不規則抗体検査の基礎 -...

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不規則抗体検査の基礎

2017年11月16日

株式会社イムコア


赤血球抗原

Kell(K,k,Kpa,Jsa) Rh(D,C,c,E,e)

Duffy(Fya,Fyb,Fy3) MNS(M,N,S,s)

• ABO(A,B)

• Kidd(Jka, Jkb)

• Lewis(Lea, Leb)

赤血球表面にはABO以外にも多くの抗原が存在

α-スペクトリン β-スペクトリンスペクトリン反復

アンキリン

アデューシン

トロポモジュリン

トロポミオシン

アクチン

デマチン

Glut 1 Duffy

Kell


種々の血液型と血液型抗原

血液型血液型抗原

ABO A, B

Rh D, C, E, c, e, ・・・

MNS M, N, S, s, ・・・

Lewis Lea, Leb

Kell K, k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb, ・・・

Duffy Fya, Fyb

Kidd Jka, Jkb

Diego Dia, Dib, Wra, Wrb, ・・・

・・・・・・

36の血液型と300以上の血液型抗原が知られている


血液型と血液型抗原

①

②

③

④

⑤

⑥

・・・

A

+

0

+

0

+

+

B

0

+

+

0

0

0

D

+

+

+

+

0

+

C

+

0

+

0

0

+

E

0

+

+

+

0

+

c

0

+

+

+

+

+

e

+

0

+

0

+

+

M

+

+

0

0

+

+

N

+

0

+

+

0

+

・・・・・・

ABO Rh MNS

・・・


不規則抗体とは

• A抗原、B抗原以外の赤血球抗原に対する抗体（規則抗体以外の抗体）。

• 抗原陰性の人の血清（血漿）中に必ず抗体が存在するわけではない

• 輸血や妊娠などの同種免疫によって産生される免疫抗体

• 同種免疫によらず産生される自然抗体

• 不規則抗体は検査の対象および方法によって異なるが1%未満から数%の人に認められる


不規則抗体の臨床的意義

• 臨床的意義のある抗体

– 対応する血液型抗原をもつ赤血球を体内で破壊する抗体

– 溶血性輸血副作用や新生児溶血性疾患の原因となる抗体

• 臨床的意義のない抗体

– 対応する血液型抗原をもつ赤血球を体内で破壊しない抗体

– 溶血性輸血副作用や新生児溶血性疾患の原因にならない抗体

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免疫応答について

輸血または妊娠により、自分にない血液型抗原にさらされる

抗体（免疫抗体）の産生一次免疫応答

輸血により、再度同じ血液型抗原にさらされる

急激な抗体の産生・抗原の排除二次免疫応答


急性溶血性輸血副作用（AHTR）

24時間以内に発症

多くはABO不適合輸血が原因で血管内溶血が多い

遅発性溶血性輸血副作用（DHTR）

24時間以降に発症

多くは不規則抗体による二次免疫応答が原因で血管外溶血が多い

溶血性輸血副作用


血管内溶血と血管外溶血

赤血球上の血液型抗原に対応する抗体が結合

補体の活性化

赤血球の破壊

血管内溶血血管外溶血

マクロファージによる赤血球の捕捉

赤血球の破壊

（体内を循環）

急性溶血性輸血副作用（AHTR）遅発性溶血性輸血副作用（DHTR）


妊婦において・・・

母親の血漿中のIgGは胎盤を通過し、胎児の血液循環により入りこむ

IgMは胎盤を通過しない

IgG抗体が胎児赤血球上の抗原に対応している場合、胎児赤血球の破壊される可能性がある

この状態は胎児・新生児溶血性疾患(HDFN)と呼ばれ、

胎児・新生児溶血性疾患が重症な場合は、胎児や新生児に致命的なことがある

胎児・新生児溶血性疾患 (HDFN, Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn)


