pembuatan larutan stok dan media vw

7/23/2019 pembuatan larutan stok dan media VW

1/22

LAPORAN PRAKTIKUM

KULTUR JARINGAN TANAMAN

"PEMBUATAN LARUTAN STOK DAN MEDIA VW

(Vacin and Went)"

NOPITA SARI

D1A012072

AGRONOMI H

FAKULTAS PERTANIAN

UNIVERSITAS JAMBI

2014


2/22

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kultur jaringan tanaman adalah suatu teknik isolasi bagian-bagian tanaman,

seperti jaringan, organ, ataupun embrio, lalu dikultur pada medium buatan yang steril

sehingga bagian-bagian tanaman tersebut mampu beregenerasi dan berdiferensisi

menjadi tanaman lengkap.

Keberhasilan budidaya jaringan tanaman sangat dipengaruhi oleh media

tanamnya. Selain sebagai tempat tumbuh, media tanam merupakan penyedia unsur hara

dan zat-zat lain yang diperlukan eksplan untuk tumbuh. Seperti halnya dengan tanaman

utuh, jaringan tanaman juga memerlukan unsur hara makro dan unsur hara mikro.

Karena yang ditanam adalah sepotong kecil jaringan atau sekelompok sel, media tanam

haruslah dapat menyediakan bahan-bahan lain yang dapat mendukung pertumbuhan dan

perkembangan jaringan tanaman sehingga tanaman dapat melakukan regenerasi.

Hasil yang lebih baik dapat dijangkau atau diperoleh, bila ke dalam media

tersebut ditambahkan vitamin-vitamin, asam amino solid dan zat pengatur tubuh.

Walaupun sudah diusahakan untuk menghindarkan penggunaan komponen-komponen

yang tidak jelas (komponennya) sepertijuice buah-buahan dan tauge, air kelapa, yeast

exstracts dan casein hydrolysate, tetapi kadang-kadang kita bisa memperoleh hasil yang

lebih tinggi dengan penambahan tersebut. Sebagai contoh, air kelapa masih sering

digunakan di laboratorium-laboratorium penelitian, sedangkan pisang masih merupakan

komponen tambahan yang sangat popular pada media anggrek.

Media kultur jaringan merupakan salah satu faktor yang dapat menentukan

tingkat keberhasilan perbanyakan tanaman secara invitro, dalam hal ini adalah kulturjaringan. Berbagai formulasi atau komposisi media tanam telah banyak ditemukan

untuk mmengoptimalkan pertumbuhan dan perkembangan tanaman yang dikulturkan.

Media biakan adalah bahan atau campuran bahan yang dapat digunakan untuk

membiakkan mikroorganisme karena memiliki daya dukung yang tinggi terhadap

pertumbuhan dan perkembangbiakannya. Dalam media semi sintetik selain bahan hasil

pertanian, digunakan pula zat-zat kimia yang komposisinya diketahui dengan tepat.


3/22

Berdasarkan hal tersebut di atas, maka perlu diadakan praktikum mengenai cara

pembuatan media kultur jaringan. Hal ini dimaksudkan agar segala hal yang diketahui

tentang kultur jaringan bukan hanya sekedar mengetahui tentang adanya kultur jaringan,

tetapi dapat membuat bibit tanaman melalui kultur jaringan. Agar semua yang diketahui

tentang kultur jaringan bukan sekedar teori, tetapi dapat diaplikasikan dalam praktikum

untuk dijadikan pengabdian kepada masyarakat.

1.2 Tujuan Praktikum

Tujuan dari praktikum pembuatan media kultur jaringan ini yaitu untuk

mengetahui sifat dan komposisi pembuatan media, untuk mengetahui teknik aseptic

pembuatan media, untuk mengetahui dan memahami rumus perhitungan larutan stok

dan mengetahui cara pembuatan larutan stok dan media tanam dari stok-stok bahan

kimia terutama untuk media VW (Vacin and Went).

Adapun kegunaannya yaitu sebagai bahan informasi bagi mahasiswa khususnya

mengenai pembuatan media kultur jaringan.


4/22

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Media Tanaman

Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur jaringan.

Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang akan

diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral, vitamin, dan

hormon. Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar, gula, dan lain-lain.

Zat pengatur tumbuh (hormon) yang ditambahkan juga bervariasi, baik jenisnya

maupun jumlahnya, tergantung dengan tujuan dari kultur jaringan yang dilakukan.

