 30 C.

Gambar 3. Peningkatan absorbansi sampel yang diinkubasi pada suhu 35 C.

7/23/2019 Blck Spot

7/13



Suhu inkubasi berpengaruhterhadap peningkatan absorbansi sampel.Suhu 35 C memberikan laju peningkatanyang lebih besar dibandingkan suhu 30

C. Laju peningkatan absorbansi di duamenit pertama untuk suhu 35 C adalah0,004 sedangkan pada suhu 30 C sebesar0,003. Suhu yang lebih tinggi akanmeningkatkan gerakan rotasi, vibrasi,translasi ataupun bentuk gerakan lain,sehingga terjadi transfer elektron(Suhartono, 1989). Hal ini yangmenyebabkan inkubasi menggunakansuhu 35 C memberikan laju perubahansubstrat yang lebih besar. Montero et al.

(2001) menyebutkan polyphenoloxidasemenunjukkan aktivitas tertinggi antara 40dan 60 oC, tetapi stabil pada suhu 35 oC.

Semakin lama waktu inkubasi lajupeningkatan absorbansi akan semakinkecil. Hal ini terjadi karena laju perubahansubstrat akan menurun seiring dengan

penambahan waktu inkubasi. Kecepatanpembentukan kompleks enzim substratsama dengan kecepatan penguraiannya.Kecepatan ini sama dengan kecepatanmaksimum reaksi enzim yang dicapai

pada konsentrasi substrat tertentu(Suhartono, 1989). Ketika jumlah substratmengalami penurunan selama waktu

inkubasi, maka jumlah produk yangdihasilkan juga akan semakin menurun.

3.3. Penentuan Suhu Optimum

Pengaruh suhu pada reaksienzimatis merupakan suatu fenomenayang kompleks. Bertambahnya suhusampai dengan suhu tertentu akanmenyebabkan kenaikan kecepatan reaksienzim karena bertambahnya energi kinetikyang mempercepat gerak vibrasi, translasidan rotasi enzim serta substrat, sehinggamemperbesar peluang keduanya untuk

bereaksi. Suhu yang lebih besar dari suhumaksimum akan menyebabkan protein

enzim mengalami perubahan konformasiyang bersifat detrimental. Substrat jugadapat mengalami perubahan konformasisehingga gugus reaktifnya mengalamihambatan dalam memasuki sisi aktifenzim (Suhartono, 1989).

Suhu inkubasi berpengaruh padaenzim polyphenoloxidase. Peningkatanaktivitas enzim terlihat ketika suhudinaikkan menjadi 35 C. Penurunanaktivitas terlihat ketika enzim diinkubasi

diatas suhu 35 C (Gambar 4). Hal senadajuga disebutkan oleh Benjakul et al.(2005) yang menyebutkan phenoloxidase(PO) dari cephalothorax kuruma prawnmemiliki aktivitas maksimum pada suhu35 oC.

Gambar 4. Suhu optimum aktivitas enzimpolyphenoloxidase.

7/23/2019 Blck Spot

8/13

Suhandana et al.


Penelitian lain menyebutkan suhuoptimum beberapa enzim PPO darisumber yang berbeda. Gimenez et al.(2010) menyatakan aktivitas polypheno-

loxidase yang ditemukan pada karapasdan ekstrak jeroan Norway lobstermeningkat sebanding dengan peningkatansuhu hingga 60 oC. Ekstrak karapasmenunjukkan kestabilan pada suhu 45 oC.Zamorano et al. (2009) melaporkan tidakada kisaran maksimum yang jelas padasuhu 15-60 oC tetapi stabilitas yang tinggidicapai pada suhu 30-35 oC. Cong et al.(2005) menyatakan phenoloxidase darihemolymph Ruditapes philippinarum

memiliki aktivitas tertinggi pada suhu 40C. Fan et al. (2011) menyatakan PO

Artemia sinica optimal pada suhu 50 C.Penelitian yang dilakukan oleh Manheemet al. (2012) menunjukkan bahwakehilangan aktivitas PPO tertinggiditemukan ketika enzim dipanaskan padasuhu 80 C dan 90 C. Ketika suhu yangdigunakan berkisar antara 50-70 C

penurunan aktivitas yang terjadi tidakberbeda nyata. Namun peningkatanaktivitas terjadi ketika enzim dipanaskan

pada suhu 40 C.

