laporan mikro biologi pewarnaan gram

7/23/2019 Laporan Mikro Biologi Pewarnaan Gram

1/15

Laporan Mikro Biologi

Selasa, 25 Oktober 2011

Laporan Pewarnaan Bakteri

Pewarnaan Bakteri

I. Tujuan

Terampil melakukan pewarnaan gram untuk bakteri gram positif dan negatif.

Mempelajari teknik pewarnaan gram untuk pengamatan mikroba.

Mempelajari bentuk-bentuk dan struktur sel bakteri dari hasil pengamatan dengan

pewarnaan gram.

Membedakan kelompok bakteri berdasarkan reaksinya terhadap warna dan sekaligus

menunjukkan sifat bakteri tersebut.

II. Tinjauan Pustaka

Pewarnaan pada bakteri dibagi menjadi tiga, yaitu :

1. Pewarnaan sederhana

Pewarnaan sederhana merupakan teknik pewarnaan yang paling banyak digunakan. Disebut

sederhana karena hanya menggunakan satu jenis zat warna untuk mewarnai organisme

tersebut. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarnaan-pewarnaan sederhana

karena sitoplasamanya bersifat basofilik (suka dengan basa). Zat-zat warna yang digunakan

untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat alkolin. Dengan pewarnaan sederhana dapat

mengetahui bentuk dan rangkaian sel-sel bakteri. Pewarna basa yang biasa digunakan untuk

pewarnaan sederhana ialah metilen biru, kristal violet, dan karbol fuehsin yang mana

pewarnaan sederhana ini dibagi lagi menjadi dua jenis pewarnaan.

a. Pewarnaan Asam

Merupakan pewarnaan yang menggunakan satu macam zat warna dengan tujuan hanya untuk

melihat bentuk sel. Adapun zat warna yang dipakai dalam pewarnaan positif adalah metilen

biru dan air furksin.

b. Pewarnaan Basa

Pewarnaan basa atau negatif merupakan metode pewarnaan untuk mewarnai bakteri tetapi

mewarnai latar belakangnya menjadi hitam gelap. Pada pewarnaan ini mikroorganisme

kelihatan transparan (tembus pandang). Teknik ini berguna untuk menentukan morfologi dan

ukuran sel. Metode ini menggunakan cat nigrosin atau tinta cina.
http://mikrolaborat.blogspot.com/http://mikrolaborat.blogspot.com/


2/15

2. Pewarnaan Diferensial (Gram)

Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah suatu metode empiris untuk membedakan spesies

bakteri menjadi dua kelompok besar, yakni gram positif dan gram negatif, berdasarkan sifat

kimia dan fisik dinding sel mereka. Metode ini diberi nama berdasarkan penemunya,

ilmuwan Denmark Hans Christian Gram (18531938) yang mengembangkan teknik ini pada

tahun 1884 untuk membedakan antara pneumokokus dan bakteri Klebsiella pneumoniae.

Bakteri Gram-negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna metil ungu pada

metode pewarnaan Gram. Bakteri gram positif akan mempertahankan zat warna metil ungu

gelap setelah dicuci dengan alkohol, sementara bakteri gram negatif tidak. Pada uji

pewarnaan Gram, suatu pewarna penimbal (counterstain) ditambahkan setelah metil ungu,

yang membuat semua bakteri gram negatif menjadi berwarna merah atau merah muda.

Pengujian ini berguna untuk mengklasifikasikan kedua tipe bakteri ini berdasarkan perbedaan

struktur dinding sel mereka.

a. Bakteri Gram Negatif

Bakteri gram negative adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna metil ungu pada

metode pewarnaan Gram. Bakteri gram positif akan mempertahankan warna ungu gelap

setelah dicuci dengan alcohol, sementara bakteri gram negative tidak.

b. Bakteri Gram Positif

Bakteri gram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat warna metil ungu sewaktu

proses pewarnaan Gram. Bakteri jenis ini akan berwarna biru atau ungu di bawah mikroskop,

sedangkan bakteri gram negative akan berwarna merah muda. Perbedaan klasifikasi antara

kedua jenis bakteri ini terutama didasarkan pada perbedaan struktur dinding sel bakteri

(Aditya,2010)

Bakteri gram negatif memiliki 3 lapisan dinding sel. Lapisan terluar yaitu lipoposakarida

(lipid) kemungkinan tercuci oleh alkohol, sehingga pada saat diwarnai dengan safranin akan

berwarna merah. Bakteri gram positif memiliki selapis dinding sel berupa peptidoglikan yang

tebal. Setelah pewarnaan dengan kristal violet, pori-pori dinding sel menyempit akibat

dekolorisasi oleh alkohol sehingga dinding sel tetap menahan warna biru (Fitria, 2009).