ABO, H, Lewis, P関連抗原は糖鎖構造を持つ

遺伝子は糖転移酵素をコードしている

Rh, Kidd, Duffy, MNS, Kell, Diegoなどの抗原は赤血球膜蛋白上に存在

遺伝子は蛋白をコードしている

糖鎖系抗原と蛋白系抗原


Rh血液型

Rh血液型システムには54種類の抗原が存在

1940年にLandsteinerとWienerが動物免疫由来のアカゲザ(Rhesus Monkey)血球に対する凝集素が白人の85%を凝集させる抗体を発見したことに由来

(後にこの抗体はLWに対する抗体であることが判明)

Rh血液型はABO血液型についで臨床的に最も重要なもののひとつされている

一般的に問題となる抗原はD, C, E, c, eの5つ

Rh抗原は2つ遺伝子であるRHDとRHCEにコードされている

特にD抗原は免疫原性が強く, 抗Dが産生されやすい。

抗Dは輸血副作用や新生児溶血性疾患の原因となることから、ルーチン検査でD抗原の有無が検査されている

3


日本人におけるRhD(－)の頻度は

約0.5%（200人に1人の割合）

D抗原の頻度（輸血学改訂第3版より）日本人 99.5%

白人 83.2%

黒人 91.6%

Rh血液型


Rh血液型 • Rh血液型システムの重要な抗原は次の5つ

• D抗原－ d抗原はなし

• C抗原

• c抗原

• E抗原

• e抗原

対立抗原

対立抗原

赤血球膜

細胞外

細胞内

RhCEタンパク

c/C

Trp16Cys

c/C

Leu60Ile c/C

Asn68Ser

c/C

Pro103Ser

e/E

Ala226Pro

The Blood Group Antigen Facts Book Third Edition, Marion E. Reid et al より

NH2

COOH


Rh血液型主要ハプロタイプの頻度

遠山博, 輸血学改訂第三版, 抜粋

抗原表現型日本人の頻度 (%)

D, C, e R1 65.3

D, c, E R2 25.6

c, e, r 3.8

c, E r´´ 3.3

D, c, e R0 1.2

C, e r´ 0.6

D, C, E Rz 0.13

C, E ry 0.07


Rh血液型 Rh表現型の頻度 (D陽性)

遠山博, 輸血学改訂第三版, 抜粋

D C c E e 表現型

(最もあり得る型) 日本人の頻度(%)

+ + －－ + DCe/DCe R1R1 43

+ + + + + DCe/DcE R1R2 35

+ － + + － DcE/DcE R2R2 10

+ + + － + DCe/dce R1r 7

+ － + + + DcE/dce R2r 3

+ + － + + DCe/DCE R1Rz 0.5

+ －＋－＋ Dce/dce R0r

+ + + + － DcE/DCE R2Rz

+ + － + － DCE/DCE RzRz


Rh血液型

D, C, c, E, e抗原の特徴

Ficin/Papain：耐性(著しく反応が増強される)

DTT 200 mM：耐性

酸性：耐性 The Blood Group Antigen Facts Book Third Edition, Marion E. Reid et al より


Rh血液型

HDFN

抗原抗体検出頻度臨床的意義 DHTRの発症頻

度重篤可能性高い可能性低い

D △ Yes

C ○ Yes ○ ✔

E ◎ Yes ○ ✔

c ◎ Yes ○ ✔

e ○ Yes ○ ✔

抗D, 抗C, 抗c, 抗E, 抗eの臨床的意義

輸血副作用ガイド, Ver 1.0 2014/11/01

日本輸血・細胞治療学会より抜粋

大戸斉 , 小児輸血学より抜粋 ◎：High 高い, ○:medium ふつい, △：Low 低い

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Kidd血液型

Kidd血液型システムにはJka, Jkb, Jk3の3種類の抗原が存在

1951年にKidd夫人の新生児溶血性を起こした第6子(John Kidd)に由来

主要な抗原はJkaとJkb

抗Jka, 抗Jkbは消失が早いとされている

Jka, Jkb抗原の特徴

Ficin/Papain：耐性 (反応増強)

DTT 200 mM：耐性

酸性：耐性

表現型日本人の頻度(%)

