146064187 farmakologi eksperimental analisis obat dalam cairan hayati

7/24/2019 146064187 Farmakologi Eksperimental Analisis Obat Dalam Cairan Hayati

1/34

LAPORAN RESMI

PERCOBAAN FARMAKOLOGI EKSPERIMENTAL

PERCOBAAN II

ANALISIS OBAT DALAM CAIRAN HAYATI

Disusun oleh:

Kelas : C Golongan : IV Kelompok : 3

Febri Wulandari FA/09!" ######$$

Anggi%a &'as(uri FA/0930) ######$$

*aisbi%% Iman +ani, FA/0930! ######$$

Candra Kirana -$ FA/093.. ######$$

us' Andriani FA/093." ######$$

Asis%en aga : 1olanda dan Chris%ine

Asis%en Koreksi : 1olanda

LABORATORIUM FARMAKOLOGI DAN TOKSIKOLOGI

BAGIAN FARMAKOLOGI DAN FARMASI KLINIK

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS GADJAH MADA

YOGYAKARTA2013

PERCOBAAN II

ANALISIS OBAT DALAM CAIRAN HAYATI

I. TUJUAN

Agar mahasis(a dapa% memahami langkah2langkah analisis oba% di dalam airan ha'a%i$


2/34

II.DASAR TEORI

4n%uk memberikan e,ek biologis5 oba% dalam ben%uk ak%i,n'a harus berin%eraksi dengan

resep%or a%au %empa% aksi a%au sel %arge% dengan kadar 'ang ukup %inggi$ 6ebelum menapai

resep%or5 oba% %erlebih dahulu harus melalui proses ,armakokine%ik$ Fasa ,armakokine%ik

melipu%i proses ,asa II dan ,asa III$ Fasa II adalah proses absorpsi molekul oba% 'ang

menghasilkan ke%ersediaan biologis oba%5 'ai%u sen'a(a ak%i, dalam airan darah 'ang akan

didis%ribusikan ke 7aringan a%au organ %ubuh$ Fasa III adalah ,asa 'ang meliba%kan proses

dis%ribusi5 me%abolisme dan ekskresi oba%5 'ang menen%ukan kadar sen'a(a ak%i, pada

kompar%emen %empa% resep%or berada$

Fak%or2,ak%or penen%u dalam proses ,armakokine%ik an%ara lain:

.$ 6is%em kompar%emen dalam airan %ubuh5 seper%i airan in%rasel5 eks%rasel 8plasma

darah5 airan in%ers%i%ial5 airan cerebrospinal dan berbagai ,asa lipo,il dalam%ubuh$

$ ro%ein plasma5 pro%ein 7aringan5 dan berbagai sen'a(a biologis 'ang mungkin

dapa% mengika% oba%$

3$ Dis%ribusi oba% dalam berbagai sis%em kompar%emen biologis5 %eru%ama hubungan

(ak%u dan kadar oba% dalam berbagai sis%em %ersebu%5 'ang sanga% menen%ukan

kine%ika oba%$

"$ Dosis sediaan oba%5 %ranspor% an%ar kompar%emen seper%i proses absorpsi5

bioak%i;asi5 biodegradasi5 dan ekskresi 'ang menen%ukan lama oba% dalam %ubuh

86is(andono5 .99!$

Konsen%rasi oba% adalah elemen pen%ing un%uk menen%ukan ,armakokine%ika sua%u

indi;idu maupun populasi$ Konsen%rasi oba% diukur dalam sampel biologis seper%i air susu5

sali;a5 plasma dan urin$ 6ensi%i;i%as5 akurasi5 dan presisi dari me%ode analisis harus ada un%uk

pengukuran seara langsung oba% dalam ma%riks biologis$ 4n%uk i%u5 me%ode pene%apan kadar

seara umum perlu di;alidasi sehingga in,ormasi 'ang akura% didapa%kan un%uk moni%oring

,armakokine%ik dan klinik$

engukuran konsen%rasi oba% di darah5 serum5 a%au plasma adalah pendeka%an searalangsung 'ang paling baik un%uk menilai ,armakokine%ik oba% di %ubuh$ Darah mengandung

elemen seluler menakup sel darah merah5 sel darah pu%ih5 keping darah5 dan pro%ein seper%i

albumin dan globulin$ ada umumn'a serum a%au plasma digunakan un%uk pengukuran oba%$

4n%uk mendapa%kan serum5 darah dibekukan dan serum diambil dari superna%an se%elah

disen%ri,ugasi$ lasma diperoleh dari superna%an darah 'ang disen%ri,ugasi dengan

di%ambahkan an%ikoagulan seper%i heparin$


3/34

perubahan konsen%rasi oba% akan mere,leksikan perubahan konsen%rasi perubahan konsen%rasi

oba% di 7aringan 86hargel5 .9!!$

Adapun kandungan pro%ein dalam sampel biologis 'ang akan dianalisa men'ebabkan

dibu%uhkann'a sua%u %ahap perlakuan a(al dan/a%au pen'iapan sampel sebelum penen%uan

kadar oba% dapa% dilakukan$ +al ini un%uk mengisolasi a%au memisahkan oba% 'ang akan

di%eli%i dari ma%riks sampel 'ang diperoleh$ ro%ein5 lemak5 garam dan sen'a(a endogen

dalam sampel akan mengganggu penen%uan kadar oba% 'ang bersangku%an dan selain i%u

dalam hal analisa menggunakan me%ode seper%i +C5 adan'a =a%2=a% %ersebu% dapa% merusak

kolom +C sehingga usia kolom men7adi lebih singka%$

>erbagai prosedur un%uk mendena%urasi pro%ein dapa% digunakan sebagai perlakuan

a(al sampel biologis 'ang diperoleh dari sua%u peneli%ian ,armakokine%ik5 melipu%i

penggunaan sen'a(a 'ang disebu% sebagai =a% pengendap pro%ein (protein precipitatingagent)seper%i asam %ungs%a%5 amonium sul,a%5 asam %rikoroase%a% 8tricloro acetic acid5 &CA

asam perklora%5 me%hanol dan ase%oni%ril$ engendapan pro%ein dilakukan dengan dena%urasi

pro%ein$ Dena%urasi dapa% dilakukan akiba% adan'a perubahan p+5 %empera%ur5 dan

penambahan sen'a(a kimia$ Cara dena%urasi pro%ein 'ang umum digunakan adalah dengan

penambahan precipitating agent.ro%ein dapa% diendapkan karena memiliki berbagai si,a%

dian%aran'a bersi,a% sebagai am,o%er5 'akni memiliki mua%an 'ang berlainan dalam .