Sel bakteri gram positif mungkin akan tampak merah jika waktu dekolorisasi terlalu lama.

Sedangkan bakteri gram negatif akan tampak ungu bila waktu dekolorisasi terlalu pendek

(Fitria, 2009).

Perbedaan relatif sifat bakteri gram positif dan gram negatif.

Sifat Bakteri garam (+) Bakteri gram negatif(-)


3/15

Komposisi dinding sel Kandungan lipid rendah (1-

4%)

Kandungan lipid tinggi

Ketahanan terhadap

penisilin

Lebih sensitif Lebih tahan

Penghambatan oleh

pewarna basa (VK)

Lebih dihambat Kurang dihambat

Kebutuhan nutrisi Kebanyakan spesies relatif

kompleks

Relatif sederhana

Ketahanaa terhadap

perlakuan fisik

Lebih tahan Kurang tahan

(Manurung, 2010).Pewarnaan tahan asam yang umum digunakan adalah pewarnaan Zieh Neelson dengan

pewarna utama karbol fuksin dengan pemanasan dan pewarna tandingan metilen blue

Loeffler. Perlakuan panas tersebut diganti dengan penggunaan pembasah yaitu suatu deterjen

untuk mengurangi tegangan permukaan lemak, untuk menjamin penetrasi. Pewarna yang

mengandung pembasah ini disebut pewarna Kinyoun (Purwoko, 2010).

Sekali sitoplasma terwarnai, maka sel-sel organisme seperti mikobakteri menahan zat warna

tersebut dengan erat, artinya tidak terpucatkan sekalipun oleh zat yang bersifat keras seperti

asam alkohol (yaitu 3% HCL dalam etanol 95%). Alkohol asam ini merupakan pemucat yang

sangat intensif dan jangan dikelirukan dengan alkohol-aseton yang banyak digunakan dalam

prosedur pewarnaan Gram. Kondisi pewarnaan ini, organisme yang dapat menahan zat warna

itu dikatakan tahan asam dan tampak merah. Bakteri biasa yang dindingnya tidak bersifat

terlampau lipoidal, pewarna karbol fuksin yang mewarnai sel dapat dengan mudah

dipucatkan oleh alkohol-asam dan karenanya dikatakan tak tahan asam. Tercucinya karbol

fuksin dapat diperagakan oleh terserapnya pewarna tandingan biru metilen oleh sel, sehingga

bakteri tersebut tampak biru (Hadioetomo, 1993).

Pewarnaan Ziehl Neelsen. Larutan carbol fuchsin 0,3% dituang pada seluruh permukaan

sediaan, kemudian dipanaskan diatas nyala api sampai keluar asap tetapi tidak sampai

mendidih atau kering selama 5 menit. Sediaan kemudian dibiarkan dingin selama 5-7 menit

lalu kelebihan zat warna dibuang dan dicuci dengan air yang mengalir perlahan. Setelah itu

larutan asam alkohol 3% (hydrochloric acid-ethanol) dituang pada sediaan dan dibiarkan 2-4

menit kemudian dicuci dengan air mengalir selama 1-3 menit, kelebihan larutan dibuang.


4/15

Larutan methylene blue 0,1% dituang sampai menutup seluruh permukaan, dibiarkan 1 menit

lalu larutan dibuang dan dicuci dengan air mengalir (Karuniawati, 2005).