Media yang sudah jadi ditempatkan pada tabung reaksi atau botol-botol kaca. Media

yang digunakan juga harus disterilkan dengan cara memanaskannya dengan autoklaf

(Suryowinoto, 1991).

Sebelum membuat media, terlebih dahulu dilakukan pembuatan larutan stok.

Larutan stok dibuat dengan tujuan untuk memudahkan pengambilan bahan-bahan kimia

khususnya yang dibutuhkan dalam jumlah kecil, tak perlu sering menimbang karena hal

ini kurang praktis. Larutan stok disimpan di dalam lemari pendingin agar tidak mudah

rusak dan mencegah terdegradasinya bahan-bahan kimia oleh mikroba penyebab

kontaminasi. Pembuatan larutan stok harus dilakukan dengan cermat, sebab larutan stok

yang terlalu pekat akan mengalami pengendapan di lemari es, dan larutan stok yang

terkontaminasi tidak boleh digunakan lagi (Anonim2, 2012).

Untuk memenuhi faktor pertumbuhan tanaman, media kultur jaringan yang baik

mengandung (Anonim, 2011) :

1. Hara anorganik

Ada 12 hara mineral yang penting untuk pertumbuhan tanaman dan beberapa

hara yang dilaporkan mempengaruhi pertumbuhan in vitro. Untuk pertumbuhan

normal dalam kultur jaringan, unsur unsur penting ini harus dimasukkan dalam

media kultur.

2. Hara organik

Tanaman yang tumbuh dalam kondisi normal bersifat autotrof dan dapat

mensintesa semua kebutuhan bahan organiknya. Meskipun tanaman in vitro dapat


5/22

mensintesa senyawa ini, diperkirakan mereka tidak menghasilkan vitamin dalam

jumlah yang cukup untuk pertumbuhan yang sehat dan satu atau lebih vitamin mesti

ditambahkan ke media. Thiamin merupakan vitamin yang penting, selain itu asam

nikotin, piridoksin dan inositol biasanya ditambahkan. Selain bahan organik tersebut,

bahan kompleks seringkali ditambahkan, termasuk ekstrak ragi, casein hydrolysate,

air kelapa, jus jeruk, jaringan pisang, dan lain lain. Penambahan bahan kompleks

ini menghasilkan media yang tak terdefinisi. Dengan penelitian yang cukup,

semestinya bahan kompleks ini dapat diganti dengan zat tertentu, mungkin tambahan

suatu vitamin atau asam amino.

3. Sumber karbon

Tanaman dalam kultur jaringan tumbuh secara heterotrof dan karena mereka

tidak cukup mensintesa kebutuhan karbonnya, maka sukrosa harus ditambahkan ke

dalam media. Sumber karbon ini menyediakan energi bagi pertumbuhan tanaman dan

juga sebagai bahan pembangun untuk memproduksi molekul yang lebih besar yang

diperlukan untuk tumbuh. Biasanya sukrosa pada konsentrasi 1 5% digunakan

sebagai sumber karbon tapi sumber karbon lain seperti glukosa, maltosa, galaktosa

dan laktosa juga digunakan. Ketika sukrosa diautoklaf, terjadi hidrolisis untuk

menghasilkan glukosa dan fruktosa yang dapat digunakan lebih efisien oleh tanaman

dalam kultur.

4. Agar

Umumnya jaringan dikulturkan pada media padat yang dibuat seperti gel dengan

menggunakan agar atau pengganti agar sperti Gelrite atau Phytagel.Konsentrasi agar

yang digunakan berkisar antara 0.7 1.0%. Pada konsentrasi tinggi agar menjadi

sangat keras, sedikit sekali air yang tersedia, sehingga difusi hara ke tanaman sangat

buruk. Agar dengan kualitas tinggi seperti Difco BiTek mahal harganya tapi lebihmurni, tidak mengandung bahan lain yang mungkin mengganggu pertumbuhan.

5. pH

Media biasanya diatur pada kisaran 5.6 5.8 tapi tanaman yang berbeda

mungkin memerlukan pH yang berbeda untuk pertumbuhan optimum. Jika pH lebih

tinggi dari 6.0, media mungkin menjadi terlalu keras dan jika pH kurang dari 5.2,

agar tidak dapat memadat.

6. Zat Pengatur Tumbuh


6/22

Pada media umumnya ditambahkan zat pengatur tumbuh.