3.4. Penentuan pH OptimumPenentuan pH optimum dilakukan

menggunakan variasi pH buffer yangberbeda (Gambar 5). Buffer merupakan

salah satu komponen penting pada reaksienzimatis karena kemampuannya untukmenjaga pH. pH buffer yang digunakan

bervariasi mulai dari pH 5-9. Pengujianaktivitas enzim pada rentang pH tersebutmenunjukkan bahwa aktivitas optimumenzim polyphenoloxidase berada padanilai pH 7. Ketika pH dinaikkan dari 5-7aktivtas enzim mengalami peningkatan,namun ketika pH dinaikkan lagi diatas 7aktivitas enzim mengalami penurunan.

Benjakul et al. (2005) menyebutkanphenoloxidase (PO) dari cephalotho-raxkuruma prawn memiliki aktivitasmaksimum pada pH 6,5. dan stabil padakisaran pH 3-10.

Semua reaksi enzim dipengaruhioleh pH medium tempat reaksi terjadi.Oleh karena itu pada setiap percobaandengan enzim diperlukan buffer untukmengontrol pH reaksi. Percobaan yangmenggunakan enzim murni hasil isolasi,

biasanya dipergunakan buffer buatan ataubuffer artifisial misalnya buffer fosfat,asetat, buffer tris dan HEPES.

Gambar 5. pH optimum aktivitas enzim polyphenoloxidase.

7/23/2019 Blck Spot

9/13



Pada umumnya enzim aktif padapH netral, yaitu pada pH cairan makhlukhidup. Akan tetapi kisaran keaktifanenzim dapat mencapai pH 5-9 (Suhartono,

1989).Montero et al. (2001) polypheno-

loxidase menunjukkan aktivitas spesifikyang berbeda pada beberapa lokasi ditubuh tiger prawn serta aktif pada pH 5dan 8. Zamorano et al. (2009) melaporkankarakterisasi dan distribusi jaringan

polyphenoloxidase (PPO) pada deepwaterpink shrimp (Parapenaeus longirostris)setelah mati. Enzim memiliki aktivitastertinggi pada pH 4,5 serta stabil pada pH

4,5 dan 9,0. Cong et al. (2005)menyatakan phenoloxidase darihemolymph Ruditapes philippinarumoptimum pada pH 7. Fan et al. (2011)menyatakan PO Artemia sinica optimal

pada pH 7.

3.5 Kinetika Enzim PolyphenoloxidaseAktivitas enzim PPO diuji

menggunakan konsentrasi substrat (L-DOPA) yang berbeda mulai dari 2,5 mMsampai dengan 12,5 mM. Aktivitasditunjukkan dalam satuan aktivitas relatif(%). Konsentrasi substrat yangmemberikan aktivitas enzim optimumadalah sebesar 7,5 mM. Konsentrasienzim dibawah 7,5 mM menunjukkanaktivitas enzim yang terus meningkat,namun ketika konsentrasi substratdinaikkan diatas konsentrasi 7,5 mMaktivitas enzim mengalami penurunan

(Gambar 6).Pembentukan kompleks enzimsubstrat membatasi kecepatan reaksienzimatis. Kecepatan maksimum reaksienzim dicapai pada tingkat konsentrasisubstrat yang sudah mampu mengubahseluruh enzim menjadi kompleks enzimsubstrat pada keadaan lingkungan yangmemungkinkan. Konsentrasi substratdibawah konsentrasi ini, reaksi enzimtergantung pada konsentrasi substrat yang

ditambahkan, sedangkan pada konsentrasi

substrat diatas konsentrasi tersebutkecepatan reaksi menjadi tidak tergantung

pada konsentrasi substrat (Suhartono,1989).

Substrat yang digunakan untukpengujian kinetika enzim adalah L-DOPAdengan berbagai konsentrasi. L-DOPAmemiliki kemampuan berikatan yanglebih baik dibandingkan dengan substratlain. Cong et al. (2005) menyebutkan

bahwa afinitas L-DOPA dengan enzimlebih tinggi dibandingkan dengan substratlain, yaitu tirosin. Hal ini dibuktikan darinilai Km untuk substrat L-DOPA lebihkecil dibandingkan dengan tirosin.

Polyphenoloxidase (1,2-benzene-diol : Oxygen Oxidoreductase; EC.1.10.3.1) merupakan enzim yangmengandung Cu, yang juga dikenaldengan catechol oxidase, catecholase,diphenol oxidase, o-diphenolase,

phenolase, dan tyrosinase (Martinez danWhitaker, 1995). Polyphenoloxidase

bertanggung jawab untuk mengkatalisterjadinya dua reaksi dasar. Enzimmengkatalis hidroksilasi ke posisi O yang

berdekatan dengan hidroksil yang lainmenggunakan substrat berupa fenol danO2. Reaksi kedua adalah oksidasi daridiphenol menjadi o-benzoquinon, yangselanjutnya teroksidasi menjadi melanin(produk berwarna coklat) biasanyamelalui mekanisme non enzimatis (Kim etal., 2000).