4. Pewarnaan Khusus

Pewarnaan khusus merupakan metode pewarnaan untuk mewarnai struktur khusus atau

tertentu dari bakteri seperti bagian spora, kapsul, flagel dsb. Contoh pewarnaan khusus

:Pewarnaan Endospora Anggota dari genus Clostridium, Desulfomaculatum,

danBacillus adalah bakteri yang memproduksi endospora dalam siklus hidupnya. Endospora

merupakan bentuk dorman dari sel vegetatif, sehingga metabolismenya bersifat inaktif dan

mampu bertahan dalam tekanan fisik dan kimia seperti panas, kering, dingin, radiasi, dan

bahan kimia. Tujuan dilakukannya pewarnaan endospora adalah membedakan endospora

dengan sel vegetatif, sehingga pembedaannya tampak jelas. Endospora tetap dapat dilihat di

bawah mikroskop meskipun tanpa pewarnaan dan tampak sebagai bulatan transparan dan

sangat refraktil. Namun jika dengan pewarnaan sederhana, endospora sulit dibedakan dengan

badan inklusi (Aditya, 2010)

a. Pewarnaan kapsul

Pewarnaan ini menggunakan larutan kristal violet panas, lalu larutan tembaga sulfat sebagai

pembilasan menghasilkan warna biru pucat pada kapsul, karena jika pembilasan dengan air

dapat melarutkan kapsul. Garam tembaga juga memberi warna pada latar belakang yang

berwana biru gelap.

b. Pewarnaan spora

Dinding spora relatif tidak permeable, namun zat warna bias menembusnya dengan cara

memanaskan preparat.

c. Pewarnaan flagel

Pewarnaan flagel dengan memberi suspensi koloid garam asam tanat yang tidak stabil,

sehingga terbentuk presipitat tebal pada dinding sel dan flagel.

d. Pewarnaan nucleoid

Pewarnaan nucleoid menggunakan pewarna fuelgen yang khusus untuk DNA (Rudi, 2010).

III. Alat dan Bahan

Alat :

Gelas Benda 2 Buah

Gelas Penutup 2 Buah

Pipet 4 Buah

Bunsen 1 Buah


5/15

Mikroskop 1 Buah

Tissue Secukupnya

Bahan:

Bakteri Sampel A 1 Tetes

Bakteri Sampel B 1 Tetes

Alkohol 96% 2 Tetes

Air Mengalir

Larutan Kristal Violet 2 Tetes

Safarin 1 Tetes

Larutan Iodin 2 Tetes

IV. Cara Kerja

Disiapkan dua gelas benda dan penutupnya,

Bakteri sempel A dan B diteteskan satu tetes pada masing-masing gelas benda,

Sampel dipanaskan diatas api Bunsen hingga terfiksasi, jangan sampai pecah

1 tetes kristal violet diteteskan di atas gelas benda tersebut kemudian didiamkan selama 30

detik. Setelah itu, gelas benda dibilas dengan aquades hingga warnanya hilang,

1 tetes iodine diteteskan di atas gelas benda tersebut kemudian didiamkan selama 1 menit.

Setelah itu, gelas benda dibilas dengan aquades hingga warnanya hilang,

1 tetes etanol 96% diteteskan di atas gelas benda tersebut kemudian didiamkan selama 30

detik. Setelah itu, gelas benda dibilas dengan aquades hingga warnanya hilang,

1 tetes safranin diteteskan di atas gelas benda tersebut kemudian didiamkan selama 1

menit. Setelah itu, gelas benda dibilas dengan aquades hingga warnanya hilang,

Setelah pembilasan terakhir, gelas benda dikeringkan dan diamati di bawah mikroskop.

Jika terbentuk warna ungu maka termasuk golongan bakteri gram positif , dan jika terbentuk

warna merah atau merah muda maka termasuk golongan bakteri gram negatif.

V. Hasil Pengamatan dan Pembahasan

Tabel Hasil Pengamatan,

No NamaPengamatan Warna

HasilUngu Merah Muda

1 Bakteri Sampel A - Bakteri gram negatif

2 Bakteri sampel B - Bakteri gram positif


6/15

Praktikum ini memiliki tujuan agar praktikan terampil dalam melakukan pewarnaan gram

untuk bakteri gram positif dan negatif, mempelajari teknik pewarnaan gram untuk

pengamatan mikroba, mempelajari bentuk-bentuk dan struktur sel bakteri dari hasil

pengamatan dengan pewarnaan gram, sera membedakan kelompok bakteri berdasarkan

reaksinya terhadap warna dan sekaligus menunjukkan sifat bakteri tersebut.

