acara 1. fix.docx

7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx

1/24

ACARA I

ENZIM

A. Tujuan

Tujuan praktikum acara I Enzim adalah :

1. Untuk mengetahui pengaruh pH terhadap aktivitas enzim diastase

atauamilase.

2. Untuk mengetahui pengaruh suhu terhadap aktivitas enzim diastase atau

amilase.

. Untuk mengetahui aktivitas amilase pada kecam!ah.B. Tinjauan Pustaka

1. Te"ri : #engujian$pengujian

Uji %ehling dan Uji &enedict. '"n"sakarida dan disakarida

(kecuali sukr"sa) !eraksi dengan pereaksi *ehling ataupun pereaksi !enedict

mem!entuk endapan merah !ata +u2,. #ereaksi !enedict dapat digunakan

untuk memeriksa ada tidakn-a gula dalam urine (#utjaatmaka 2//2).

0arutan !enedict merupakan campuran dari +u, natrium sul*at

dan 3a2+,. 4ar!"hidrat -ang mempun-ai si*at pereduksi (misaln-a

gluk"sa) akan mem!erikan endapan merah !ata dengan larutan !enedict. Uji

i"dine digunakan untuk menunjukkan adan-a p"lisakarida. &ila ke dalam

!ahan -ang mengandung p"lisakarida di!eri larutan i"dine mem!erikan

5arna !iru !erarti !ahan terse!ut mengandung amilum (amil"sa).

6mil"pektin akan mem!erikan 5arna merah ungu glik"gen dan dekstrin

akan mem!erikan 5arna merah c"klat (udarm" 2//7).

en-a5a peng"ksidasi -ang selalu direduksi "leh m"n"sakarida

adalah %e(+3)2 H2,2 dan i"n kupri (+u )28. 9ula akan di"ksidasi pada

gugus kar!"niln-a (0ehninger 1;). 'et"de -ang seringdigunakan dalam

analisa kadar gula suatu sampel !iasan-a menggunakan reagen&enedict.


2/24

Enzim merupakan unit *ungsi"nal dari meta!"lisme sel. &ekerja

dengan urutan$urutan -ang teratur enzim mengkatalisis ratusan reaksi

!ertahap -ang menguraikan m"lekul nutrien reaksi -ang men-impan dan

mengu!ah energi kinia5i dan -ang mem!uat makr"$m"lekul sel dari

prekurs"r sederhana. =i antara jumlah enzim -ang !erpartisipasi di dalam

meta!"lisme terdapat sekel"mp"k khusus -ang dikenal se!agai enzim

pengatur -ang dapat mengenali !er!agai is-arat meta!"lik dan mengu!ah

kecepatan katalitikn-a sesuai dengan is-arat -ang diterima. 'elalui

aktivitasn-a sistem enzim terk""rdinasi dengan !aik menghasilkan suatu

hu!ungan -ang harm"nis diantara sejumlah aktivitas meta!"lik -ang

!er!eda -ang diperlukan untuk menunjang kehidupan (0ehninger 1>2).

Enzim se!agai pr"tein akan mengalami denaturasi jika suhun-a

dinaikkan aki!atn-a da-a kerja enzim menurun. 'ungkin sampai suhu ?