Jk(a+b-) 22.4

Jk(a+b+) 50.4

Jk(a-b+) 27.2 遠山博, 輸血学改訂第3版, より抜粋


Kidd血液型

HDFN

抗原検出頻度臨床的意義 DHTRの発症頻度重篤可能性高い可能性低い

Jka ○ Yes ◎ ✔

Jkb ○ Yes ◎ ✔

抗Jka, 抗Jkbの臨床的意義

輸血副作用ガイド, Ver 1.0 2014/11/01


◎：High 高い, ○:medium ふつい, △：Low 低い大戸斉 , 小児輸血学より抜粋


Diego血液型

Diego血液型システムにはDia, Dib, Wra, Wrbなどの22種類の抗原が存在

ベネズエラでのHDFN症例での抗体産生者から名付けれた

主要な抗原はDiaとDib

DiaとDibは対立抗原

Diaは白人、黒人では稀だが、日本人では約10%が陽性で重要な抗原

Dibは高頻度抗原

抗Wraは1/600名の割合で検出されるとされているが、

Wr(a+)血球は稀なため検出されることは稀

Dia, Dib抗原の特徴

Ficin/Papain：耐性

DTT 200 mM：耐性

酸性：耐性


Diego血液型

表現型日本人の頻度(%) 白人の頻度(%) 黒人の頻度(%)