Prinsip dasar dari pewarnaan ini adalah adanya ikatan ion antara komponen selular dari

bakteri dengan senyawa aktif dari pewarna yang disebut kromogen. Terjadi ikatan ion karena

adanya muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarna (Manurung, 2010).

Pewarnaan Gram adalah pewarnaan diferensial yang sangat berguna dan paling banyak

digunakan dalam laboratorium mikrobiologi, karena merupakan tahapan penting dalam

langkah awal identifikasi. Pewarnaan ini didasarkan pada tebal atau tipisnya lapisan

peptidoglikan di dinding sel dan banyak sedikitnya lapisan lemak pada membran sel bakteri.

Jenis bakteri berdasarkan pewarnaan gram dibagi menjadi dua yaitu gram positif dan gram

negatif. Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tebal dan membran sel selapis.

Sedangkan baktri gram negatif mempunyai dinding sel tipis yang berada di antara dua lapis

membran sel (Manurung, 2010).

Langkah-langkah utama dalam teknik pewarnaan antara lain:

a. Pembuatan olesan bakteri, olesan bakteri tidak boleh terlalu tebal atau tipis.

b. Fiksasi, dapat dilakukan secara pemanasan atau dengan aplikasi bahan kimia seperti

sabun, formalin, fenol.

c. Aplikasi zat warna tunggal, atau lebih dari 1 zat warna. Pewarnaan gram pada praktikum

ini dilakukan dalam 4 tahap yaitu:

a. Pemberian cat warna utama (cairan kristal violet) berwarna ungu.

b. Pengintesifan cat utama dengan penambahan larutan mordan JKJ.

c. Pencucian (dekolarisasi) dengan larutan alkohol asam.

d. Pemberian cat lawan yaitu cat warna safranin.

Keempat tahap tersebut dijelaskan langsung dalam langkah percobaan di bawah ini.

Langkah selanjutnya, 1 tetes kristal violet diteteskan di atas gelas benda tersebut kemudian

didiamkan selama 30 detik. Setelah itu, gelas benda dibilas dengan aquades hingga warnanya

hilang. Kristal violet merupakan reagen yang berwarna ungu. Kristal violet ini merupakan

pewarna primer (utama) yang akan memberi warna pada mikroorganisme target. Kristal

violet bersifat basa sehingga mampu berikatan dengan sel mikroorganisme yang bersifat

asam. Dengan perlakuan seperti itu, sel mikroorganisme yang transparan akan terlihat

berwarna (ungu). Pemberian kristal violet pada bakteri gram positif akan meninggalkan


7/15

warna ungu muda. Perbedaan respon terhadap mekanisme pewarnaan gram pada bakteri

adalah didasarkan pada struktur dan komposisi dinding sel bakteri. Bakteri gram positif

mengandung protein dan gram negatif mengandung lemak dalam persentasi lebih tinggi dan

dinding selnya tipis. Kristal violet yang diteteskan didiamkan selama 30 detik bertujuan agar

cat atau pewarna ini dapat melekat sempurna pada dinding sel bakteri.

Langkah percobaan yang dilakukan oleh praktikan dimulai dengan 1 tetes sampel yang

berupa bakteri sampel A dan bakteri sampel B diteteskan di atas gelas benda yang berbeda.

Kedua gelas benda berisi sampel tersebut dipanaskan (fiksasi) di atas bunsen burner. Hal ini

bertujuan untuk menguapkan air sehingga hanya akan didapat bakteri saja. Proses fiksasi juga

bertujuan supaya bakteri benar-benar melekat pada gelas benda sehingga olesan bakteri

berupa tetesan sampel tidak akan terhapus apabila dilakukan pencucian. Yang perlu

diperhatikan dalam proses fiksasi adalah bidang yang mengandung bakteri dijaga agar tidak

terkena nyala api.