molekul5 a%au 'ang dikenal 7uga sebagai =(i%%er ion$ 6i,a% ini membua% po%ein memiliki

mua%an 'ang berbeda pada p+ 'ang berbeda pula$ Akiba%n'a pro%ein dapa% laru% pada ren%ang

p+ %er%en%u dimana pro%ein bermua%an$ 6ua%u saa% di p+ %er%en%u5 pro%ein akan menapai %i%ik

isoelek%rik5 'akni p+ dimana 7umlah %o%al mua%an pro%ein sama dengan nol 8mua%an posi%i,

sebanding dengan mua%an nega%i,$ +al ini akan mempengaruhi kelaru%an pro%ein$ ada %i%ik

isoelek%rik5 kelaru%an pro%ein sanga% rendah5 sehingga po%ein dapa% mengendap 8oed7iadi5

.99"$

ene%apan kadar oba% dalam badan dapa% dianalisi dari airan ha'a%i lain seper%i urin5

sali;a5 a%au lainn'a$ 4rin merupakan airan ha'a%i 'ang biasan'a dipergunakan dalam

,armakokine%ik un%uk mempela7ari disposisi oba% dan menen%ukann kadar oba% un%uk oba%2

oba%an 'ang disekresikan urin$ -inimal .0?2n'a %erdapa% dalam urin dalam ben%uk u%uh

'ang belum dime%abolisme$

+asil analisis dalam ,armakokine%ika din'a%akan dalam parame%er ,armakokine%ika$

arame%er ,armakokine%ika dide,inisikan sebagai besaran 'ang di%urunkan seara ma%ema%is

dari hasil pengukuran kadar oba% a%au me%aboli%n'a di dalam airan ha'a%i$ arame%er

,armakokine%ika oba% diperoleh berdasarkan hasil pengukuran kadar oba% u%uh dan

me%aboli%n'a$


4/34

&erdapa% %iga 7enis parame%er ,armakokine%ik5 'ai%u:

.$ arame%er pokok

&e%apan keepa%an absorbsi 8Ka

-enggambarkan keepa%an absorbsi5 'ai%u masukn'a oba% ke dalam sirkulasi

sis%emik dari %empa% absorbsin'a 8saluran erna pada pemberian oral5 7aringano%o% pada pemberian in%ramuskular$

Cl 8Klirens

Klirens oba% adalah sua%u ukuran eliminasi oba% dari %ubuh %anpa

mempermasalahkan mekanisme prosesn'a$ 4mumn'a5 7aringan %ubuh a%au

organ dianggap sebagai sua%u kompar%emen airan dengan ;olume %erba%as

8;olume dis%ribusi dimana oba% %erlaru% di dalamn'a 86hargel5 .9!!$ Klirens

merupakan ,ar%or 'ang memprediksi la7u eliminasi 'ang berhubungan dengan

konsen%rasi oba%$

Volume dis%ribusi 8Vd

Volume dis%ribusi adalah ;olume 'ang didapa%kan pada saa% oba%

didis%ribusikan$ -enghubungkan 7umah oba% dalam %ubuh dengan konsen%rasi

oba% 8C dalam darah a%au plasma$

$ arame%er 6ekunder

Wak%u paruh eliminasi 8%./

-erupakan (ak%u 'ang dibu%uhkan un%uk mengubah 7umlah oba% di dalam

%ubuh men7adi se%engah a%au separuh selama eliminasi 8a%au selama in,us 'ang

kons%an 8Ka%=ung5 .99@$

&e%apan keepa%an eliminasi 8 Kel

Keepa%an eliminasi adalah ,raksi oba% 'ang ada pada sua%u (ak%u 'ang akan

%ereliminasi dalam sa%u sa%uan (ak%u$ &e%apan keepa%an eliminasi

menun7ukkan la7u penurunan kadar oba% se%elah proses kine%ik menapai

keseimbangan 8*eal5 00$

3$ arame%er &urunan

Wak%u menapai kadar punak 8%maks

Wak%u konsen%rasi plasma menapai punak dapa% disamakan dengan (ak%u

'ang diperlukan un%uk menapai konsen%rasi oba% maksimum se%elah emberian

oba%$ ada ,ase ini5 absorpsi iba% adalah %erbesar dan la7u absorpsi oba% sama

dengan la7u eliminasi oba%$ Absorpsi masih ber7alan se%elah ,ase ini %erapai5

%e%api pada la7u 'ang lebih lamba%$ +arga %maks men7adi lebih keil 8berar%i

sediki% (ak%u 'ang diperlukan un%uk menapai konsen%rasi plasma punak

bila la7u absorbs oba% men7adi lebih epa%$

Kadar punak 8Cpmaks


5/34

arame%er ini menun7ukkan konsen%rasi oba% maksimum dalam plasma se%elah

pemberian seara oral$ 4n%uk beberapa oba% diperoleh sua%u hubungan an%ara

e,ek ,armakologi sua%u oba% dan konsen%rasi oba% dalam plasma 86hargel5

.99!$

uas daerah di ba(ah kur;a 8A4C

A4C adalah permukaan di ba(ah kur;a 'ang menggambarkan naik %urunn'a

kadar plasma sebagai ,ungsi dari (aku$ A4C dapa% dihi%ung seara ma%ema%is

dan merupakan ukuran un%uk bioa;aibili%as sua%u oba%$ A4C dapa% digunakan

un%uk membandingkan kadar masing2masing plasma oba% bila penen%uan

keepa%an eliminasin'a %idak mengalami perubahan$ 6elain i%u5 an%ara kadar

plasma punak dan bioa;aibili%as %erdapa% hubungan langsung 8Waldon5 00!$

Cuplikan darah sanga% rele;an5 karena semua proses oba% dalam %ubuh meliba%kan

darah sebagai media5 sua%u ala% ukur dari organ sa%u ke organ lain seper%i absorpsi5 dis%ribusi5

me%abolisme5 dan ekskresi$


6/34

%erhingga$ Karena i%u5 me%ode analisis 'ang dipilih harus dapa% melipu% kadar oba%