7. Air

Distilata biasanya digunakan dalam kultur jaringan, dan banyak lab

menggunakan aquabides (air destilata ganda). Beberapa lab, dengan alasan ekonomi,

menggunakan air hujan, tapi ini menyebabkan sulit mengontrol kandungan bahan

organik dan non-organik pada media.

8. Pemilihan Media

Jika tidak ada informasi awal, biasanya mulai dengan media MS (Murashige dan

Skoog 1962). Media ini mengandung konsentrasi garam dan nitrat yang lebih tinggi

dibandingkan media lain, dan telah sukses digunakan pada berbagai tanaman dikotil.

Untuk inisiasi kalus, 2.4-D ditambahkan ke media dengan konsentrasi 1 5 mgL-1.

Untuk multiplikasi tunas, sitokinin seperti BAP ditambahkan dan juga diberi auksin,

seperti NAA pada konsentrasi yang rendah.Untuk inisiasi akar, IBA pada konsentrasi

12 mgL-1 ditambahkan.

Komponen media kultur yang lengkap adalah sebagai berikut :

1. Air destilasi (aquades) atau air bebas ion sebagai pelarut atau solvent

2. Hara-hara makro dan ikro

3. Gula (umumnya sukrosa) sebagai sumber energi

4. Vitamin, asam amino dan bahan organic lain

5. Zat pengatur tumbuh

6. Suplemen berupa bahan-bahan alami

7. Agar-agar atau gelrite sebagai pemadat media

2.2 MediaVacin and Went (VW) (1949)

Media ini dikembangkan khusus untuk kultur anggrek. Tanaman yang ditanamdi kebun dapat tumbuh dengan baik dengan pemupukan yang hanya mengandung N dari

Nitrat. Knudson pada tahun 1922, menemukan penambahan 7.6 mM NH4+ disamping

8.5 mM NO3-, sangat baik untuk perkencambahan dan pertumbuhan biji anggrek.

Penambahan NH4+ ternyata dibutuhkan untuk perkembangan protocorm. Media Nitsch

& Nitsch, menggunakan NO3- dan K+ dengan kadar yang cukup tinggi untuk

mengkulturkan jaringan tanaman artichoke Jerussalem. Penambahan ammonium

khlorida sebanyak 0.1 mM, menghasilkan pertumbuhan jaringan yang menurun.


7/22

Pertumbuhan sel dari jaringan suatu organ dibandingkan dengan jaringan tumor

tanaman Venca rosea (Catharanthus roseus), menunjukkan bahwa penambahan

ammonium ke dalam media White yang sudah dimodifikasi, mempunyai pertumbuhan

yang lebih baik. Konsentrasi NO3-, NH4-, K+ dan H2PO4- yang diperoleh, hampir

sama dengan yang dikembangkan oleh Miller.

Seperti halnya peralatan kultur, media yang digunakan juga perlu dilakukan

sterilisasi untuk menciptakan kondisi lingkungan yang aseptic bagi eksplan. Untuk

media kultur yang tidak mengandung bahan-bahan yang Heat-labile, sterilisasi

dilakukan dengan autoklaf pada temperature 121Oc, tekanan antara 15 psi atau 1 atm

dengan waktu antara 20-25 menit tergantung dari volume wadah dan volume media.

Untuk 15-50 ml media dalam tabung reaksi atau botol kecil berukuran 50-100 ml,

sterilisasi dilakukan pada tekanan 15 psi dengan waktu 20 menit.


8/22

BAB III

METODOLOGI PRAKTIKUM

3.1 Waktu dan Tempat

Praktikum Pembuatan Media VW ini dilaksanakan pada hari Jum'at tanggal 21

November 2014 pukul 10.00 WIB dan bertempat di Laboratorium Bioteknologi

Fakultas Pertanian Universitas Jambi.

3.2 Alat dan Bahan

Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah gelas ukur, gelas

piala (ukuran 2 L), timbangan digital, hot plate dan termometernya, gelas ukur, stirer,

pH meter, corong, botol kultur, karet dan plastik, dan pipet tetes.