e*ek pred"minan-a masih memperlihatkan kenaikan aktivitas

se!agaimana dugaan dalam te"ri kinetik. Tetapi le!ih dari ? e*ek

-ang!erla5anan -aitu denaturasi termal le!ih men"nj"l dan menjelang suhu

?? *ungsi katalitik enzim menjadi punah. elain itu pH juga sangat

!erpengaruh terhadap aktivitas enzim karena si*at i"nik gugus kar!"ksil

dan gugus amin" mudah dipengaruhi "leh pH. Hal ini men-e!a!kan daerah

katalitik dan k"n*"rmasi enzim menjadi !eru!ah. elain itu peru!ahan pH

juga akan men-e!a!kan denaturasi enzim dan mengaki!atkan hilangn-a

aktivitas enzim (9irindra 1/).um!er enzim dapat diper"leh dari tanaman he5an dan

mikr""rganisme. alah satu enzim pemecah pati adalah enzim a$amilase

(a$1$glukan$glukan"didr"lase@ E+..2.1.1.) enzim ini sangat !erperan

dalam industri pem!uatan r"ti dan sirup. Enzim A$amilase !an-ak terdapat

padakecam!ah kacang$kacangan. #emilihan kacang hijau se!agai sum!er

enzim a$amilase karena dalam !entuk kecam!ah mengandung t"k"*er"l

(pr" vitamin E) 7 ppm *en"lik 11 ppm. #em!uatan ekstrak

enzim dari kecam!ah kacang hijau : !iji kacang hijau dis"rtasi hingga


3/24

diper"leh !iji !ersih dan utuh dicuci direndam dengan aBuades selama

/ menit ditiriskan kemudian diperam dalam 5adah !erp"ri sampai terjadi

perkecam!ahan. Caktu perkecam!ahan (1 2 dan ? hari). 4ecam!ah

di!ersihkan dengan melepas kulit luarn-a se!agian diam!il se!agai sampel

untuk analisis kadar pr"tein dan air. e!agian ditim!ang kemudian

dihancurkan dengan !lender dimana untuk 1 g kecam!ah ditam!ahkan

? mlbuffer asetat /2 ' pH ?. 4ecam!ah -ang sudah hancur disimpan

selama 1/ menit sam!il dik"c"k kemudian dilakukan pen-aringan dengan

kapas. %iltrat -ang dihasilkan disentri*ugasi selama 2/ menit dengan

kecepatan 2///rpm pada suhu ?D+. upernatan (ekstrak enzim) -ang

dihasilkan diukur v"lumen-a dan ditempatkan ke dalam 5adah steril untuk

dianalisis antara lain@ aktivitas enzim A$amilase pH dan pr"tein terlarut.

Umumn-a aktivitas enzim a$amilase terjadi pada suhu /$/ D+ dan

aktivitasn-a akan mengalami penurunan pada kisaran suhu ?$?/ D+

hal ini dise!a!kan karena enzim mengalami denaturasi aki!atn-a

m"lekul$m"lekul enzim rusak sehingga kehilangan spesi*itasn-a. 4"ndisi

pH ekstrak kecam!ah masih diantara pH aktivitas "ptimal -aitu >$?;

(uarni 2//;).

&an-ak *akt"r -ang mempengaruhi laju kerja enzim. =i antaran-a

-ang paling penting adalah k"nsentrasi$k"nsentrasi su!strat dan enzim.

&e!erapa *akt"r utama -ang lain adalah suhu pH kekuatan i"nik dan

adan-a inhi!it"r. 0aju reaksi meningkat dengan kenaikan suhu dan akhirn-a

enzim kehilangan semua aktivitas jika pr"tein menjadi rusak aki!at panas.

&an-ak enzim !er*ungsi "ptimal dala !atasan$!atasan suhu antara 2?

$ ; (#age 1>).

6ktivitas enzim semakin meningkat dengan kenaikan suhu

hingga mencapai "ptimum hal ini terjadi karena meningkatn-a energi

kinetik -ang memper!esar peluang terjadin-a tum!ukan antara enzim

dan su!strat untuk !ereaksi mem!entuk k"mpleks enzim$su!strat sehingga

pr"duk -ang dihasilkan meningkat. 6ktivitas enzim terus meningkat hingga


4/24

tercapai pH "ptimum dan menurun setelah pH "ptimum. Enzim al*a

amilase mempun-ai pH "ptimum pada pH $11. 'enurut Cinarn" (2//2)

dekstrin telah ter!entuk dari hidr"lisis pati jika hasil uji i"d !er5arna

merah kec"klatan.


5/24

gluk"sa malt"sa dan dekstrin. #r"ses hidr"lisa pati terse!ut dilakukan

melalui tiga tahapan -aitu gelatinisasi likui*ikasi dan sakari*ikasi.

Enzim amilase akan memecah su!strat pati melalui tiga tahapan utama

-aitu gelatinisasi likui*ikasi dan sakari*ikasi. 6milase adalah enzim

-ang mempun-ai kemampuan memecah ikatan gluk"sida pada p"limer

pati. &e!erapa kel"mp"k dari enzim amilase adalah a$amilase G$

amilase dan Familase (3angin 2/1?).

.6ktivitas ter!esar-angdipamerkandaripH? sampaipH; dankerja

maksimumadalah sekitarpH?danpH;. 'enggunakanjumlah -ang samadari

A$amilase dan$amilase dalammencernaterpisah ditemukan !ah5a

tingkataktivitas$amilase melampauidariA$amilase (E-ster 1?).