%er%inggi sampai %erendah 'ang ada di dalam badan$

3$ Ke%eli%ian 8accuracy dan ke%epa%an 8precision

Ke%eli%ian 8accuracy di%un7ukan oleh kemampuan sua%u me%ode un%uk

memberikan hasil pengukuran sedeka% mungkin dengan true value 8nilai

sesungguhn'a$ Ke%eli%ian sua%u me%ode dapa% diliha% dari perbedaan an%ara harga

pene%apan kadar ra%a2ra%a dengan harga sebenarn'a a%au konsen%rasi 'ang

dike%ahui$ ika %idak ada da%a nilai sebenarn'a a%au nilai 'ang dianggap benar

%ersebu% maka %idak mungkin un%uk menen%ukan berapa akurasi pengukuran

%ersebu%$

-e%ode 'ang baik memberikan hasil recovery 8perolehan kembali 'ang %inggi

'ai%u @)290? a%au lebih dan kesalahan sis%ema%ik kurang dari .0?$ erolehan

kembali merupakan %olok ukur e,isiensi analisis5 sedangakan kesalahan sis%ema%ik

merupakan %olok ukur inakurasi pene%apan kadar$ Kesalahan ini dapa% berupa

kesalahan kons%an a%au proporsional$ Ke%eli%ian berkaian dengan pura%a$ >ila sua%u

hasil i%u %eli%i 8accurate berar%i pura%a sama dengan harga sebenarn'a5 (alaupun

pen'ebarann'a lebar 8luas$ Dalam hubungan ini5 adalah lebih baik hasil 'ang

kurang %eli%i %api %epa% daripada %eli%i namun kurang %epa%$ Ke%epa%an

menggambarkan hasil 'ang berulang2ulang %idak mengalami perbedaan hasil

8reprodusibili%as da%a$ Dengan ka%a lain5 ke%epa%an menun7ukkan kedeka%an hasil2

hasil pengukuran berulang$ Ke%epa%an pengukuran hendakn'a diperoleh melalui

pengukuran ulang8replikasi dari berbagai konsen%rasi oba% dan melalui

pengukuran ulang kur;a konsen%rasi s%andar 'ang disiapkan seara %erpisah pada

hari 'ang sama$ Ke%epa%an berhubungan dengan pen'ebaran harga %erhadapa pura%akeil meskipun karena kesalahan sis%ema%ik5 pura%a berbeda agak besar dengan

harga sebenarn'a$ Kemudian dilakukan perhi%ungan s%a%is%ik 'ang sesuai dengan

pen'ebaran da%a5 seper%i s%andar de;iasi a%au koe,isien ;ariasi$

Kesalahan aak merupakan %olok ukur inpreision sua%u analisis5 dan dapa% bersi,a%

posi%i, a%au nega%i,$ Kesalahan aak iden%ik dengan ;ariabili%as pengukuran dan


7/34

dierminkan oleh %e%apan ;ariasi$ -e%ode 'ang baik memiliki nilai kesalahan aak

kurang dari .0?$

"$ Cepa%

Keepa%an berkai%an dengan ban'akn'a uplikan ha'a%i 'ang harus dianalisis

dalam sua%u maam peneli%ian ,armakokine%ika)$ ,isien

-e%ode %idak %erlalu pan7ang karena dikha(a%irkan akan menimbulkan sua%u

kesalahan sis%ema%ik 86ud7adi5 00!$

Dalam pene%apan kadar oba% dalam darah 8airan %ubuh5 me%ode 'ang digunakan harus

%epa%5 dan dalam penger7aann'a diperlukan sua%u ke%eli%ian 'ang ukup %inggi agar diperoleh

hasil 'ang akura%5 sehingga nan%in'a dapa% menghindari kesalahan 'ang ,a%al$ Dalam analisis

ini5 kesalahan hasil %idak boleh lebih dari .0? 8%ergan%ung pula ala% apa 'ang digunakan

dalam analisis 8Bi%shel5 .9@$Cepa%5 simpel5 dan sensi%i, %elah membua% spek%ro,o%ome%er 4V2VI6 men7adi sua%u

me%ode analisis ,armase%ika 'ang sanga% popular un%uk pengukuran seara kuan%i%a%i, oba%

dan me%aboli% dalam sampel biologi$ 6alah sa%u alasan pen%ing a%as kepopulerann'a karena

sensi%i;i%as dari me%ode ini5 'ai%u .2.0 g/ml$ Iden%i,ikasi kuali%a%i, dari oba% a%au me%aboli%

menggunakan spek%ro,o%ome%ri 4V2VI6 berdasarkan pada pan7ang gelombang maksimum

'ang diabsorpsi$ ada absorpsi 'ang maksimum5 sensi%i;i%as op%imum akan didapa%$ Karena

perubahan absorbansi minimal un%uk sediki% perubahan pan7ang gelombang5 error

diminimalkan$ +asiln'a5 akurasi dan presisi 'ang baik didapa%kan 86mi%h5.9!.$

6alah sa%u me%ode pengukuran kadar oba% dalam analisis airan ha'a%i adalah me%ode