Bahan-bahan yang diperlukan dan digunakan dalam praktikum pembuatan

media antara lain agar-agar, sukrosa, air kelapa dan bahan media VW yang isinya

berupa :

1. (NH4)2NO3

2. KNO3

3. KH2PO4

4. MgSO4. 7H2O

5. MnSO4. 4H2O

6. (Ca2)3PO4

7. Fe3-Tartrat

3.3 Prosedur Kerja

1. Pembuatan larutan stok

a. Larutan stok A

1. Menimbang pesenyawaan NH4NO3sebanyak 37,5 gr

2. Memasukan bahan yang telah ditimbang tersebut ke dalam gelas piala bersih yang

telah berisi aquades atau air bebas ion kurang lebih 250 ml. Selanjutnya

melakukan pengadukan hingga larut merata dengan menggunakan hotplate, jika

berhasil larutan berwarna bening


9/22

3. Memindahkan larutan tersebut ke dalam botol dan ditutup dengan plastik dan

diikat dengan karet serta diberi label "A". Selanjutnya menyimpan larutan stok ke

dalam ruangan pendingin.

b. Larutan stok B KNO3(39,375 gr)

c. Larutan stok C KH2PO4 (75 gr)

d. Larutan stok D merupakan campuran MgSO4 . 7H2O (75 gr) dan MnSO4 . 4H2O

(2,34 gr)

e. Larutan stok E (Ca2)3PO4 (75 gr)

f. Larutan Stok F Fe3-Tartrat

** Untuk langkah kerja larutan stok B, C, D, E dan F hampir sama dengan larutan stok

A hanya berbeda dijumlah senyawa dan pemberian nama label.

2. Pembuatan Medium Kultur VW

a. Menimbang sukrosa (gulaku) sebanyak 30 gr dan agar-agar sebanyak 10,5 gr

b. Menyiapkan gelas piala berukuran 2000 ml (2 liter) lalu dimasukkan sukrosa (30 gr)

dan agar-agar (10,5 gr) serta larutan A (30 ml), larutan B (30 ml), larutan C (7,5

ml), larutan D (7,5 ml), larutan E (7,5 ml) dan Larutan F (7,5 ml)

c. Menambahkan aquades ke dalam gelas piala hingga mencapai volume 1500 ml

(dilebihkan sedikit untuk mengantisipasi larutan yang menguap)

d. Menghomogenkan larutan hingga merata dengan menggunakan Hot Plate dan

Magnetik stirrer dan ditunggu hingga mendidih kemudian diukur pH nya. pH larutan

diukur menggunakan pH meter elektrik hingga mencapai pH yang dibutuhkan yaitu

5,7 5,8. Jika terlalu asam tambahkan NaOH atau KOH 1 M, dan jika terlalu basa

tambahkan HCl 1 M.

e. Selanjutnya larutan tersebut dibagi menjadi 4 bagian dan dimasukkan ke dalam gelas

kimia masing-masing 375 ml (1500 ml : 4 = 375 ml) lalu ditambahkan dengan air

kelapa sesuai dengan perlakuan dan tanpa air kelapa sebagai kontrol.

1. Kontrol ( tanpa ditambahkan air kelapa)

2. 10 % air kelapa (10 % x 375 = 37,5 ml)

3. 20 % air kelapa (20 % x 375 = 75 ml)

4. 30 % air kelapa (30 % x 375 = 112,5 ml)


10/22

e. Medium tersebut dituangkan ke dalam botol-botol kultur sesuai dengan perlakuan.

f. Botol kultur ditutup menggunakan plastik dan karet yang telah disterilkan dan diberi

label kemudian disimpan di ruang kultur.

Sterilisasi Media

a. Botol kultur yang sudah berisi medium dimasukkan ke dalam autoclavedengan tekanan

15 - 17,5 psi pada suhu 120 oC selama 20 menit, sampai tiga kali.

b. Botol diangkat dan disimpan dalam ruang inkubasi sampai siap digunakan.

c. Medium siap digunakan.


11/22

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Praktikum

a. Pembuatan Larutan Stok

Komposisi Medium Vacin dan Went (VW) (1949) pada pH 5,6 - 5,8

Stok Senyawa per liter stokPemakaian

Stok per liter medium

A (NH4)2NO3 37,5 gr 30 ml 1125,00 mg

B KNO3 39,375 gr 30 ml 1181,25 mgC KH2PO4 75 gr 7,5 ml 562,50 mg

D MgSO4. 7H2O 75 gr 7,5 ml 562,50 mg

MnSO4. 4H2O 2,34 gr 17,55 mg

E (Ca2)3PO4 75 gr 7,5 ml 562,50 mg

F Fe3-Tartrat 4,2 gr 7,5 ml 31,50 mg

Sukrosa 30,00 mg

Agar - agar 10,50 mg

Pembuatan larutan stok

No. Gambar Keterangan

1.