Di(a+b-) 0.2 まれまれ

Di(a+b+) 9.0 まれまれ

Di(a-b+) 90.8 100 100

遠山博, 輸血学改訂第3版, より抜粋,


Diego血液型

HDFN


Dia ○ Yes △ ✔

Dib △ Yes △ ✔

抗Dia, 抗Dibの臨床的意義

輸血副作用ガイド, Ver 1.0 2014/11/01




MNS血液型

MNS血液型システムにはM, N, S, sなどの49種類の抗原が存在

1927年にLandsteinerとLevineによって発見された

Mはヒト赤血球で免疫したウサギの抗体(抗M) ”immune” に由来

NはMの次で、”immune”5番目

Sは1947年に同定され、シドニー(オーストラリア)に由来

血液型は3つの抗原(M, N, S)になんで名付けられた

5


MNS血液型

主要な抗原はM, N, S, s

MとN, Sとsは対立抗原

MN抗原は糖タンパクのグリコフォリンAに存在

Ss抗原はグリコフォリンBに存在

抗M, 抗NはIgG型でも直接凝集を示す

抗M, 抗Nの多くは自然抗体

抗Mは酸性で反応が増強されることがある

抗Mは重篤なHDFNの原因になることがある

これは赤血球の産生抑制によると考えられている

細胞外細胞内

AABB Technical Manual 18thより

M, N抗原の特徴

Ficin/Papain：感受性

DTT 200 mM：耐性

酸性：耐性

The Blood Group Antigen Facts Book Third

Edition, Marion E. Reid et al より抜粋


MNS血液型

s抗原は免疫原性が低く、抗sが検出される

ことは稀と考えられている

細胞外細胞内


S, s抗原の特徴

Ficin/Papain：可変

DTT 200 mM：耐性

酸性：耐性




MNS血液型


M+N- 28.3

M+N+ 49.4

M-N+ 22.3

S+s- 0.5

S+s+ 10.7

S-s+ 88.8 遠山博, 輸血学改訂第3版, より抜粋


MNS血液型

HDFN

抗原検出頻度臨床的意義 DHTRの発症

頻度重篤可能性高い可能性低い

関与

しない

M ◎ Rare ✔

N No

S ○ Yes △ ✔

s Yes △ ✔

抗M, 抗N, 抗S, 抗sの臨床的意義

輸血副作用ガイド, Ver 1.0 2014/11/01




Duffy血液型

Duffy血液型システムにはFya, Fyb, Fy3, Fy5, Fy6の5種類の抗原が存在

1950年にMr. Duffyの血清中で同定され、後ろ2文字から名付けれた。

主要な抗原はFyaとFyb

FyaとFybは対立抗原

Fya, Fyb抗原の特徴


DTT 200 mM：耐性

酸性：耐性


Fy(a+b-) 80.4

Fy(a+b+) 18.5

Fy(a-b+) 1.1 遠山博, 輸血学改訂第3版, より抜粋


Duffy血液型

HDFN


Fya △ Yes △ ✔

Fyb ○ Yes △ ✔

抗Fya, 抗Fybの臨床的意義

輸血副作用ガイド, Ver 1.0 2014/11/01



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Lewis血液型

Lewis血液型システムにはLea, Lebなどの6種類の抗原が存在

1946年に発見され、抗Lea保有者に由来して名付けられた

主要な抗原はLeaとLeb

Lewis抗体はLe(a-b-)の人が自然抗体として産生していることが多い

Lea, Leb抗原の特徴

Ficin/Papain：耐性 (著しく反応増強が増強)

DTT 200 mM：耐性

酸性：耐性 The Blood Group Antigen Facts Book Third



Lewis血液型

表現型赤血球の反応分泌/非分泌唾液中の型物質日本人の頻度

(%)

抗Lea 抗Leb ABH Lewis

Le(a+b-) + -* 非分泌微量~なし Lea 17.0

Le(a-b+) - + 分泌型 A, B, H Lea(少量） Leb(大量）

73.0

Le(a-b-) - - 非分泌

分泌型

微量～なし

A, B, H

なし

なし

1.5

8.5

*Sew(Sej)遺伝子を持つ場合, Le(a+b+w)と判定されることがある「輸血・移植検査技術教本」より抜粋


Lewis血液型

HDFN



関与

しない

Lea ◎ Rare ✔

Leb ◎ No ✔

抗Lea, 抗Lebの臨床的意義

輸血副作用ガイド, Ver 1.0 2014/11/01




P1PK血液型

P1PK血液型システムにはP1, Pk, NORの3つの抗原が存在

P1抗原は1927年に発見され、すでにM, N, Oが割り当てれていたことからPとされた

2010年にPkが加わり、P血液型システムからP1PKに変更

P1抗原は個人間で抗原量の差が大きい

抗P1は自然抗体として産生されていることが多い

P1抗原の特徴

Ficin/Papain：耐性 (著しく反応増強が増強)

DTT 200 mM：耐性

酸性：耐性




P1PK血液型

表現型血清中の抗体抗P1 抗P 抗Pk 抗PP1Pk 日本人の頻(%)

P1 なし + + － + 31

P2 時に抗P1 － + － + 69

P1k 抗P + － + +

きわめてまれ P2k 抗P －－ + +

p 抗(P1)PPk －－－－


生合成遠山博, 輸血学改訂第3版, より抜粋


P1PK血液型

HDFN



関与

しない

P1 ◎ No ✔

抗P1の臨床的意義

輸血副作用ガイド, Ver 1.0 2014/11/01



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Jr血液型

Jr血液型にはJra 1つの抗原のみが存在

Jraは高頻度抗原である

日本人のJr(a-)の頻度は0.065%, 1/1500人 (輸血学改訂第3版より)



Jra抗原の特徴

Ficin/Papain：耐性(増強)

DTT 200 mM：耐性

酸性：耐性


Jr血液型

HDFN

抗原検出頻度臨床的意義 DHTRの発症頻度重篤可能性高い可能性低い関与しない

Jra △ occasionally ✔

抗Jraの臨床的意義

輸血副作用ガイド, Ver 1.0 2014/11/01




Xg血液型

Xg血液型システムにはXgなどの2種類の抗原が存在

1962年に頻回輸血を受けた男性患者から発見

遺伝子がX染色体上に存在するため、男性よりも女性に多く存在

X染色体の”X”, 患者が処置を受けた場所”Grand Rapids(ミシガン州)”のgに由来

主要な抗原はXga

Xgは免疫原性が低いとされている

抗Xgaは自然抗体であること多い

抗XgaはIgG型であることが多い

Xg抗原の特徴


DTT 200 mM：耐性


Xg血液型

表現型性別日本人の頻度(%)