Langkah selanjutnya, 1 tetes iodine diteteskan di atas gelas benda tersebut kemudian

didiamkan selama 1 menit. Setelah itu, gelas benda dibilas dengan aquades hingga warnanya

hilang. Iodine merupakan pewarna Mordan, yaitu pewarna yang berfungsi memfiksasi

pewarna primer yang diserap mikroorganisme target atau mengintensifkan warna utama.

Pemberian iodine pada pengecatan Gram dimaksudkan untuk memperkuat pengikatan warna

oleh bakteri. Kompleks zat iodin terperangkap antara dinding sel dan membran sitoplasma

organisme gram positif, sedangkan penyingkiran zat lipida dari dinding sel organisme gram

negatif dengan pencucian alkohol memungkinkan hilang dari sel. Iodine yang diteteskan

didiamkan selama 1 menit bertujuan agar pengikatan warna oleh bakteri menjadi semakin

lebih kuat.

Selanjutnya, 1 tetes alkohol 96% diteteskan di atas gelas benda tersebut kemudian didiamkan

selama 30 detik. Setelah itu, gelas benda dibilas dengan aquades hingga warnanya hilang.

Etanol 95% merupakan solven organik yang berfungsi untuk membilas (mencuci) atau

melunturkan kelebihan zat warna pada sel bakteri (mikroorganisme). Tercuci tidaknya warna

dasar tergantung pada komposisi dinding sel, bila komponen dinding sel kuat mengikat

warna, maka warna tidak akan tercuci sedangkan bila komponen dinding sel tidak kuat

menelan warna dasar, maka warna akan tercuci. Pemberian alkohol pada pengecatan ini dapat

mengakibatkan terjadinya dua kemungkinan yaitu mikroorganisme (bakteri) akan tetap

berwarna ungu atau bakteri menjadi tidak berwarna. Pemberian alkohol 96% juga

menyebabkan terekstraksi lipid sehingga memperbesar permeabilitas dinding sel.

Reaksi yang terjadi ketika penambahan alkohol 96%


8/15

gram + : lipid > + alkohol 96% pori dinding sel yang terbentuk besar, protein

dinding sel terdehidrasi, pori tidak tertutup (kompleks kristal violet-iodine tercuci)

Alkohol 96% yang diteteskan di atas gelas benda didiamkan selama 30 detik kemudia dibilas

dengan aquades dengan tujuan agar warna dapat luntur secara sempurna dan tidak ada yang

tersisa di dalam gelas benda.

Setelah pembilasan reagen alkohol 96% pada gelas benda sebelumnya, selanjutnya diteteskan

1 tetes safranin di atas gelas benda tersebut kemudian didiamkan selama 1 menit. Setelah itu,

gelas benda dibilas dengan aquades hingga warnanya hilang. Safranin merupakan pewarna

tandingan atau pewarna sekunder. Zat ini berfungsi untuk mewarnai kembali sel-sel yang

telah kehilangan pewarna utama setelah perlakuan dengan alkohol. Dengan kata lain, safranin

memberikan warna pada mikroorganisme non target serta menghabiskan sisa-sisa cat atau

pewarna. Pewarnaan safranin masuk ke dalam sel dan menyebabkan sel menjadi berwarna

merah pada bakteri gram negatif sedangkan pada bakteri gram positif dinding selnya

terdehidrasi dengan perlakuan alkohol, pori pori mengkerut, daya rembes dinding sel dan

membran menurun sehingga pewarna safranin tidak dapat masuk sehingga sel berwarna

ungu.

Pemberian reagen atau pewarna yang berganti dari satu pewarna ke pewarna lain dengan

waktu yang telah ditentukan disebabkan karena zat-zat warna tersebut dapat berikatan dengan

komponen dinding sel bakteri dalam waktu singkat. Karena itulah rentang waktu pemberian

zat warna yang satu ke yang lainnya tidak lama sehingga proses identifikasi bakteri

berlangsung cepat (efisiensi waktu).