Senyawa yang digunakan dalam pembuataan

media VW

2.


12/22

Proses penimbangan senyawa

3.

Proses pembuatan larutan stok

4.

Larutan stok yang telah selesai dan harus

disimpan di tempat yang dingin (kulkas)


13/22

b. Pembuatan Media VW

No. Gambar Keterangan

1.

Penimbangan sukrosa (gula) sebanyak 30 gram

2.

Penimbangan agar-agar sebanyak 10,5 gram

3.

Memasukkan agar-agar (10,5 gr), sukrosa (30

gr), larutan stok A, B, C, D, E dan F ke dalam

gelas piala ukuran 2 liter lalu ditambahkan

aquades hingga mencapai 1500 ml

4.

Media yang telah mendidih (berwarna bening)


14/22

5.

Penambahan air kelapa kemedia VW

6.

Media VW dipindahkan ke botol-botol kultur

7.

Botol kultur ditutup rapat dengan plastik dan

karet lalu disimpan atau disusun di ruang

kultur

4.2 Pembahasan

a. Pembuatan Larutan Stok

Media merupakan suatu bahan yang penting untuk pertumbuhan kultur. Media

untuk pertumbuhan kultur dapat berupa media padat dan media cair. Media padat

biasanya digunakan untuk mengkulturkan kalus kemudian diinduksi menjadi tanaman

lengkap, sedangkan media cair biasanya digunakan untuk kultur sel. Komponen yang

penting dalam suatu media adalah senyawa anorganik, sumber karbon, vitamin, zat

pengatur tumbuh, dan suplemen organik (Yuwono 2008).

Larutan Stok Media merupakan tempat tumbuhnya tanaman. Semua kebutuhan

yang diperlukan oleh tanaman untuk tumbuh dan berkembang harus terkandung dalam


15/22

media tersebut. Dalam media kultur jaringan (kuljar) telah tersedia unsur makro, unsur

mikro, vitamin, hormon (zat perangsang tumbuh) dan lain-lain. Formula ini memang

memudahkan pekerjaan, tapi untuk suatu penelitian yang memerlukan perubahan

komposisi dalam satu atau beberapa komponen, maka pemisahan komponen-komponen

penyusun media perlu dilakukan. Secara umum kebutuhan nutrisi setiap tanaman sama,

tetapi secara khusus kebutuhannya berbeda. Kesamaannya adalah tanaman memerlukan

hara makro dan mikro, vitamin-vitamin, karbohidrat, asam amino dan N-organik, ZPT,

zat pemadat dan kadang ada penambahan seperti air kelapa, ekstrak ragi, jus tomat,

ekstak kentang, bufer organik maupun arang aktif. Kebutuhan tiap tanaman berbeda

pada hal komposisi dan jumlah yang diperlukan.

Pada praktikum kali ini yaitu pembuatan larutan stok. Diawali dengan

penimbangan media komponen penyusun larutan stok dengan menggunakan timbangan

analitik. Setelah dilakukan penimbangan sesuai dengan kebutuhan yaitu berdasarkan

kepekatan atau konsentrasi yang dinginkan, maka dilakukan proses pelarutan dengan

menggunakan aquades murni yang tidak mengandung ion. Untuk larutan stok yang

terdiri lebih dari satu persenyawaan maka proses pelarutan dilakukan pada tempat yang

berbeda hal ini dilakukan untuk mencegah terjadinya reaksi kimia antara masing-msing

persenyawaan misalnya reaksi penggaraman yang dapat meyebabkan degradasi atau

penurunan dari larutan stok itu sendiri.

Untuk membuat larutan stok A diperlukan (NH4)2NO3 37,5 gr kemudian

memasukkannya ke dalam gelas kimia dan menambahkan akuades sekitar 250 ml,

kemudian sambil diaduk mengunakan magnetic stirrer melarutkannya menggunakan

hot plate. Setelah larutan stok terlarut sempurna, larutan persenyawaan tersebut

dituangkan pada botol yang telah disiapkan dan ditutup rapat kemudian diberi lebel A.