Enzim adalah katalis pr"tein disintesis "leh sistem kehidupan dan

penting dalam sintetis serta pr"ses degradati*. 6milase adalah enzim -ang

memecah pati atau glik"gen. Hal ini dihasilkan "leh !er!agai "rganisme

hidup mulai dari !akteri jamur untuk tanaman dan manusia

(#ande- et al. 2///). 6lphaamilase (end"$1$=@gluc"se$=

gluc"h-dr"lase.2.1.1) milik keluarga end"amilase -ang acak

mem!elah1$=glik"sida hu!ungan antara unit gluk"sa -ang !erdekatan

dalam rantai pr"duk mempertahankan k"n*igurasi$an"merik dalam pr"duk

(6run asietal #ande-etal. 2//1). ,leh karena itu pentinguntuk

meningkatkan pr"tein meman*aatkan dengan segala cara dan sarana

peningkatan permintaan dunia untuk makanan dan pr"tein akan

men-e!a!kan mencari sum!er pr"tein n"n$k"nvensi"nal untuk sum!er

pr"tein k"nvensi"nal (6runsasi 2/1/).

Enzim dari sum!er mikr"!a umumn-a memenuhi permintaan

industri dan le!ih sta!il daripada tanaman dan he5an amilase dan

memper"leh murah. Enzim adalah pr"tein mampu memicu pr"ses !i"kimia.

&e!erapa mampu memicu pem!elahan hidr"litik (pencernaan) p"limer

!i"l"gis seperti pr"tein kar!"hidrat dan lemak. Ini dikenal se!agai


6/24

hidr"lisis. 6milase adalah nama -ang di!erikan untuk enzim hidr"lase

glik"sida -ang memecah pati menjadi m"lekul gluk"sa. #a-en dan #ers"z

adalah -ang pertama untuk men-adari enzimatik hidr"lisis pati dimana

mereka menemukan !ah5a ekstrak malt dik"nversi pati menjadi gula.Enzim

se!agian !esar pr"tein dengan si*at la!il dan ada aktivitas katalitik -ang

akti* "leh agen tertentu seperti suhu pH !ahan kimia dll -ang mengganggu

k"n*"rmasi asli enzim. #eman*aatan enzim terutama tergantung pada

sta!ilitas "perasi"nal dan pen-impanan. #ati -ang merupakan su!strat

amilase adalah !entuk -ang paling !erlimpah p"lisakarida pen-impanan

-ang signi*ikan -ang !esar di!idang !i"tekn"l"gi di!er!agai industri

peng"lahan pati. =alam !e!erapa tahun terakhir p"tensi menggunakan

mikr""rganisme se!agai sum!er !i"tekn"l"gi enzim industri -ang relevan

telah mem!angkitkan minat dalam ekspl"rasi aktivitas enzimatik

ekstraseluler dalam !e!erapa mikr""rganisme. 6milase memiliki salah satu

-ang paling penting aplikasi industri enzim. Hal ini digunakan dalam

pem!uatan !ir dan *ermentasi industri untuk dalam industri tekstil dalam

industri kertas dan industri makanan ('ahajan 2/11).

6ktivitas diastase (6,6+ 1/ 'et"de /) ditentukan

dengan menggunakans"lusi bufferpati larut dan madu diinku!asi dalam !ak

term"statik di/ "+. etelah itu 1 m0 aliBu"t campuran ini telah dihapus

pada interval ? menitdan pen-erapan sampel diikuti pada 77/ nm dalam

Perkin Elmer LuminescenceSpektrofotometer(3"r5alk U6).3ilai diastase

dihitung dengan menggunakan 5aktu -ang di!utuhkan untuk a!s"r!ansi

untukmencapai /.2? dan hasiln-a din-atakan dalam derajat gothekarenajumlahn-a (m0)dari 1 pati dihidr"lisis "leh enzim dalam 1 g madu dalam

1 jam (9"mes 2/1/).

6ktivitas enzim dipengaruhi "leh pH karena si*at i"nik gugus

kar!"ksil dan gugus amin" mudah dipengaruhi "leh pH. #eru!ahan pH atau

pH -ang tidak sesuai akan men-e!a!kan daerah katalitik dan k"n*"rmasi

enzim !eru!ah. elain itu peru!ahan pH juga men-e!a!kan denaturasi

enzim dan mengaki!atkan hilangn-a aktivitas enzim. Enzim -ang memiliki

aktivitas "ptimum pada suhu ?/J+ sampai dengan >/J+ dise!ut term"zim


7/24

dan enzim -ang memiliki aktivitas "ptimum di atas >/J+ dise!ut

hiperterm"zim ('er-andini 2//).

Enzim memiliki kekuatan katalitik !esar dan mempercepat reaksi

dengan mengurangi energi untuk setidakn-a juta kali untuk aktivasi. Enzim

mudah menjadi terdenaturasi dan kehilangan aktivitas katalitik. uhu umum

le!ih tinggi dari /+ dan pH -ang ekstrim harus dihindari setiap saat.