>ra%%on2-arshall$ -e%ode ini didasarkan pada prinsip kolorime%ri5 'ai%u %erben%ukn'a

sen'a(a2sen'a(a ber(arna 'ang in%ensi%asn'a dapa% di%en%ukan seara spek%ro,o%ome%ri

;isibel dengan 3 %ahap5 'ai%u pemben%ukan sen'a(a dia=o5 penghilangan sisa asam ni%ri%

dengan penambahan asam sul,ama%5 dan pengkoplingan garam dia=onium2*D$

III. ALAT DAN BAHAN

a Ala% :.$ abu %akar .0 ml

$ ipe% ;olume 05.E 05E .50E 50 ml

3$ &abung reaksi/,lakon

"$ ipe% ukur ) ml

)$ 6pek%ro,o%ome%er dan ku;e%

$ 6kalpel/sile%

@$ 6en%ri,uge

!$ 6%op(a%h

9$ pendor,

.0$ Ala% ;or%e

..$ ropipe%

.$ -ikropipe% dan %ip


8/34

b >ahan :

.$ Asam %rikloroase%a% 8&CA

$ *a%rium ni%ri% 05. ?

3$ Amonium 6ul,ama% 05)?

"$ *8.2na,%il e%ilendiamin 05.?

)$ An%ikoagulan 8heparin$ 6ul,ame%oksa=ol

@$ Darah %ikus

IV. CARA KERJA

a embua%an kur;a baku:

Dienerkan s%ok sul,ame%oksa=ol 8. mg/ml dengan auades sehingga diperoleh

kadar sul,ame%oksa=ol: )5 )05 .005 005 "00 g/ml$

Di%ambahkan )0 l darah 'ang mengandung an%ikoagulan di%ambah )0 l auades%5

ampur homogen5 dan %ambah 50 ml &CA )? dengan vortexing.

4n%uk pembua%an blanko kur;a baku5 )0 l darah 'ang mengandung an%ikoagulan

di%ambahkan )0 l auades 8%idak di%ambah sul,ame%oksa=ol5 ampur homogen dan

%ambah 50 ml &CA )? dengan vortexing.

>lanko kur;a baku dan sampel 'ang %elah di;or%e disen%ri,ugasi 8) meni%E )00 rpm$

Diambil .50 ml beningan 8superna%an dan dienerkan dengan auades 50 ml$

Di%ambahkan laru%an *a*


9/34

Diambil )0 l darah 'ang mengandung an%ikoagulan ke dalam %abung reaksi dan

di%ambah )0 l auades%5 diampur homogen$

Di%ambah 50 ml &CA )? dengan vortexing$

Disen%ri,uge selama ) meni% dengan keepa%an )00 rpm$

Diambil beningan 8.5)0 ml dan dienerkan dengan auades% 50 ml$

Ke dalam %iap %abung di%ambahkan laru%an *a*


10/34

Dihi%ung nilai reo;er'5 kesalahan sis%ema%ik5 dan kesalahan aak$

V. DATA DAN PERHITUNGAN

Data Pe!"#aa$

Pe%#&ata$ K&'a Ba(& Daa) T*(&+

Kadar sul,adia=in dalam

darah 8g/ml

Absorbansi

) 0500

)0 05000

.00 0503

00 05.0"

"00 05..

Va,*-a+* Daa) T*(&+

Kadar sul,adia=in dalam darah

8g/ml

Absorbansi I Absorbansi II Absorbansi III

)0 05.0" 05.0" 05.00

300 05.! 0500 05.9!

Pe$etaa$ (a-a

Ke,"%"( A

Beplikasi Absorbansi

. 05.!

05.99

3 053.

" 05.!!

Ke,"%"( B


. 05.3

05.3"

3 05."@

" 05.""

) 05.30


11/34

Ke,"%"( C


. 05.!3

05.@

3 05

Ke,"%"( D


. 05..!

05.0

3 05.0@

" 05.

) 05.3

Pe)*t&$/a$

1. Pe)*t&$/a$ Pe$/e$!ea$

Ke%erangan:

V. H Volume sul,adia=in 'ang diambil 8ml

V H Volume labu %akar 8ml

-. H Konsen%rasi sul,adia=in s%ok 8g/ml

- H Konsen%rasi sul,adia=in 'ang diinginkan 8g/ml

Dengan menggunakan V. -. H V -5 dapa% di%en%ukan ;olume laru%an s%ok 'ang diambil$

a. Larutan stok untuk penetapan kurva baku

Dike%ahui :

-. H .mg/ml H .000 g/ml

V H ) ml

adi5 ;olume sul,adia=in 'ang diambil adalah sebagai beriku%$

. ika kadar 'ang diinginkan ) g/ml

V.$-. H V$-

V.$ .000 g/ml H .0 ml$ ) g/mlV. H 05) ml

V1.M1 V2.M2


12/34

ika kadar 'ang diinginkan )0 g/ml

V.$-. H V$-V.$ .000 g/ml H .0 ml$ )0 g/ml

V. H 05) ml

3 ika kadar 'ang diinginkan .00 g/ml

V.$-. H V$-

V.$ .000 g/ml H .0 ml$ .00 g/ml

V. H . ml

" ika kadar 'ang diinginkan 00 g/ml

V.$-. H V$-V.$ .000 g/ml H .0 ml$ 00 g/ml

V. H ml

) ika kadar 'ang diinginkan "00 g/ml

V.$-. H V$-

V.$ .000 g/ml H .0 ml$ "00 g/ml

V. H " ml

b$ Larutan stok untuk reo;er'

Dike%ahui :

-. H .mg/ml H .000 g/ml

V H ) ml

adi5 ;olume sul,adia=in 'ang diambil adalah sebagai beriku%$

. ika kadar 'ang diinginkan )0 g/ml

V.$-. H V$-

V.$ .000 g/ml H ) ml$ )0 g/ml

V. H 05) ml ika kadar 'ang diinginkan 300 g/ml

V.$-. H V$-

V.$ .000 g/ml H 05) ml$ 300 g/ml

V. H .5) ml

2. Pe)*t&$/a$ Pe$e$t&a$ V",&%e Pe%#e*a$ S&,a-*a*$

>> %ikus H 9!5!) gram

6%ok 'ang digunakan H .0 mg/ml

Volume pemberian H

H

H 05"9"3 ml

3. Pe%#&ata$ K&'a Ba(& Daa) T*(&+

Kadar sul,adia=in dalam Absorbansi


13/34

darah 8g/ml

) 0500

)0 05000J

.00 0503

00 05.0"

"00 05..