Larutan harus terlarut sempurna agar pada waktu diletakkan dilemari es tidak terjadiendapan. Biasanya larutan yang sudah mengalami pengendapan, tidak dapat digunakan

lagi. Pengendapan larutan stok umumnya terjadi bila kepekatan dapat dihindari dengan

membuat larutan yang tidak terlalu pekat atau tidak menggunakan larutan campuran,

yaitu dengan membuat satu larutan stok hanya untuk satu jenis bahan (terutama untuk

unsur hara makro). Kondisi simpan juga diperhatikan, karena ada beberapa bahan yang

tidak tahan dalam suhu tinggi atau cahaya. Larutan stok kadang-kadang juga ditumbuhi


16/22

oleh mikroorganisme, larutan stok yang terkontaminasi ini tidak dapat digunakan

lagi.Untuk larutan stok yang lain pembuatannya sama dengan larutan A.

Setelah selesai membuat larutan stok, larutan stok yang telah jadi disimpan

pada lemari pendingin secara berurutan (A-F). Botol tersebut (tempat larutan stok)

sebelumnya telah disterilkan. Untuk penggunaannya dalam pembuatan media yaitu

dengan cara mengencerkan larutan stok yang telah dipipet sesuai dengan kebutuhan

dengan menggunakan aquades. Dengan adanya larutan stok dapat memberi keuntungan

antara lain yaitu menghemat waktu pekerjaan, menimbang bahan media setiap kali ingin

membuat media, mengatasi kesulitan menimbang dalam konsentrasi kecil dan

mengurangi kerusakan bahan kimia akibat terlalu sering dibuka dan ditutup. Larutan

stok dalam bentuk cair disimpan di dalam lemari es. Pembuatan larutan stok harus

dilakukan dengan cermat, sebab larutan stok yang terlalu pekat akan mengalami

penendapan di dalam lemari es. Jika terjadi pengendapan, maka sebelum larutan stok

digunakan terlebih dahulu harus dipanaskan.

b. Pembuatan Media VW (Vacin dan Went)

Media kultur jaringan anggrek paling terkenal dan telah menjadi media dasar

cloning anggrek adalah media Vacin and Went (media VW). Media yang

diformulasikan dan diperkenalkan oleh E. Vacin dan F. Went sejak tahun 1949 ini

terdiri dari unsur hara makro dan mikro dalam bentuk garam-garam anorganik dengan

jumlah yang sesuai untuk pertumbuhan tanaman khususnya anggrek. Komposisi dan

cara membuat media ini seolah telah dan harus menjadi keahlian dasar para praktisi

kultur jaringan anggrek. Sehingga demikian, banyak penelitian yang mempelajari

pengaruh pemberian unsur tambahan ke dalam media VW terhadap pertumbuhan

bahan tanaman (plantlet). Sehingga saat ini, salah satu media kultur jaringan anggrekyang umum digunakan adalah media Vacin and Went ditambah 1) bahan organik

kompleks (seperti air kelapa dan pisang) dan 2) sumber energi, yaitu karbohidrat

sederhana (seperti sukrosa, glukosa dan fruktosa). Selain itu, untuk media padat

ditambahkan agar-agar dan charcoal (arang aktif).

Pada praktikum ini media VW dibuat dalam perlakuan yang berbeda-beda

terdiri dari 10 % air kelapa, 20% air kelapa, 30% air kelapa dan kontrol (tanpa

penambahan air kelapa). Air kelapa ini berfungsi sebagai hormon.


17/22

Air kelapa saat ini telah menjadi bahan tambahan tetap media VW di dunia

kultur jaringan anggrek Indonesia. Menurut Widiastoety et al., (1997), dalam

penggunaannya, jenis kelapa tidak memberikan efek yang berbeda terutama antara

kelapa varietas genjah kuning dan varietas genjah hijau. Apa yang perlu diperhatikan

adalah tingkat ketuaan buah kelapa.

Widiastoety et al. (1997) menyatakan bahwa penambahan air kelapa umur muda

dan umur sedang sebanyak 150 ml/L media dapat mendorong pertumbuhan tinggi,

panjang dan lebar daun serta panjang dan jumlah akar plantlet anggrek Dendrobium,

sedangkan pemberian kelapa tua tidak memberikan efek yang berbeda dengan media

tanpa air kelapa. Air kelapa baik digunakan pada media kultur jaringan karena

mengandung zat atau bahan-bahan seperti vitamin, mineral, asam-asam amino, dan

asam nukleat fosfor serta zat tumbuh auksin dan asam giberelat yang berfungsi sebagai

penstimulir proliferasi jaringan, memperlancar metabolisme dan respirasi (Tuleckle et

al., 1961 didalam Widiastoety et al., 1997).