Setiap akhir pemberian reagen atau pewarna, selalu dilakukan pembilasan terhadap gelas

benda dengan menggunakan aquades. pembilasan ini bertujuan untuk mengurangi kelebihan

setiap zat warna yang sedang diberikan. Setiap akhir pembilasan pada masing-masing reagen,

perlu dilakukan penyerapan air bilasan dari aquades dengan menggunakan kertas tissu agar

aquades tidak tercampur dengan reagen atau pewarna baru yang akan diberikan. Setelah

pembilasan terakhir, gelas benda dikeringkan dan diamati di bawah mikroskop. Jika

terbentuk warna ungu maka termasuk golongan bakteri gram positif , dan jika terbentuk

warna merah atau merah muda maka termasuk golongan bakteri gram negatif.

Gambar skematik langkah kerja yang dilakukan oleh praktikan


9/15

Tabel prosedur pewarnaan gram
http://4.bp.blogspot.com/-g6SGvhdhx4U/TqbVy0x82VI/AAAAAAAAAA4/dibrfTDVIzQ/s1600/langkah2.pnghttp://2.bp.blogspot.com/-2v1vL6MbTko/TqbVq0OeIdI/AAAAAAAAAAw/N3hXjzCzLLQ/s1600/langkahpipet.jpghttp://4.bp.blogspot.com/-g6SGvhdhx4U/TqbVy0x82VI/AAAAAAAAAA4/dibrfTDVIzQ/s1600/langkah2.pnghttp://2.bp.blogspot.com/-2v1vL6MbTko/TqbVq0OeIdI/AAAAAAAAAAw/N3hXjzCzLLQ/s1600/langkahpipet.jpghttp://lh5.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKm50I3SNI/AAAAAAAAAZc/XtlICBSi9iw/image13.pnghttp://biobakteri.files.wordpress.com/2009/06/pewarnaan-gram.jpghttp://3.bp.blogspot.com/-vGePhc9w3vE/TqbV_FSHynI/AAAAAAAAABA/mtmlaJhaDdo/s1600/ecoli.jpg


10/15

(Pradhika, 2008)

Zat warna adalah senyawa kimia berupa garam-garam yang salah satu ionnya berwarna.

Garam terdiri dari ion bermuatan positif dan ion bermuatan negatif. Senyawa-senyawa kimia

ini berguna untuk membedakan bakteri-bakteri karena reaksinya dengan sel bakeri akan

memberikan warna berbeda. Perbedaan inilah yang digunakan sebagai dasar pewarnaan

bakteri. Sel-sel warna dapat dibagi menjadi dua golongan yaitu asam dan basa. Jika warna

terletak pada muatan positif dari zat warna, maka disebut zat warna basa. Jika warna terdapat

pada ion negatif, maka disebut zat warna asam. Contoh zat warna basa adalah methylen blue,

safranin, netral red, dan lain-lain. Sedangkan anionnya pada umumnya adalah Cl-

, SO4 -

,

CH3COO-, COOHCOO. Zat warna asam umumnya mempunyai sifat dapat bersenyawa lebih

cepat dengan bagian sitoplasma sel sedangkan zat warna basa mudah bereaksi dengan bagian-

bagian inti sel (Rudi, 2010).

Pewarnaan bakteri dipengaruhi oleh faktor-faktor seperti fiksasi, peluntur warna, substrat,

intensifikasi pewarnaan, dan penggunaan zat warna penutup. Pada bakteri gram positif

menunjukkan warna biru ungu dan bakteri gram negatif berwarna merah. Dalam praktikum

ini digunakan salah satu pewarnanya yaitu safranin yang sesuai teori bersifat basa sehinggalebih mudah bersenyawa atau bereaksi dengan bagian-bagian inti sel bakteri.
http://2.bp.blogspot.com/-q399TBwcu38/TqbWDdRb6LI/AAAAAAAAABI/rWlGCdo_1TQ/s1600/tabelkerja.pnghttp://lh6.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKmyBsvNzI/AAAAAAAAAZU/ZVkovvw7ErU/image9.png


11/15

Bakteri Gram negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna metil ungu pada

metode pewarnaan Gram. Bakteri gram positif akan mempertahankan zat warna metil ungu

gelap setelah dicuci dengan alkohol, sementara bakteri gram negatif tidak. Pada uji

pewarnaan Gram, suatu pewarna penimbal (counterstain) ditambahkan setelah metil ungu,

yang membuat semua bakteri gram negatif menjadi berwarna merah atau merah muda.