4egiatan hidr"litik dari alpha$amilase dariAspergillus terricoladitemukan

!ervariasi symbioticallydengan r"tasi "ptik tertentu dalam kisaran pHdi

atas.6milase adalah !i"katalis -ang paling penting karena kemampuan

mereka untuk meman*aatkan spektrum -ang luas dari su!strat sta!ilitas

-ang tinggi terhadap suhu ekstrim pH dll. =i antara mikr"!a tanaman dan

he5an enzim amilase mikr"!a memiliki aplikasi !esar dalam !er!agai

!idang. Kumlah amilase dengan pH "ptimum -ang !er!eda dan suhu juga

telah dilap"rkan (6mutha 2/12).

Enzim dapat pula mengalami peru!ahan k"n*"rmasi !ila pH

!ervariasi. 9ugus !ermuatan -ang jauh dari daerah terikatn-a su!strat

mungkin diperlukan untuk mempertahankan strutur tersier atau kuartener

-ang akti*. =engan !eru!ahn-a muatan gugus ini pr"tein dapat ter!uka

menjadi le!ih k"mpak atau !erdis"siasi menjadi pr"t"mer$ semua ini terjadi

dengan aki!at kehilangan aktivitas. &ergantung pada peru!ahan aktivitas

ini aktivitas !isa pulih atau tidak ketika enzim terse!ut dikem!alikan pada

pHn-a -ang "ptimal ('urra- 17).

#ereaksi -ang digunakan untuk menguji p"lisakarida adalah larutan

i"dine. 0arutan id"in akan mem!erikan 5arna !iru jika direaksikan dengan

p"lisakarida. #"lisakarida -ang lain akan mem!erikan 5arna -ang !er!eda

pada uji i"dine ini. 9lik"gen akan mem!erikan 5arna merah c"kelat dan

selul"sa mem!erikan 5arna c"kelat (utresna 2//;).

C. Metodologi

1. 6lat

a. Ta!ung reaksi

!.


8/24

e. 9elas pengukur

*. 9elas !eker

g. t"p5atch

h. #ipet tetes

i. #ipet v"lume

j. '"rtar

k. 4ain saring

l. #enjepit

m. Tim!angan

n. Inku!at"r

2. &ahan

a. &iji kacang hijau

!. Tauge

c. &u**er pH 7 >

d. 0arutan i"din //1 3

e. 0arutan diastase

*. 0arutan glik"gen 1

g. 0arutan amilum 1

h. 0arutan dekstrin 1

i. 6Buades

. +ara 4erja (Flowchart)

a.

#erc"!aan I : #engaruh pH Terhadap 6ktivitas Enzim=iastaseL6milase


9/24

!. Uji &enedict


10/24

c. Uji I"d

d. #engaruh uhu Terhadap 6ktivitas Enzim =iastaseL6milase


11/24


12/24

e. #engujian 6ktivitas 6milase dari Ekstrak &iji 4acang Hijau dan

Tauge

D. Hasil dan Pembahasan


13/24

Tabel ..#engaruh pH Terhadap 6ktivitas Enzim =iataseL 6milase

hi*t 4el u!strat &u**er Carna

/M ?M 1/M 1?M 2/M

1 > 11

ml

amilum

1

pH 4uning 4uning 4uning 4uning 4uning

112

1pH 7 Kingga Kingga Kingga Kingga Kingga

11/1

1?pH >

Ungu

#ekat

Ungu

#ekat

Ungu

#ekat

Ungu

#ekat

Ungu

#ekat

2 1; ml

amilum

1

pH &ening &ening 4uning 4uning 4uning

2 2? pH 7 &ening +"klat +"klat +"klat +"klat

2 7 pH > Ungu Ungu Ungu Ungu Ungu#ekat

um!er : 0ap"ran ementara

6milase adalah enzim -ang mempun-ai kemampuan memecah

ikatan gluk"sida pada p"limer pati. &e!erapa kel"mp"k dari enzim

amilase adalah a$amilase G$amilase dan Familase (3angin 2/1?).

Enzim -ang memiliki aktivitas "ptimum pada suhu ?/J+ sampai dengan >/J+

dise!ut term"zim dan enzim -ang memiliki aktivitas "ptimum di atas >/J+

dise!ut hiperterm"zim ('er-andini 2//).Umumn-a aktivitas enzim a$

amilase terjadi pada suhu /$/ D+ dan mengalami penurunan pada kisaran

suhu ?$?/D+ halini dise!a!kan karena enzim mangalami denaturasi

aki!atn-a m"lekul$m"lekul enzim rusak sehingga kehilangan spesi*itasn-a.

alah satu enzim pemecah pati adalah enzim a$amilase (a$1$glukan$

glukan"didr"lase@ E+..2.1.1.) enzim ini sangat !erperan dalam industri

pem!uatan r"ti dan sirup (uarni 2//;). =alam industri pangan enzim A$

amilase !er*ungsi men-ediakan gula hidr"lisis pati sehingga dapat di

man*aatkan untuk pr"duksi sirup gluk"sa ataupun sirup *rukt"sa -ang

mempun-ai tingkat kemanisan tinggi pem!uatan r"ti dan makanan !a-i

(etiasih 2//7).