Kinetika enzim berdasarkanpersamaan Lineweaver-Burk menunjukan

bahwa Km enzim PPO dari Penaeusmonodon sebesar 5,42 mM (Gambar 7).Nilai Km ini masih lebih rendahdibandingkan dengan beberapa penelitianlain, seperti enzim pada Ruditapes

philippinarum sebesar 2,2 mmol/L (Conget al., 2005), Charybdis japonica sebesar2,90 mM (Fan et al., 2009), Penaeusvannamei sebesar 1,47 mM (Garcia-Carreno et al., 2008), Parapenaeuslongirostris sebesar 1,85 mM (Zamorano

et al., 2009). Nilai Kmyang rendah ini

7/23/2019 Blck Spot

10/13

Suhandana et al.


disebabkan karena ekstrak enzim PPOmasih kasar sehingga diduga pengotor didalamnya masih banyak. Metode

pemurnian dapat digunakan untukmeningkatkan aktivitas spesifik enzimPPO.

Gambar 6. Konsentrasi substrat optimum untuk aktivitas enzimpolyphenoloxidase.

Gambar 7. Kinetika enzimpolyphenoloxidase.

7/23/2019 Blck Spot

11/13



3.6 . Pengaruh Ion Logam terhadap

EnzimIon logam mempengaruhi aktivitas

enzim polyphenoloxidase (PPO). Ion

logam dapat meningkatkan ataumenurukan aktivitas enzim setelah

berinteraksi dengan enzim. Ion logamyang meningkatkan aktivitas enzimdisebut dengan aktivator sedangkan yangmenurunkan aktivitas enzim disebutdengan inhibitor. Ion logam yangmempengaruhi kerja aktivitas enzim PPOdapat dilihat pada Gambar 8.

Kontrol menunjukkan aktivitasPPO yang tidak ditambahkan ion logam,

ditunjukkan dengan aktivitas relatif 100%.Gambar menunjukkan bahwa Na+, Ca2+,Cu2+, Zn2+, dan EDTA dengan konsentrasi10 mM menurunkan aktivitas enzim PPO.Demikian halnya dengan Na+, Ca2+, Mn2+,Zn2+, dan EDTA dengan konsentrasi 5mM. Namun Cu dengan konsentrasi 5mM, Mn2+ dengan konsentrasi 10 mM,dan Co dengan konsentrasi 5 dan 10 mMmeningkatkan aktivitas enzim PPO.

Penelitian yang dilakukan olehCong et al. (2005) menyebutkan bahwa

logam Cu2+, Zn2+, Ca2+ menghambataktivitas kerja enzim PO. Zn2+menghambat aktivitas PO Ruditapestertinggi pada konsentrasi 1 mM.

Demikian halnya dengan EDTAmenghambat aktivitas PPO sebesar 100%

pada konsentrasi 10 mM. Penelitian yangdilakukan oleh Fan et al., (2009)menyatakan bahwa Cu, Zn, Ca, Mg, danEDTA juga menghambat enzim PPO.EDTA dengan konsentrasi 10 mMmenghambat enzim sampai 100%. Hasiltersebut menyatakan bahwa PPOmerupakan jenis metaloenzim.

Selain beberapa ion logam, enzim

PPO juga bisa dihambat oleh beberapainhibitor protease. Protease sendiri bisadihambat oleh beberapa ion logam. Ferreret al. (1989) menyatakan ekstrak PO kasarumumnya memiliki aktivitas yang rendah.Semua protease inhibitor mencegahaktivasi phenoloxidase. Benjakul et al.(2006) menyatakan sistein dan glutathionemenunjukkan aktivitas penghambatan

pada PO kuruma prawn.

Gambar 8. Pengaruh beberapa logam terhadap enzimpolyphenoloxidase konsentrasilogam 5 mM konsentrasi logam 10 mM

7/23/2019 Blck Spot

12/13

Suhandana et al.


IV. KESIMPULAN

Metode terbaik untuk mengeks-traksi enzim adalah menggunakan

perbandingan buffer 1:3 secara bertingkat.Suhu untuk pengujian enzim adalah 35C. pH optimum kerja enzim PPO adalah7 dengan suhu optimum 35 C.Konsentrasi L-DOPA yang digunakanuntuk memperoleh aktivitas optimumenzim adalah 7,5 mM. Penghitungankinetika enzim menunjukkan bahwa nilaiKm enzim PPO sebesar 5,42 mM.Beberapa ion logam digunakan untukmelihat pengaruh enzim terhadap ion

logam. Na+, Ca2+, Cu2+, Zn2+, dan EDTAdengan konsentrasi 10 mM menghambataktivitas enzim PPO. Selain itu Na+, Ca2+,Mn2+, Zn2+, dan EDTA dengankonsentrasi 5 mM juga menghambat kerjaenzim PPO.