Selain itu, air kelapa juga mengandung zeatin dan ribozeatin (kelompok zat

tumbuh sitokinin) yang mempunyai kemampuan dalam merangsang pembelahan dan

diferensiasi sel, terutama dalam hal pembentukan pucuk tanaman dan pertumbuhan akar

(Hess, 1975 didalam Widiastoety et al., 1997). Selain itu, air kelapa juga mengandung

karbohidrat yang merupakan bahan dasar untuk menghasilkan energi dalam proses

respirasi dan bahan pembentukan sel-sel baru.

Penggunaan air kelapa tua kurang berdampak positif karena kandungan zat hara

dalam air kelapa tersebut telah tidak mencukupi lagi bagi kebutuhan tanaman. Dalam

hal ini, unsur-unsur hara tersebut telah digunakan untuk pembentukan daging buah air

kelapa (Widiastoety et al., 1997). Sama dengan manusia, sumber energi utama tanaman

adalah karbohidrat. Karena pentingnya peran karbohidrat untuk pertumbuhan tanamantersebut, maka ke dalam media kultur jaringan anggrek ditambakan pula sumber

karbohidrat sederhana, seperti sukrosa, glukosa dan fruktosa.

Meskipun didalam persenyawaan komplek organik (air kelapa, pisang, ubi kayu)

yang biasa ditambahkan ke dalam media kultur jaringan sumber energi tersebut telah

tersedia, namun karena karbohidrat tersebut telah banyak digunakan untuk proses

respirasi dan pembentuk sel-sel baru tanaman maka penambahan sumber energi lainnya

sangat diperlukan guna mencukupi kebutuhan tanaman. Karbohidrat yang digunakan


18/22

umumnya sukrosa atau glukosa pada konsentrasi 2-3% (Murashige, 1974 didalam

Widiastoety et al., 1997).

Agar dapat mencukupi kebutuhan karbon, maka sukrosa harus ditambahkan

ke dalam media. Tanaman dalam kultur jaringan tumbuh secara heterotrof dan karena

mereka tidak cukup mensintesa kebutuhan karbonnya. Sumber karbon ini menyediakan

energy bagi pertumbuhan tanaman dan juga sebagai bahan pembangun untuk

memproduksi molekul yang lebih besar yang diperlukan untuk tumbuh.

Bahan pemadat media yang digunakan adalah agar-agar. Agar-agar adalah

campuran polisakarida yang diperoleh dari beberapa spesies algae. Dalam analisa unsur,

diperoleh data bahwa agar-agar mengandung sedikit unsur Ca, Mg, K, dan Na

(Debergh, 1982 dalam Gunawan, 1992).

Smith (1992) menyatakan pemilihan media kultur jaringan merupakan kunci

sukses dalam kultur jaringan. Hal ini menyebabkan banyak diadakan penelitian untuk

memodifikasi media-media yang memberikan respon berbeda terhadap berbagai macam

tanaman. Sumber karbon merupakan salah satu faktor yang sangat penting untuk

menentukan keberhasilan kultur jaringan selain kombinasi zat tumbuh (ZPT). Sumber

karbon berfungsi sebagai sumber energi yang dibutuhkan oleh sel untuk dapat

melakukan pertumbuhan (Kimball, 1994). Glukosa dan fruktosa sebagai hasil hidrolisis

sukrosa dapat merangsang pertumbuhan beberapa jaringan. Konsentrasi sukrosa

berpengaruh terhadap pertumbuhan kalus (Srilestari, 2005).

Pada praktikum yang kami lakukan penambahan NaOH pada larutan sebab pH

larutan berada di bawah kisaran pH yang dianjurkan yaitu sebesar 5,6 karena bahan

pembuat medianya kebanyakan golongan asam. Kemudian dilakukan pengukuran pH

dan ditetapkan sampai 5.8. Pengaturan pH dilkukan untuk menjamin ketersediaan

unsure hara bagi eksplan di dalam botol kultur. Karena pada praktikum ini, media yangdigunakan adalah media padat maka diperlukan bahan pemadat berupa agar. Agar yang

diberikan yaitu sebesar 10,5 gram dimasukkan kedalam larutan penyusun media dan

dipanaskan. Pengukuran pH tidak lagi dilakukan karena apabila larutan media yang

telah ditambahkan agar diukur pH-nya maka akan merusak pH-meter. Konsentrasi agar

yang terlalu tinggi dapat mengurangi difusi persenyawaan dari dan ke arah eksplan

sehingga pengambilan hara dan zat tumbuh berkurang, sedangkan zat penghambat dari

eksplan tetap berkumpul di sekitar eksplan. Setelah mencapai titik didih yang ditandai