Tahap 4arakterisasi Enzim 6milase:

#engaruh pH terhadap 6ktivitas Enzim 6milase

#engaruh 4"nsentrasi u!strat terhadap 6ktivitas Enzim 6milase

#engaruh Temperatur terhadap 6ktivitas Enzim 6milase ('appiratu dan

3urhaeni 2// dalam &ahri 2/12).


14/24

#ada perc"!aan kali ini dilakukan pengamatan pengaruh pH terhadap

aktivitas enzim amilase. Untuk mengetahui pengaruh n-ata dari pH

diperlukan dua tahap pengujian -akni pengujian i"d dan !enedict.

&erdasarkan hasil perc"!aan pengaruh pH terhadap aktivitas enzim diastase

dan amilase terhadap sampel amilum ml amilum 1 pada pH pada menit

ke / ? 1/ 1? 2/ secara !erturut$turut tidak didapatkan peru!ahan 5arna.

#erc"!aan pada shift 1 tidak sesuai dengan te"ri karena tidak terjadi

peru!ahan 5arna.#ada perc"!aan dengan menggunakan pH 5arna dari

menit ke$/ hingga ke$2/ semuan-a kuning. #ada pH 7 5arna tetap jingga

dan pada perc"!aan dengan pH > 5arnan-a tetap ungu pekat dari menit ke$/

hingga ke$2/.#erc"!aan pada shift2 mendapatkan hasil -akni pada pH

dengan pengamatan pada menit ke / ? 1/ 1? dan 2/ diper"leh 5arna akhir

setelah menit ke$2/ !erturut$turut -akni kuning c"klat dan ungu pekat. #ada

pH didapatkan 5arna !ening pada menit ke$/ dan ke$? sedangkan pada

menit selanjutn-a 5arnan-a menjadi kuning. #ada pH 7 5arna pada menit

ke$/ adalah !ening dan di menit$menit selanjutn-a 5arna menjadi c"klat.

#ada perc"!aan dengan pH > didapatkan hasil -akni ungu ungu ungu ungu

dan ungu pekat. 4erja "ptimum -ang didapat pada pH > sedangkan menurut

(E-ster 1?) pH enzim diastase "ptimum pada kisaran pH 7$;. 6da

kesamaan data pada kedua shift -aitu pada perc"!aan dengan pH > 5arna

-ang dihasilkan adalah ungu pekat.

Tabel ..!Uji &enedict #engaruh pH Terhadap Enzim =iastase

hi*t 4el u!strat &u**er #eru!ahan Carna

1 >111 6milum 1 pH &iru menjadi !iru muda

tidak terdapat endapan

1 12 6milum 1 pH 7 &iru menjadi !iru muda


15/24

tidak tedapat endapan

1 1/11? 6milum 1 pH >

&iru menjadi !iru muda

tidak terdepat endapan

2 1; 6milum 1 pH &iru menjadi !iru muda


2 2? 6milum 1 pH 7&iru menjadi !iru muda


2 7 6milum 1 pH >&iru menjadi !iru muda



Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui adan-a gula

pereduksi. &ahan -ang digunakan dalam praktikum amilum 1 -ang

dimasukkan ke dalam ta!ung -ang !er!eda kemudian dipanaskan selama

2/ menit. etelah itu ditam!ahkan 1 tetes sampel dan ditam!ahkan reagen

!enedict. Carna a5aln-a !ening dan !eru!ah menjadi !iru muda.#ada

perc"!aan -ang telah dilakukan pH tidak !erpengaruh pada peru!ahan 5arna

karena per!edaan pH -ang digunakan pH pH 7 dan pH > peru!ahan

5arna -ang terjadi adalah sama.#eru!ahan 5arna -ang terjadi a5aln-a

sampel !e5arna !ening -ang setelah ditetesi larutan !enedict menjadi 5arna!iru dan setelah dipanaskan!eru!ah menjadi !iru muda.