J di%olak

Dengan regresi linear didapa%:

a H 2050.0

b H

r H 0599!0

6ehingga kur;a baku 'ang diperoleh adalah

Ke%erangan :

1 H absorbansi H kadar. Va,*-a+* Ka-a S&,a-*a*$ -a,a% Daa) T*(&+

Kadar sul,adia=in dalam

darah 8g/ml

Absorbansi I Absorbansi II Absorbansi III

)0 05.0" 05.0" 05.00

300 05.! 0500 05.9!

yH )5)!)0 $ .02"xL 050.

a$ 4n%uk kadar )0 g/ml

1) Perhitungan Kadar TerukurBeplikasi . ' H )5)!)0$.02" L 050.


14/34

05.0" H )5)!)0$.02" L 050.

05.. H )5)!)0$.02"

H 0@599 g/ml

Beplikasi ' H )5)!)0$.02" L 050.

05.0" H )5)!)0$.02" L 050.

05.. H )5)!)0$.02" H 0@599 g/ml

Beplikasi 3 ' H )5)!)0$.02" L 050.

05.00 H )5)!)0$.02" L 050.

05.. H )5)!)0$.02"

H 005)3@ g/ml

H 0)53..9 g/ml


15/34

) Perhitungan Kesalahan !cak

8g/ml 8x g/ml d H M 2 Mx

0)53..953!@3 )599

0@599 53!@3 )599

005)3@ "5@@"@ 5@9@!

H

H "5.3)0

H

H 50."0 ?

3)Perhitungan Beo;er'

"ecovery H

"ecovery. H

H ".)533!" ?

"ecovery H

H ".)533!" ?

"ecovery3 H

H "0.50@"" ?


16/34

Ba%a2Ba%a"ecovery H

H ".05)!3@?

#) Perhitungan Kesalahan $istematik

Kesalahan 6is%emik H .00? 2"ecovery

Kesalahan sis%ema%ik . H .00? 2 ".)533!"?

H 23.)533!"?

Kesalahan sis%ema%ik H .00? 2 ".)533!"?

H 23.)533!"?

Kesalahan sis%ema%ik 3 H .00? 2 ".050@""?

H 23.050@""?

Ba%a2Ba%a Kesalahan sis%ema%ik H

H 23.35)!3@?

b$ 4n%uk kadar 300 g/ml

1) Perhitungan Kadar Terukur

Beplikasi . ' H )5)!)0$.02" L 050.

05.! H )5)!)0$.02" L 050.

05.9" H )5)!)0$.02"

H 3"@53)90 g/ml

Beplikasi ' H )5)!)0$.02" L 050.

0500 H )5)!)0$.02" L 050.

05. H )5)!)0$.02"

H 3@95)!! g/ml

Beplikasi 3 ' H )5)!)0$.02" L 050.

05.9! H )5)!)0$.02" L 050.

05.0 H )5)!)0$.02"

H 3@500@ g/ml


17/34

H 3@5).) g/ml

) Perhitungan Kesalahan !cak


3@5).)

059) "..5@!)

..593@ ."5"!"!

!53))@ 95!.@@

H

H .@59.@@

H

H "5!@3 ?

%) Perhitungan Beo;er'

"ecovery H

"ecovery. H

H ..)5@!3 ?

"ecovery H

H .5)9" ?


18/34

"ecovery3 H

H .)533)@ ?

Ba%a2Ba%a"ecovery H

H .5))0)?

#) Perhitungan Kesalahan $istematik

Kesalahan 6is%emik H .00? 2"ecovery

Kesalahan sis%ema%ik . H .00? 2 ..)5@!3?

H 2.)5@!3?

Kesalahan sis%ema%ik H .00? 2 .5)9"?

H 25)9"?

Kesalahan sis%ema%ik 3 H .00? 2 .)533)@?

H 2)533)@?

Ba%a2Ba%a Kesalahan sis%ema%ik H

H 25))0)?

4. Pe$etaa$ Ka-a

Ke,"%"( A

Beplikasi Absorbansi 8' Kadar 8

. 05.! "..5!.@"

05.99 3@@5@9@@

3 053. "3)509"0

" 05.!! 3)!5.0.

Ke,"%"( B



19/34

. 05.3 "599))

05.3" .5".")

3 05."@ !"59..

" 05."" @953.9

) 05.30 )"5))

Ke,"%"( C


. 05.!3 3"95."9)

05.@ ".0509

3 05 "5.".)

Ke,"%"( D


. 05..! 35@3

05.0 0"5..!

3 05.0@ .350@0@

" 05. 3959!"

) 05.3 )@5!33)

5. RecoveryData Ke,"%"( B

Kadar Absorbansi H ) g/ml

Kadar


20/34

H 059@")0 mg/ml darah H 9@5")0 g/ml

?

Ba%a2ra%a recovery: H 3!5))9@ ?

Kesalahan sis%ema%ik : .00? 2 3!5))9@ ? H .5""03 ?


"599))

!593"

35939. .)5).)

.5".") @5)0. )5)).9

!"59.. .)5@)) "!5@3

@953.9 .053!)0 .0@5"

)"5)) ."5!. .)5)".

H

H .5!".

H

H "5@."