Xg(a+) 男 69.4

女 88.8

Xg(a-) 男 30.6

女 11.2

遠山博, 輸血学改訂第3版, より抜粋


Xg血液型

HDFN

抗原検出頻度臨床的意義 DHTRの発症頻度重篤可能性高い可能性低い関与しない

Xga △ No ✔

抗Xgaの臨床的意義

小児輸血学, 大戸斉 , 抜粋,

輸血副作用ガイド, Ver 1.0 2014/11/01


◎：High 高い, ○:medium ふつい, △：Low 低い


Kell血液型

Kell血液型システムには36種類の抗原が存在

1946年に胎児・新生児溶血性疾患に関連した抗体として発見され、抗体を保有した女性、”Kelleher”に由来

K, k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsbなどの抗原が存在するが、

日本人では、ほとんどがK－k+, Kp(a－b+), Js(a－b+)であるため、問題になることはほとんどない

通常、Kell糖タンパクは赤血球前駆体に早い段階で出現することから、

抗KによるHDFNは、溶血の程度は低く、赤血球産生抑制による貧血になると考えられている

8


Kell血液型

K, k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb抗原の特徴

Ficin/Papain：耐性

DTT 200 mM/50mM：感受性

酸性：感受性

The Blood Group Antigen Facts Book Third Edition, Marion E. Reid et al より一部より抜粋


抗体

• 免疫グロブリン（Immunoglobulin）

• 5種類

– IgG, IgM, IgA, IgE, IgD


30～45nm

S－S結合 L鎖

J鎖

U

糖鎖

H鎖

7.5～14nm

IgMとIgG

抗原結合部位の数

IgM IgG

10 2

抗原結合部位

抗原結合部位


IgM及びIgG抗体 IgM IgG

室温以下で反応することが多い

自然抗体であることが多い

胎盤を通過しない

HDFNを生じない

次のような特異性であることが多い

– 抗Lea, 抗Leb

– 抗M, 抗N (抗MはIgGの場合もある)