6ktivitas enzim dipengaruhi "leh pH karena si*at i"nik gugus

kar!"ksil dan gugus amin" mudah dipengaruhi "leh pH ('er-andini

2//).Uji &enedict !ertujuan untuk mengetahui adan-a gula pereduksi

4ar!"hidrat -ang mempun-ai si*at pereduksi (misaln-a gluk"sa) akan

mem!erikan endapan merah !ata dengan larutan !enedict (udarm" 2//7).

Kadi dapat disimpulkan !ah5a perc"!aan ini tidak sesuai dengan te"ri karena

tidak ada per!edaan peru!ahan 5arna meskipun dilakukan perlakuan

pem!erian buffer pH -ang !er!eda selain itu pada hasil 5arna akhir tidak

terdapat endapan merah !ata.

Tabel ."Uji &enedict 0arutan 9luk"sa

hi*t 4el u!strat #eru!ahan CarnaCarna

Endapan

1 > 12 9luk"sa //1 ' &iru menjadi c"klat

kemerahan

'erah !ata


16/24

1 1 9luk"sa //2 ' &iru menjadi hijau t"sca

pekat

'erah !ata

1 1/ 1 9luk"sa // ' &iru menjadi merah

kec"klatan

'erah !ata

1 11 1? 9luk"sa // ' &iru menjadi

merahpekat

'erah !ata

2 1 ? 9luk"sa //1 ' &iru kemerahan menjadi

!iru kemerahan

'erah !ata

2 2 7 9luk"sa //2 ' &iru kemerahan menjadi

merah kec"klatan

'erah !ata

2 ; 9luk"sa // ' &iru kemerahan menjadi

merah kec"klatan pekat

'erah !ata

2 9luk"sa // ' &iru kemerahan menjadi

merah !ata

'erah !ata


#erc"!aan uji !enedict larutan gluk"sa ini !ertujuan untuk mengetahui

adan-a kandungan gula pereduksi. =alam !idang pangan uji !enedict !isa

digunakan untuk pem!uatan nata de coco(Indarti 2/11). #ada perc"!aan uji

!enedict ini gluk"sa -ang memiliki k"nsentrasi //1 '@ //2 '@ // '@ dan

// ' dimasukkan ke dalam masing$masing ta!ung reaksi. 4emudian tiap

ta!ung reaksi -ang telah dimasukkan larutan gluk"sa -ang k"nsentrasin-a

!er!eda ditam!ahkan ml reagen !enedict. etelah itu setiap ta!ung reaksi

ditutup dengan menggunakan alumunium foil dan dimasukkan kedalam

penangas air lalu tunggu sampai terjadi peru!ahan 5arna dan ter!entuk

endapan.

0arutan gluk"sa //1 ' -ang telah ditam!ahkan reagen !enedict dan

telah dipanaskan 5arnan-a !eru!ah menjadi c"klat kemerahan dan

mem!entuk endapan merah !ata. &egitu pula dengan larutan gluk"sa -ang

lainn-a larutan gluk"sa //2 ' ditam!ahkan dengan reagen !enedict

5arnan-a !eru!ah menjadi hijau t"sca pekat dan mem!entuk endapan merah

!ata. 0arutan gluk"sa // ' 5arnan-a !eru!ah menjadi merah kec"klatan

dan larutan gluk"sa // ' 5arnan-a !eru!ah menjadi merah pekat kedua

larutan ini juga mem!entuk endapan merah !ata. #ada larutan gluk"sa dengan

k"nsentrasi //2 ' menghasilkan 5arna -ang !er!eda dengan 5arna larutan

gluk"sa dengan k"nsentrasi //1 '@ // '@ dan // '. aat melakukan


17/24

perc"!aan pada larutan gluk"sa //1 '@ // '@dan // ' reagen !enedict

-ang ditam!ahkan ml sedangkan pada larutan gluk"sa dengan k"nsentrasi

//2 ' reagen !enedict -ang ditam!ahkan le!ih !an-ak -akni

ml.#er!edaan pem!erian reagen !enedict terse!ut terjadi karena kesalahan

dalam melalukan praktikum.

'"n"sakarida dan disakarida (kecuali sukr"sa) !eraksi dengan

pereaksi *ehling ataupun pereaksi !enedict mem!entuk endapan merah !ata

+u2,. #ereaksi !enedict dapat digunakan untuk memeriksa ada tidakn-a gula

dalam urine (#utjaatmaka 2//2).