21/34

NaNO2

VI. PEMBAHASAN

erobaan ini ber%u7uan agar mahasis(a memahami pene%apan kadar analisis oba% di

dalam airan ha'a%i melalui me%ode >ra%%on2-arshall$ -e%ode >ra%%on2-arshallbeker7a

melalui prinsip reaksi dia=o%asi5 'ai%u reaksi pemben%ukan (arna pada sen'a(a 'ang

memiliki gugus ak%i, amina aroma%is primer$ embaaan reaksi ini dilakukan menggunakan

me%ode 6pek%ro,o%ome%ri 4V2;is$

-e%ode >ra%%on2-arshall ber7alan melalui 3 %ahap 'ai%u :

.$ emben%ukan 6en'a(a Dia=o

6alah sa%u s'ara% reaksi dia=o%asi adalah sen'a(a harus memiliki gugus amina

aroma%ik primer$ 6ul,ame%oksa=ol memiliki s%ruk%ur s%andar amina aroma%ik primer5

sehingga reaksi dia=o%asi dapa% berlangsung dengan reaksi sebagai beriku%:

+eriku%n'a adalah pemrosesan sampel darah in vivo dengan ara memasukan )0 l

darah 'ang mengandung an%i koagulan berupa heparin$ -aksud penambahan heparin ini

adalah agar darah %idak membeku$ Campuran %ersebu% di%ambahkan dengan )0 l auades%

dan dihomogenkan$ 6e%elah homogen5 di%ambahkan dengan 50 ml &CA )? dengan

vortexing$ &CA ialah sen'a(a 'ang mampu memprespi%asi makromolekul seper%i pro%ein5

B*A5 dan D*A$ ada perobaan kali ini5 maksud dari penambahan &CA adalah agar pro%ein

%erdena%urasi$ Keberadaan pro%ein pada superna%an akan mengganggu proses absorbansi

sehingga perlu didena%urasi$ -ekanisme dena%urasi pro%ein dilakukan melalui depro%onasi5

'ai%u &CA mendena%urasi s%ruk%ur sekunder dan %ersier pro%ein melalui ika%an disul,ida 'ang

merupakan pemben%uk kedua s%ruk%ur %ersebu% sehingga bagian nonpolar dari pro%ein akan

keluar ser%a pro%ein mengendap$ &CA 7uga ber,ungsi sebagai donor pro%on pada reaksi

beriku%n'a$

6elain i%u5 &CA 7uga ber,ungi sebagai pemberi suasana asam sehingga dapa% berperan

dalam menghen%ikan ker7a en=im peme%abolisme oba% sekaligus men'ebabkan dena%urasi

pro%ein plasma %anpa memeah pro%ein men7adi asam amino pen'usunn'a$

ada reaksi dia=o%asi 'ang biasa5 digunakan +Cl 8asam klorida sebagai pemberi

suasana asam$ &e%api pada perobaan ini %idak digunakan +Cl karena +Cl bere,ek memeah

pro%ein men7adi asam aminon'a sehingga pada saa% sen%ri,ugasi asam amino %ersebu% %idak

akan memisah dari plasman'a karena %erlalu keil un%uk bisa diendapkan$ Asam amino

%er%en%u memiliki ika%an rangkap %erkon7ugasi 'ang akan memberikan serapan pada 4V2Vis

sehingga akan mengganggu pembaaan absorbansi$ 6edangkan bila digunakan &CA5 &CA

akan mengika% pro%ein sehingga pro%ein dapa% %erdena%urasi dalam suasana asam %anpa

%erpeah men7adi ,ragmen2,ragmenn'a$

>eriku% ini adalah proses dena%urasi pro%ein oleh &CA:


28/34

Kemudian5 laru%an kur;a baku in%ernal 'ang %elah dibua% digabung dengan sampel

darah in vivo'ang %elah di2vortexing diampur5 dan di2sentri&uge selama ) meni% dengan

keepa%an )00 rpm$ rinsip sen%ri,ugasi ialah pemisahan sua%u ampuran dengan basis

perbedaan bobo% 7enis$ ada perobaan ini5 sen%ri,ugasi dimaksudkan agar %er7adi pemisahan

an%ara pada%an dengan airan5 dimana pada%an akan %erprespi%asi di ba(ah %abung semen%ara

airan akan memben%uk superna%an$ 6en%ri,ugasi 7uga men'empurnakan dan memperepa%

pemisahan endapan pro%ein dari superna%an 'ang mengandung se7umlah sul,ame%oksa=ol

'ang %idak iku% mengendap bersama pro%ein$ 6ul,ame%oksa=ol 'ang berada pada superna%an

merupakan oba% bebas 'ang %idak %erika% pro%ein5 sedangkan oba% 'ang %erika% dengan pro%ein

%idak ak%i, sara ,armakologis dan %idak memberikan e,ek %erapeu%ik$

6e%elah dipusingkan maka diambil beningan seban'ak .5)0 ml dengan menggunakan

mikropipe% seara ha%i2ha%i agar endapan pro%ein %idak %erambil5 sehingga didapa%kan oba%

ben%uk bebas pada sampel$ 6elan7u%n'a5 beningan %ersebu% di%uang ke dalam %abung reaksi

dan dienerkan dengan auades% seban'ak 50 ml$ alu5 dalam se%iap %abung reaksi

di%ambahkan laru%an *a*


29/34

6e%elah i%u5 di%ambahkan laru%an ammonium sul,ama% 05)? seban'ak 05 ml lalu

didiamkan selama meni% agar proses reaksi berlangsung dengan sempurna$ -aksud dari

penambahan dari ammonium sul,ama% agar sisa ni%ri% dari reaksi dia=o%asi dapa% di%angkap

oleh ammonium sul,ama%$ Asam ni%ri% 'ang bersi,a% sebagai oksida%or dapa% mengoksidasi

sen'a(a hasil reaksi kopling dia=o sehingga dapa% lepas men7adi gas ni%rogen dan ,enol$