– 抗P1

– 抗I

37℃で反応することが多い

免疫抗体であることが多い

胎盤を通過する

HDFNを生じる

次のような特異性であることが多い

– 抗D, 抗C, 抗c, 抗E, 抗e

– 抗Fya, 抗Fyb, 抗Jka, 抗Jkb

– 抗S, 抗s, 抗Xga, 抗Dia

– 抗K, 抗k

4つのサブクラス：IgG1, 2, 3, 4


IgGサブクラス

IgG1 IgG2 IgG3 IgG4

血球濃度(IgGに占める割合) 60~80% 14~25% 4~8% 2~6%

半減期 21~22日 21~22日 5~16日 21~22日

補体活性化有り(普通) 有り(弱い) 最強無

単球付着能有無最強無

胎盤通過性最大普通普通普通

遠山博, 輸血学改訂第3版, より抜粋


不規則抗体検査の流れ

スクリーニング検査…不規則抗体の有無を調べる

同定試験 …抗体の特異性を調べる

陽性陰性

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不規則抗体検査

血清（血漿）

凝集

溶血

非凝集

I II III

スクリーニング血球

Dia


不規則抗体スクリーニング用赤血球試薬

• O型の赤血球で構成されている

→ABO血液型に関係なく検査可能

（抗A、抗Bと反応しない）

• 主な血液型抗原が含まれている

– D, C, E, c, e, Jka, Jkb, Fya, Fyb,

M, N, S, s, P1, Lea, Leb, Dia, Dib

→主な血液型抗原に対する抗体を検出可能


Di(a+)赤血球について

– Diego血液型に属する抗原の一つ

– 抗原の頻度

• 白人：まれ • 日本人：約9～10% →日本人では輸血や妊娠によりDi(a-)の人が

Di(a+)の赤血球に一定の割合でさらされる

– 抗Diaは溶血性輸血副作用や新生児溶血性疾患の原因となる

– スクリーニング検査でDi(a+)の赤血球使用する必要がある


スクリーニング血球について

注意:ほとんどの血球はDi(a-b+)である


染色体

E

e

e

e

E

E

遺伝子

Eの

ホモ（同種）接合

eの

ホモ（同種）接合

ヘテロ（異種）接合

E抗原

e抗原

対立遺伝子と量的効果

量的効果を示す抗原：Rh（C,c,E,e), Kidd(Jka,Jkb), Duffy(Fya,Fyb), MNS(M,N,S,s,) 等


量的効果

• ホモ接合体の抗原はヘテロ接合体の抗原よりも対応する抗体との反応が強い傾向がある

• 抗体が弱い場合、ホモ接合体の抗原のみで陽性となることがある

• 不規則抗体スクリーニングに使用する赤血球はホモ接合体の抗原を含むことが望ましい

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不規則抗体検査の検査法

• 試験管法

- 生理食塩液法

- 間接抗グロブリン試験

- 酵素法

• 固相法

• カラム凝集法

など


電気二重層（ゼータ電位）－18～21 ｍV

生理食塩液に浮かべた赤血球

＋

赤血球－

－

－－

－－

－

－

－

－－

－－

－

－

－－

－－

－

－

－－

－

－

＋

＋

赤血球－

－

－－

－－

－

－

－

－－

－－

－

－

－－

－－

－

－

－－

－

－

＋

赤血球のシアル酸による陰性荷電

陽性荷電（Na＋）のイオン雲

反発力

＋＋

(15-16 nm) ＋

＋

＋

＋＋

＋

＋＋


IgM型の抗体

赤血球の橋渡し → 凝集

生理食塩液法

生理食塩水に

浮遊させた

赤血球

＋

＋

＋

＋＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋－

－－

－

－－

－

－－

－

－

－

電気二重層

ある一定以上

近づけない

赤血球


生理食塩液法の流れ（例）

被検血清（血漿）＋赤血球浮遊液

遠心・判定

（場合によりインキュベーション）


混和

患者血漿（血清） 2滴

スクリーニング血球 1滴

遠心

凝集の有無を確認判定（即時遠心）

（場合によりインキュベーション）

Ⅱ

Ⅰ

Ⅲ

Dia

生理食塩液法の検査方法


生理食塩液法

基本的にIgM型の抗体が検出される

抗P1、抗Lea、抗Le

b、抗M、抗N など

11


＋

＋

＋

＋＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋－

－－

－

－－

－

－－

－

－

－

IgG型の抗体

間接抗グロブリン試験

：抗ヒトグロブリン抗体

凝集しない

凝集する


反応増強剤の添加,混和

患者血漿(血清） 2滴

１滴

遠心

凝集の有無を確認、陰性の場合にはIgG感作赤血球を添加判定

洗浄

抗ヒトグロブリン抗体

37℃ インキュベーション

Ⅱ Ⅰ Ⅲ Dia

スクリーニング血球

ポリエチレングリコール液 (PEG)

低イオン強度溶液 (LISS)

アルブミン溶液

間接抗グロブリン試験の検査方法

反応増強剤を添加しない場合には60分


PEGの脱水作用による抗体濃縮効果（立体排他現象）によって、抗体濃度が高くなり抗原抗体反応が増強する

ポリエチレングリコール液による反応増強の原理

H－C－H

O

H－C－H

H－C－H

－

－

－

－

－

赤血球赤血球

H2O H2O

ポリエチレングリコ－ルHO(CH2CH2O)nH

「輸血・移植検査技術教本」より


ポリエチレングリコール液（PEG）溶液

• 他の反応増強剤よりも抗体検出感度が高い

• 自己抗体も高感度に検出することがある

• 高蛋白検体などでは偽陽性反応や偽陰性反応が得られることがある

IgG感作赤血球の使用は必須

反応増強剤無添加の間接抗グロブリン試験等の対応を考慮

• 補体による非特異的反応を避けるため抗グロブリン試薬は抗IgGを使用することが推奨されている


抗グロブリン試験における洗浄操作の意義

洗浄により未結合の

抗体を除去する


抗IgG試薬

IgG感作赤血球使用の意義

スクリーニング赤血球

IgG感作赤血球

12


抗IgG試薬

IgG感作赤血球使用の意義

残留する患者抗体

スクリーニング赤血球

IgG感作赤血球


IgG感作赤血球が管理できること

間接抗グロブリン試験における洗浄効果の確認

(手技的要因, 自動洗浄機の不良, 検体由来の要因)