18/24

'enurut utresna (2//;) pereaksi -ang digunakan untuk menguji

p"lisakarida adalah larutan i"din. 0arutan i"din akan mem!erikan 5arna !iru

jika direaksikan dengan p"lisakarida. Hal ini dapat diuji dengan

menggunakan amilum. +aran-a se!agai !erikut: mula$mula amilum

dilarutkan dalam air sampai ter!entuk suspensi. 4emudian suspensi ini

dipanaskan hingga mem!entuk k"l"id. Kika larutan k"l"id ini ditetesi larutan

i"din akan ter!entuk 5arna !iru. Carna !iru !erasal dari sen-a5a k"mpleks

-ang ter!entuk dari amil"sa (-ang terlarut dalam air) dengan larutan i"din.

#"lisakarida -ang lain akan mem!erikkan 5arna -ang !er!eda pada uji i"din

ini. =ekstrin mem!erikan 5arna merah anggur glik"gen mem!erikan 5arna

merah c"kelat dan selul"sa mem!erikan 5arna c"kelat.

&erdasarkan te"ri -ang di!erikan "leh utresna (2//;) hasil

perc"!aan -ang ditelah dilakukan tern-ata tidak sesuai dengan te"ri. 'enurut

te"ri glik"gen jika ditam!ahkan dengan larutan i"d akan !eru!ah menjadi

merah c"klat dan selul"sa jika ditam!ahkan dengan larutan i"d akan !eru!ah

menjadi 5arna c"kelat. Tetapi hasil perc"!aan menghasilkan 5arna -ang

!er!eda. 0arutan glik"gen !eru!ah menjadi 5arna "range sedangkan larutan

selul"sa !eru!ah menjadi 5arna kuning. Hal terse!ut dapat terjadi karena

kurang sempurnan-a reaksi antara larutan dengan i"dn-a pada saat dilakukan

perc"!aan.

Tabel .##engaruh uhu Terhadap 6ktivitas Enzim =iataseL 6milase

hi*t 4el uhuCaktu

inku!asi#eru!ahan Carna

1 >111 / /&ening menjadi ungu

kec"klatan

1 12 1// 1/ &ening menjadi ungu


19/24

kehitaman

1 1/11? uhu kamar /

&ening menjadi ungu

kec"klatan (le!ih terang)

2 1; / /&ening menjadi ungu

kec"klatan (le!ih terang)

2 2? 1// 1/&ening menjadi ungu

kehitaman

2 7 uhu kamar /&ening menjadi ungu

kec"klatan


Tujuandari praktikum ini adalah untuk mengetahui pengaruh suhu

terhadap kerja enzim. 'asing$masing ta!ung diisi 2 ml enzim amilase dan 2

ml enzim diastase. =imana terdapat perlakuan ta!ung ke$1 diinku!asi

/menit pada /+ ta!ung ke$2 diinku!asi selama 1/menit dengan suhu

1//+ dan ta!ung -ang ke$ diinku!asi selama /menit dengan suhu kamar.

etelah diinku!asi dengan suhu -ang !er!eda$!eda masing$masing ta!ung

ditam!ahkan larutan i"d 1 ml.

&erdasarkan perc"!aan -ang dilakukan pada shift1 ta!ung pertama

5arnan-a !eru!ah dari !ening menjadi ungu kec"klatan. Ta!ung kedua

mengalami peru!ahan 5arna dari !ening menjadi ungu kehitaman.

edangkan pada ta!ung ketiga mengalami peru!ahan 5arna dari !ening

menjadi ungu kec"klatan (le!ih terang). Hasil perc"!aan pada shift2 pada

ta!ung pertama 5arna !eru!ah dari !ening menjadi ungukec"klatan (le!ih

terang) ta!ung kedua !eru!ah dari !ening menjadi ungu kehitaman dan pada

ta!ung -ang ketiga peru!ahan 5arna terjadi dari !ening menjadi ungu

kec"klatan. #er!edaan 5arna -ang terjadi pada suhu dan 5aktu inku!asi -ang

sama dapat dise!a!kan per!edaan keakti*an enzim.

Umumn-a aktivitas enzim a$amilase terjadi pada suhu /$/ D+

dan aktivitasn-a akan mengalami penurunan pada kisaran suhu ?$?/

D+ hal ini dise!a!kan karena enzim mengalami denaturasi aki!atn-a

m"lekul enzim rusak sehingga kehilangan spesi*itasn-a(uarni 2//;).

&erdasar data -ang diper"leh padashift1 kerja "ptimum enzim saat suhun-a

di suhu kamar. edangkan data padashift2 menunjukkan !ah5a kerja enzim

paling "ptimum saat suhu /+. Hal ini menunjukkan !ah5a sesuai dengan


20/24

te"ri hasil -ang diper"leh dari perc"!aan keja enzim menjadi "ptimum pada

kisaran suhu kamar dan /+.