19/22

dengan larutan berwarna bening dan terdapat gelembung maka larutan dituangkan ke

dalam botol-botol kultur. Kemudian botol ditutup dengan plastik dan diikat dengan

karet yang sebelumnya telah disterilkan dan dilakukan sterilisasi basah dengan

menggunakan autoclave selam 20 menit pada suhu 1200C dan pada tekanan 15 psi.

Setelah itu botol-botol kultur diletakan di dalam ruang kulur pada rak-rak yang telah

tersedia.


20/22

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Dari hasil dan pembahasan dapat disimpulkan bahwa :

Dengan adanya larutan stok dapat memberi keuntungan antara lain yaitu menghemat

waktu pekerjaan, menimbang bahan media setiap kali ingin membuat media,

mengatasi kesulitan menimbang dalam konsentrasi kecil.

Dari hasil praktikum dapat disimpulkan bahwa dalam proses pembuatan larutan stok

yang terdiri dari stok A-F melalui beberapa tahapan antara lain: penimbangan

persenyawaan, pelarutan senyawa kimia dengan menggunakan aquades, penetapan

volume akhir, pelabelan dan panyimpanan pada lemari es.

Sterilisasi merupakan suatu proses atau kegiatan membebaskan suatu bahan atau

benda dari semua mikroorganisme. Sterilisasi yang digunakan pada praktikum ini

dengan menggunakan senyawa kimia dan pemanasan uap air bertekanan (Autoklaf)

Media Vacin and Went (VW) adalah salah satu media dasar yang paling banyak

digunakan untuk pembibitan anggrek.

5.2 Saran

Sebaiknya dalam praktikum pembuatan media menggunakan massa atau

konsentrasi senyawa yang sesuai agar tidak terjadi pengendapan pada botol stok dan

mahasiswa diberi waktu yang cukup untuk lebih mengenal dan memahami media-media

yang digunakan dalam kultur jaringan agar mahasiswa lebih memahaminya.


21/22

DAFTAR PUSTAKA

Gunawan, L.W. 1992. Teknik Kultur Jaringan Tumbuhan Pusat Antar Universitas

(PAU) Bioteknologi IPB Bogor. 165 hal.

Hendaryono dan Ir Ari Wijayani, 2007. Teknik Kultur Jaringan. Kanisius, Yogyakarta

Kimball, J.W. 1994. Biologi. Erlangga. Bogor

Lawalata, Imelda Jeanette.2011. Pemberian Beberapa Kombinasi ZPT Terhadap

Regenerasi Tanaman Gloxinia (Siningia speciosa) dari Eksplan Batang dan

Daun Secara In Vitr. J.Exp. Life Sci. Vol. 1 No. 2, Feb 2011.Ambon

Marlin, dkk. 2012.Penuntun Praktikum Kultur Jaringan. Fakultas Pertanian UniversitasBengkulu, Bengkulu.

Nugroho, A dan H. Sugianto. 1997. Pedoman Pelaksanaan Tehnik Kultur Jaringan.

Penebar Swadaya, Jakarta.

Sitorus, Ertina Novaria, DKK. 2011. Induksi Kalus Binahong (Basella rubra L.)

Secara In Vitro Pada Media Murashige & Skoog Dengan Konsentrasi

Sukrosa Yang Berbeda. BIOMA, Juni 2011 ISSN: 1410-8801 Vol. 13, No.

1.Semarang

Smith, R.S. 1992. Plant Tissue Culture Techniques and Experiments. Academic Press.USA.

Srilestari, R. 2005. Induksi Embrio Somatik Kacang tanah Pada Berbagai Macam

Vitamin dan Sukrosa.Ilmu pertanian Vol. 12. No. 1. Hal 43-51.

Yusnita, 2003. Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman Srcara Efisien. P.T

Agromedia Pustaka, Tangerang.

Zulkarnain. 2009.Kultur Jaringan Tanaman : Solusi Perbanyakan Tanaman Budidaya.

Bumi Aksara, Jakarta


22/22

pembuatan larutan stok dan media vw

Documents