30/34

.$ ,isiensi

"ecovery merupakan %olak ukur e,isiensi analisis$ Analisis memenuhi s'ara% 7ika

recovery berkisar an%ara @)290?$ ika diluar ren%ang kadar %ersebu% maka

perobaan dianggap kurang e,isien$

$ AkurasiAkurasi dianggap baik 7ika kesalahan sis%ema%ik %idak lebih dari .0?$ +arga

kesalahan sis%ema%ik menun7ukan kemampuan me%ode ini memberikan hasil

pengukuran sedeka% mungkin dengan nilai sebenarn'a$

3$ resisi

resisi dianggap baik 7ika kesalahan aak %idak lebih dari .0?$ Ke%epa%an

menun7ukan hasil pengukuran 'ang berulang pada sediaan ha'a%i 'ang sama$

6e%elah dilakukan pembaaan5 didapa%kan da%a berupa nilai absorbansi$ ada perobaan

ini5 didapa% nilai absorbansi un%uk kadar 05 )05 .005 005 dan "00 Rg/mlber%uru%2%uru%sebesar 0500E 05000E 0503E 05.0"E dan 05..$ *amun5 nilai absorbansi un%uk kadar )0 Rg/ml

%erpaksa di%olak dari perhi%ungan sebab berupa penilan dan %idak memenuhi %eori 'ang

berlaku$ +al ini mungkin disebabkan oleh kesalahan prak%ikan dalam pembua%an laru%an s%ok

)0 Rg/ml$ Da%a 'ang diperoleh kemudian dilakukan regresi linier5 dimana kadar

sul,ame%oksa=ol sebagai nilai dan absorbansi 'ang diperoleh sebagai nilai 15 sehingga

didapa%kan persamaan kur;a baku5 'ai%u ' H )5)!)0 $ .02" L 0$0.0$

alu5 dari da%a ;alidasi perobaan didapa%kan nilai absorbansi un%uk kadar )0 Rg/ml

dengan kali replikasi sebesar 05.0"E 05.0"E dan 05.00$ Kemudian5 nilai absorbansi %ersebu%

dimasukan ke dalam persamaan kur;a baku sehingga didapa% nilai 0@599 Rg/ml un%uk

nilai absorban per%ama sebesar 05.0"$ *ilai kadar kedua memiliki nilai absorbansi 'ang sama5

sehingga nilai kadarn'a pun sama$ Kemudian5 pada nilai absorbansi ke%iga 805.00

didapa%kan kadar sebesar 005)3@ Rg/ml$ 6ehingga didapa% nilai kadar ra%a ra%a sebesar

0)53..9 g/ml dan nilai 6D 8s%andar de;iasi didapa%kan "5.3)0$

6e%elah i%u diari nilai CV dengan memasukkan rumus :

6ehingga didapa% angka 50."0 ?$ Kesalahan aak 'ang di%un7ukkan dengan besarn'a nilai

koe,isien ;ariansi 8CV merupakan sua%u parame%er presisi a%au ke%epa%an pengukuran 'ang

menun7ukkan kedeka%an hasil2hasil pengukuran seara berulang pada uplikan ha'a%i 'ang

sama$

Kemudian dilakukan perhi%ungan recovery 8perolehan kembali dengan rumus :


31/34

"ecovery H

Dimana nilai kadar dike%ahui sebesar )0 Rg/ml dan nilai kadar %erukur merupakan besar dari

kadar 'ang ki%a dapa% berdasarkan da%a ;alidasi dalam perobaan 'ai%u besar nilai $

"ecovery 8perolehan kembali merupakan parame%er e,isiensi dari sua%u me%ode analisis$

*ilai recovery 'ang dipers'ara%kan adalah @)L90?$ Dengan kadar %erukur

didapa% nilai recovery sebesar ".)533!" ?$ alu dengan nilai kadar %erukur sebesar

didapa% nilai recovery sebesar "0.50@"" ?$ 6ehingga ra%a ra%a dari nilai

recoverysebesar ".05)!3@?$ >eriku%n'a dilakukan perhi%ungan kesalahan sis%ema%ik dengan

rumus :

Kesalahan $istematik ' 1-- + "ecovery

Kesalahan sis%ema%ik merupakan parame%er akurasi dari sua%u pene%apan kadar$ +arga

ini menun7ukkan kemampuan me%ode analisis un%uk memberikan hasil pengukuran 'ang

sesuai dengan nilai aslin'a$ *ilai kesalahan sis%emik 'ang dipers'ara%kan adalah kurang dari

.0?$ ada nilai recovery ".)533!"? didapa%kan nilai kesalahan sis%ema%ik 23.)533!"?$

ada nilai recovery ".050@""? didapa%kan nilai kesalahan sis%ema%ik sebesar 23.050@""?

sehingga didapa%kan nilai ra%a ra%a kesalahan sis%ema%ik sebesar 23.35)!3@?$

Dengan ara 'ang sama 7uga dilakukan pada kadar sebesar 300 g/ml 'ang

mendapa%kan angka absorbansi sebesar 05.! E 0500 E dan 05.9!$ ada nilai absorbansi

sebesar 05.! didapa%kan nilai sebesar 3"@53)90 g/ml$ alu pada absorbansi 0500

didapa%kan nilai sebesar 3@95)!! g/ml5 ser%a 'ang %erakhir pada nilai absorbansi 05.9!