Pengujian ini berguna untuk mengklasifikasikan kedua tipe bakteri ini berdasarkan perbedaan

struktur dinding sel mereka (Rudi, 2010).

Hasil pengamatan di bawah mikroskop menunjukkan bahwa bakteri sampel A memiliki

warna merah muda (gram negative), dan Bakteri sampel B memilki warna ungu (gram

positif).

1. Escherichia coli

GambarE.coli dengan perbesaran 1000 x

Klasifikasi ilmiah

Kingdom : Bakteria

Filum : Proteobacteria

Kelas : Gamma Proteobacteria

Order : Enterobacteriales

Famili : Enterobacteriaceae

Genus :Escherichia

Spesies :E. coli

Berdasarkan hasil pengamatan, terdapat bakteriEschericia coli pada air WC.

BerbentukE. coli adalah basil (batang) yang pendek. Bakteri tersebut pada saat diwarnai

menunjukkan warna merah muda yang berarti bahwa bakteri ini bersifat gram negatif.
http://3.bp.blogspot.com/-vGePhc9w3vE/TqbV_FSHynI/AAAAAAAAABA/mtmlaJhaDdo/s1600/ecoli.jpg


12/15

Menurut literatur,E. coli termasuk dalam famili Enterobacteraceae yang termasuk bakteri

gram negatif dan berbentuk batang yang fermentatif.E.coli hidup dalam jumlah besar di

dalam usus manusia, yaitu membantu sistem pencernaan manusia dan melindunginya dari

bakteri patogen. Akan tetapi pada strain baru dariE.coli merupakan patogen berbahaya yang

menyebabkan penyakit diare, sindrom diare lanjutan, muntaber, hemolitik uremic (hus),

infeksi usus, infeksi saluran urin, dan neonatal meningitis. Peranan yang mengguntungkan

adalah dapat dijadikan percobaan limbah di air, indikator pada level pencemaran air serta

mendeteksi patogen pada feses manusia yang disebabkan oleh Salmonella typhi. Disamping

itu,E. coli banyak digunakan dalam teknologi rekayasa genetikadan biasa digunakan

sebagai vektoruntuk menyisipkan gen-gen tertentu yang diinginkan untuk dikembangkan

karena bakteri ini memiliki pertumbuhan yang sangat cepat dan mudah dalam penanganannya

(Fajriana, 2008).

Infeksi E.coli O157:H7 yang patogen pada manusia yaitu yang bersifat verotoksigenik yang

telah menyebabkan 16.000 kasus penyakit melalui makanan (Food Born Diseases) dan 900

orang meninggal per tahun di AS, dengan perkiraan annual cost $ 200,000 hingga $ 600,000.

Kejadian wabah tunggal pada tahun 1993 di Western AS telah menyebabkan 700 orang

menderita sakit dan 4 orang meninggal (Sartika, 2005).

VI. Kesimpulan

1. Pewarnaan yang digunakan dalam praktikum ini adalah pewarnaan Gram. Pewarnaan

Gram adalah pewarnaan yang didasarkan pada tebal atau tipisnya lapisan peptidoglikan pada

dinding sel dan banyak sedikitnya lapisan lemak pada membran sel bakteri. Pewarnaan ini

berguna untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, yakni bakteri gram

positif dan gram negatif. Langkah-langkah utama dalam teknik pewarnaan bakteri antara lain:

a. Pembuatan olesan bakteri

b. Fiksasi

c. Aplikasi zat warna tunggal, atau lebih dari 1 zat warna.

2. Teknik pewarnaan gram pada praktikum ini dilakukan dalam 4 tahap yaitu:

a. Pemberian cat warna utama (cairan kristal violet) berwarna ungu.

b. Pengintesifan cat utama dengan penambahan larutan mordan JKJ.

c. Pencucian (dekolarisasi) dengan larutan alkohol asam.

d. Pemberian cat lawan yaitu cat warna safranin.