DAFTAR PUSTAKA

Benjakul, S., W. Visessanguan, and M.Tanaka. 2005. Properties of

phenoloxidase isolated fromtheCephalothorax of kuruma

prawn (Penaeus japonicus). J. ofFood Biochem., 29:470485

Benjakul, S. W. Visessanguan, and M.Tanaka. 2006. Inhibitory effect ofcysteine and glutathione on

phenoloxidasefrom kuruma prawn(Penaeus japonicus). Food Chem.,98:158163.

Bono, G., C. Badalucco, A. Corrao, S.Cusumano, L. Mammina, and G.B.Palmegiano. 2010. Effect oftemporal variation, gender and sizeon cuticle polyphenol oxidaseactivity in deep-water rose shrimp(Parapenaeus longirostris). FoodChem., 123:489493.

Bradford, M.M. 1976. A rapid andsensitive method for quantificationof microgramquantities of proteinutilizing the principle of protein

dye binding. Anal. Biochem.,72:234-254.

Cong, R, W. Sun, G. Liu, T. Fan, X.Meng, L. Yang, and Zhu. 2005.Purification and characterization of

phenoloxidasefrom clamRuditapesphilippinarum.J. FSI.,18:61-70.

Fan, T., Y. Zhang, L. Yang, X. Yang, G.Jiang, M. Yu, and R. Cong. 2009.Identification and characterizationof a hemocyanin-derived phenol-

oxidase from the crab Charybdisjaponica.J.CBPB., 152:144149.

Fan, T., J. Zhao, X. Fan, M. Yu, and G.Jiang. 2011. Purification andcharacterization of phenoloxidasefrom brine shrimp Artemia sinica.

Acta Biochim Biophys Sin.,43:722728

Ferrer, O.J, J.A. Koburger, W.S. Otwell,R.A. Gleeson, B.K. Simpson, andM.R. Marshall. 1989. Phenol-oxidase from the cuticle of floridaspiny lobster (Panulirus argus):mode of activation and characteri-zation. J. of Food Science,54(1):63-67

Garcia-Carreno, F.L., K. Cota, andM.A.N.D. Toro. 2008. Phenol-oxidase activity of hemocyanin inwhiteleg shrimp Penaeusvannamei: conversion, characteri-

zation of catalytic properties, androle in Postmortem melanosis. J.Agric. Food Chem., 56:64546459.

Kim, J., M.R. Marshall, and C.Wei. 2000.Polyphenoloxidase. Dalam: Haard

N.F. and B.K. Simpson (eds.).Seafood enzymes: utilization andinfluence on postharvest seafoodquality. New York: MarcelDekker, Inc. hlm.:271-316.

7/23/2019 Blck Spot

13/13



[KKP] Kementerian Kelautan danPerikanan. 2011. Statistik eksporhasil perikanan. Pusat Data,Statistik, dan Informasi, Sekre-

tariat Jenderal, KementerianKelautan dan Perikanan. Jakarta.

Manheem, K., S. Benjakul, K. Kijroong-rojana, and W. Visessanguan.2012. The effect of heatingconditions on polyphenol oxidase,

proteases and melanosisin pre-cooked Pacific white shrimpduring refrigerated storage. FoodChem., 131:13701375

Martinez, M.V. and J.R. Whitaker. 1995.

The biochemistry andcontrol ofenzymatic browning. Trends in

Food Science & Technology,

6:195-200.Montero, P, A. Avalos, and M. Perez-

Mateos. 2001. Characterization ofpolyphenoloxidase of prawns(Penaeus japonicus). Alternativesto inhibition: additives and high-

pressure treatment. Food Chem.,75:317324.

Simpson B.K., M.R. Marshall, and W.S.Otwell. 1987. Phenoloxidase fromshrimp (Penaeus setiferus):

purification and some properties.J.

Agric. Food Chem., 35:918-921Suhartono, M.T. 1989. Enzim dan

bioteknologi. Bogor: DepartemenPendidikan dan Kebudayaan,Direktorat Jenderal PendidikanTinggi Antar UniversitasBioteknologi, Institut PertanianBogor.

Zamorano, J.P., O. Martinez-Alvarez, P.Montero, and M.C.Gomez-Guilln.2009. Characterisation and tissue

distribution of polyphenol oxidaseof deepwaterpink shrimp (Parape-naeus longirostris). FoodChemistry, 112:104111.

Diterima :7 Oktober 2013

Direvisi :8 Desember 2013

Disetujui :17 Desember 2013

blck spot

Documents