抗グロブリン試薬の性能確認

試験系に抗グロブリン試薬が存在していることの確認


IgG感作赤血球が管理できないこと

検体(血清/血漿)の入れ忘れ

反応増強剤の入れ忘れ

反応時間・温度

→検査プロセスの確認が重要


原理

フイシンやブロメリンといった蛋白分解酵素により赤血球膜上で

マイナスに荷電しているシアル酸を分解させ、凝集反応を促進する

特徴

①：特定の抗原の破壊（MNS, Duffy, Xg)することから複数抗体

の同定に役立つ

②：Rh系, Kidd, Lewisなどの抗体の反応が増強される

③：非特異反応が多い

酵素法について


＋

＋

＋

＋＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋

＋－

－

－

－

－

－－

－

－

－

－

－

IgG型の抗体

酵素法

蛋白分解酵素の添加

凝集しないマイナスの

荷電が減る

相対的に

電気二重層が

減る－

－

－－

－

－

凝集する

IgG抗体も凝集するようになる 72 All Content © Immucor, Inc.

酵素一段法（例）

被検血清（血漿）＋赤血球浮遊液

遠心・判定

37℃でインキュベーション

← ブロメリン試薬

赤血球の酵素処理

抗原抗体反応

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酵素二段法（例）

赤血球浮遊液＋酵素試薬

遠心・判定



生理食塩液で洗浄

酵素処理赤血球浮遊液＋被検血清（血漿）

赤血球の酵素処理

抗原抗体反応


酵素法

• 酵素一段法

赤血球の酵素処理と抗原抗体反応を

同時に行う

手技が簡便

• 酵素二段法

赤血球の酵素処理と抗原抗体反応を

別々に行う

一段法よりも抗体検出感度が高い


患者抗体

赤血球膜

指示血球

指示血球

マイクロプレート

陽性

陰性

固相法の原理

指示血球

赤血球

抗ヒトIgG抗体


測定の手順

遠心

洗浄

強陽性弱陽性陰性

強陽性弱陽性陰性

インキュベーション赤血球は既にマイクロウェル表面

に結合している

LISS +

血清または血漿の添加

+

指示血球の添加

+


カラム凝集法の原理

陽性陰性

反応槽で抗原抗体反応を起こさせる。

遠心をすることで、抗体未結合の赤血球は底部に移動する

抗体が感作した赤血球は、抗ヒトグロブリンにより凝集し、

カラム槽を十分に通過できず、底部に移動できない

反応槽

カラム槽

抗ヒトグロブリン試薬

血漿(血清)+スクリーニング赤血球+LISS

エアギャップが作成されることで血漿(血清)

と抗ヒトグロブリン試薬は接触しない


各方法の比較

固相法カラム凝集法試験管法

スクリーニング

赤血球乾燥液体液体

インキュベーション必要必要必要

洗浄必要不必要必要

遠心必要必要必要

検出振とうは必要なし

反応は安定的

振とうは必要なし

反応は安定的

振とうは必要

反応は安定的ではない

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検出される抗体の頻度

竹下ら, Collaboratetive study of irregular erythrocyte antibodies in

Japan: Result from the Japanese study of allo-immunity and antigen diversity in Asian populations. Transfusion and Apheresis

Science, Vol.43, 2010

抗E, 抗Leaで52.2% (1～2位)

抗P1, 抗M, 抗E+抗cで20.9% (3～5位)

抗Fyb, 抗Dia, 抗Leb, 抗D, 抗Jkaで13% (6～10位)

上位10で86.1%


不規則抗体検査の基礎 -...

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