g/ml didapa%kan nilai sebesar 3@500@ g/ml$ 6e%elah i%u dira%a2ra%a dan didapa%kan nilai

ra%a ra%a sebesar 3@5).) g/ml dengan nilai 6D sebesar .@59.@@$ Kemudian5 diari

besarn'a nilai CV sehingga didapa% "5!@3? dan diari nilai recoverysehingga didapa% nilai

ber%uru% %uru% ..)5@!3 ? E .5)9" ? E dan .)533)@ ? dengan ra%a ra%a recovery

.5))0) ?$ 6e%elah mendapa% nilai recoverymaka dihi%ung besarn'a kesalahan sis%ema%ik

sehingga didapa% nilai kesalahan sis%ema%ik seara ber%uru%2%uru% 2.)5@!3? E 25)9" ? E

dan 2)533)@?$ Dengan ra%a ra%a kesalahan sis%ema%ik sebesar 25))0)?$*ilai 'ang didapa%kan begi%u besar sehingga berimbas kepada nilai recovery ser%a

nilai kesalahan sis%ema%ik$ *ilai recoverydidapa% 7auh dia%as nilai recovery'ang ideal 'ai%u


32/34

sebesar @)290?$ 6edangkan pada kesalahan sis%ema%ik memang nilain'a di ba(ah .0?

namun besarn'a nilai pun kurang rasional 'ai%u menapai minus ra%usan$ 6ehingga dapa%

disimpulkan bah(a me%ode perobaan 'ang digunakan memiliki %ingka% ke%epa%an 'ang

%inggi %e%api 7uga dianggap kurang e,isian dan kurang akura%$

6elan7u%n'a dilakukan analisis da%a pada hasil perobaan dari sampel in vivo$

Kelompok prak%ikan5 kelompok >5 melakukan perobaan dengan replikasi seban'ak empa%

kali sehingga didapa%kan nilai seper%i beriku%:


. 05..! 35@3

05.0 0"5..!

3 05.0@ .350@0@

" 05. 3959!"

) 05.3 )@5!33)

>erdasarkan nilai perobaan5 didapa%kan nilai recovery ber%uru%2%uru% sebesar

dengan pura%a sebesar

3!5))9@ ? sehingga didapa% kesalahan sis%ema%ik sebesar .5""03 ?$ +al ini menun7ukan

%ingka% akurasi sampel 'ang rendah karena memiliki nilai kesalahan sis%ema%ik 7auh di a%as

ideal$ 6emen%ara i%u5 didapa% nilai kesalahan aak sebesar "5@." ? dan nilai ini ukup baik

karena menun7ukan %ingka% presisi 'ang %inggi$

&idak %epa%n'a hasil dalam perobaan ini kemungkinan disebabkan oleh

kekurang%eli%ian prak%ikan dalam pembua%an laru%an s%ok maupun laru%an baku5 kesalahan

pembaaan absorbansi akiba% ke%idak%epa%an pen7elasan asis%en prak%ikum kepada prak%ikan5

kurangn'a pengalaman prak%ikan5 dan ala% 'ang digunakan 8spek%ro,o%ome%er 'ang kurangakura% ser%a perlu perbaikan sehingga nilai 'ang diperoleh kurang %epa%$

VI. KESIMPULAN

.$ Analisis oba% dalam airan ha'a%i dapa% diukur dengan parame%er ,armakokine%ika$

$ -e%ode 'ang digunakan pada analisis oba% dalam airan ha'a%i adalah me%ode

>ra%%on2-arshall$

3$


33/34

)$ ada perobaan ini didapa% nilai recovery sebesar

dengan pura%a

sebesar 3!5))9@ ?5 sehingga didapa% kesalahan sis%ema%ik sebesar .5""03 ? ser%anilai kesalahan aak sebesar "5@." ?$

$ Dengan memperha%ikan harga parame%er 'ang didapa%5 hasil analisis dan me%ode

kurang baik karena sensi%i;i%as dan akurasi 'ang rendah$

@$ +asil 'ang kurang memuaskan bisa disebabkan oleh kurangn'a pengalaman dari

prak%ikan dan ala% 'ang kurang %epa%$

VII. DAFTAR PUSTAKA

Anonim$ .9@9$/armakope 0ndonesiadisi III$ akar%a: Depar%emen Keseha%an BI$

Anonim5 0.5 eparin h%%p://en$(ikipedia$org/(iki/+eparin5 diakses pada 6enin5 -ei

0.3 pukul .9$"0 WI>$

Anonim5 0.5 $ul&amethoxa2ole5 h%%p://en$(ikipedia$org/(iki/6ul,ame%hoa=ole5 diakses

pada 6enin5 -ei 0.3 pukul .9$)9 WI>$

Ka%=ung5 >e%ram$ .99@$/armakologi 3asar dan Klinik. akar%a: CG$

*eal5 -$$ 00$!t a 4lance 5edical Pharmacology disi V$ akar%a: rlangga$

oed7iadi5 Anna$ .99"$3asar+3asar ,iokimia$ akar%a: 4ni;ersi%as Indonesia ress$

Bi%shel5 W$ A$ .9@$ andbook o& ,asic Pharmacokinetics5 .s% di%ion$ 46A: Drug

In%eligene ublia%ion In$

6hargel5 eon$ .9!!$,io&armasetika dan /armakokinetika Terapan$ 6uraba'a: Airlangga

4ni;ersi%' ress$

6is(andono$ 000$Kimia 5edisinal$ 6uraba'a: Airlangga 4ni;ersi%' ress$

6mi%h5 B T 6%ea;ar'$ .9!.$ Text ,ook o& ,iopharmaceutics !nalysis ! 3escription o&

5ethods &or The 3etermination o& 3rug in ,iological /luid$ hiladelphia: es T

Febiger$

6ud7adi$ 00!$Kimia /armasi !nalisis$ 1og'akar%a: us%aka ela7ar$

Waldon5 D$$ 00!$ Pharmacokinetics and 3rug 5etabolism. Cambridge: Amgen5 In$5


34/34

1og'akar%a5 -ei 0.3

-enge%ahui5 rak%ikan5Asis%en Koreksi Febri Wulandari FA/09!" ##$$

Anggi%a &'as(uri FA/0930) ##$$

*aisbi%% Iman +ani, FA/0930! ##$$

Candra Kirana -$ FA/093.. ##$$

us' Andriani FA/093." ##$$

146064187 farmakologi eksperimental analisis obat dalam cairan hayati

Documents