3. Dari hasil pengamatan warna bakteri, pada sampel A dapat dikelompokkan dalam bakteri

gram negatif karena menunjukkan warna merah muda ketika diamati di bawah mikroskop.
http://id.wikipedia.org/wiki/Rekayasa_genetikahttp://id.wikipedia.org/wiki/Vektorhttp://id.wikipedia.org/wiki/Genhttp://id.wikipedia.org/wiki/Genhttp://id.wikipedia.org/wiki/Vektorhttp://id.wikipedia.org/wiki/Rekayasa_genetika


13/15

4. Dari hasil pengamatan warna bakteri, pada sampel B dapat dikelompokkan dalam bakteri

gram positif karena menunjukkan warna ungu ketika diamati di bawah mikroskop.


14/15

VII. Daftar Pustaka

Aditya, Mushoffa. 2010. Teknik Pewarnaan

Bakteri.http://mushoffaditya.blogspot.com/2010/01/teknik-pewarnaan-bakteri.html. 11

November 2010.

Dwijoseputro, d. 1994.Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djambatan.

Fajriana, Rizki. 2008.Mikrobiologi Umum Pewarnaan Gram. http //pewarnaan

bakteri\MikroumPewarnaan Gram RIZQI FAJRIANA BLOGS.htm/. 11 November

2010.

Fitria, Bayu. 2009.Pewarnaan Gram (Gram positif dan Gram

Negatif).http://biobakteri.wordpress.com/2009/06/07/7-pewarnaan-gram-gram-positif-dan-

gram-negatif.11 November 2010.

Hadioetomo, R. S. 1993.Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta : Gramedia.

Hardiningsih, Riani, Rostiati Nonta Refina Napitupulu, dan Titin Yulinery. 2006. Isolasi dan

Uji Resistensi Beberapa IsolatLactobacilluspada pH Rendah.Biodiversitas Vol 7 No. 1.

Karuniawati, Risdiyani, S. Nilawati, Prawoto, Y. Rosana, B. Alisyahbana, I. Parwati, Wia

Melia, dan T.M. Sudiro. 2005. Perbandingan Tan Thiam Hok, Ziehl Neelsen dan Fluorokrom

sebagai Metode Pewarna Basil Tahan Asam untuk Pemeriksaan Mikroskopik

Sputum.Makara Kesehatan Vol. 9 No. 1.

Manurung, Pebrin. 2010.Pengamatan Bentuk

Bakteri.http://pebrinmanurung.blogspot.com/2010/10/pengamatan-bentuk-bakteri.html. 11

November 2010.

Pradhika, E. Indra. 2008.Morfologi Mikroba. http://ekmon-

saurus.blogspot.com/2008/11/bab-5-morfologi-mikroba.html. 11 November 2010.

Purwoko, Tjahjadi. dkk. 2010.Petunjuk Praktikum Mikrobiologi.Laboratorium Mikrobiologi

UNS.
http://mushoffaditya.blogspot.com/2010/01/teknik-pewarnaan-bakteri.html.%2011%20November%202010http://mushoffaditya.blogspot.com/2010/01/teknik-pewarnaan-bakteri.html.%2011%20November%202010http://mushoffaditya.blogspot.com/2010/01/teknik-pewarnaan-bakteri.html.%2011%20November%202010http://mushoffaditya.blogspot.com/2010/01/teknik-pewarnaan-bakteri.html.%2011%20November%202010http://mushoffaditya.blogspot.com/2010/01/teknik-pewarnaan-bakteri.html.%2011%20November%202010


15/15

Reyza, Muhammad. 2008.Metode

PewarnaanGram.http://qi206.wordpress.com/2008/10/17/mikroba/pewarnaan/ 11 November

2010.

Rudi. 2010.Bakteri Gram dan Pewarnaannya.http://rudyregobiz.wordpress.com/bakteri-

gram-dan-pewarnaannya-2/. 11 November 2010.

Sartika, Ratu Ayu, Yvonne M. Indrawani, dan Trini Sudiarti. 2005. Analisis

MikrobiologiEscherichia coli O157:H7pada Hasil Olahan Hewan Sapi dalam Proses

Produksinya.Makara Kesehatan Vol 9 No. 1.

Seri, Nesty Dwiyani. 2010.Bakteri Tahan Asam.

http://my.opera.com/chanlightz/blog/2010/07/13/bakteri-tahan-asam. 11 November 2010.

laporan mikro biologi pewarnaan gram

Documents