Tabel .$ 6ktivitas Enzim 6milase dari Ekstrak 4acang Hijau dan Tauge

hi*t 4el &ahan#eru!ahan 5arna

/M 2/M

1 >

1/ 11

ml amilum 8 1 ml

ekstrak kacang hijau

4rem kehijauan

menjadi ungu

kehitaman

4rem kehijauan

menjadi ungu

kehitaman

1 12 1

1 1?

ml amilum 8 1 ml

ekstrak tauge

#utih susu

menjadi ungu

kehitaman

#utih susu

menjadi ungu

kehitaman

2 1 2 ml amilum 8 1 ml

ekstrak kacang hijau

8 buffer

&ening menjadi

hitam

kekuningan

&ening menjadi

kuning pekat

ml amilum 8 1 ml

ekstrak tauge 8

buffer

&ening menjadi

ungu pekat

&ening menjadi

kuning !ening

um!er: 0ap"ran ementara

um!er enzim dapat diper"leh dari tanaman he5an dan

mikr""rganisme. Enzim A$amilase !an-ak terdapat pada kecam!ah kacang$

kacangan. #emilihan kacang hijau se!agai sum!er enzim a$amilase karena

dalam !entuk kecam!ah mengandung t"k"*er"l (pr" vitamin E) 7 ppm

*en"lik 11 ppm. #em!uatan ekstrak enzim dari kecam!ah kacang

hijau : &iji kacang hijau dis"rtasi hingga diper"leh !iji !ersih dan utuh

dicuci direndam dengan aBuades selama / menit ditiriskan kemudian

diperam dalam 5adah !erp"ri sampai terjadiperkecam!ahan.Caktu

perkecam!ahan (1 2 dan ? hari). 4ecam!ah di!ersihkan dengan

melepas kulit luarn-a se!agian diam!il se!agai sampel untuk analisis kadar

pr"tein dan air. e!agian ditim!ang kemudian dihancurkan dengan !lender

dimana untuk 1g kecam!ah ditam!ahkan ? m0 !u**er asetat /2 ' pH ?.

4ecam!ah -ang sudah hancur disimpan selama 1/ menit sam!il dik"c"k

kemudian dilakukan pen-aringan dengan kapas. %iltrat -ang dihasilkan

disentri*ugasi selama 2/ menit dengan kecepatan 2///rpm pada suhu ?D+.

upernatan(ekstrak enzim) -ang dihasilkandiukur v"lumen-a dan


21/24

ditempatkan ke dalam 5adah steril untuk dianalisis antara lain@ aktivitas

enzim A$amilase pH dan pr"tein terlarut (uarni 2//;).

#erc"!aan ini menggunakan !ahan uji ekstrak kacang hijau dan

ekstrak tauge -ang !ertujuan untuk mempermudah !erlangsungn-a reaksi

enzimatik. &erdasarkan hasil analisa dari ekstrak kacang hijau se!elum

dilakukan inku!asi terjadi peru!ahan 5arna dari 5arna krem kehijauan

!eru!ah 5arna menjadi ungu kehitaman. etelah di inku!asi pada suhu /"+

selama 2/ menit terjadi peru!ahan 5arna dari krem kehijauan !eru!ah

menjadi 5arna ungu kehitaman. =engan ekstrak tauge se!elum dilakukan

inku!asi 5arnan-a putih susu setelah ditetesi larutan i"d 5arna !eru!ah

menjadi ungu kehitaman dan setelah diinku!asi dan ditetesi larutan i"d 5arna

dari putih susu menjadi ungu kehitaman. Uji i"din digunakan untuk

menunjukkan adan-a p"lisakarida. &ila ke dalam !ahan -ang mengandung

p"lisakarida di!eri larutan i"dine mem!erikan 5arna !iru !erarti !ahan

terse!ut mengandung amilum (amil"sa). 6mil"pektin akan mem!erikan

5arna merah ungu glik"gen dan dekstrin akan mem!erikan 5arna merah

c"klat (udarm" 2//7). Kadi data -ang diper"leh pada shift1 menunjukkan

!ah5a masih adan-a kandungan amilum padahal sudah dilakukan inku!asi

padahal seharusn-a saat setelah diinku!asi sudah tidak ada kandungan

amilum. #ada shift 2 pada kedua sampel -aitu ekstrak tauge dan ekstrak

kacang hijau setelah diinku!asi dan diteteskan larutan i"d 5arnan-a menjadi

kuning. 6da per!edaan hasil peru!ahan 5arna pada keduashift per!edaan ini

dise!a!kan "leh pem!erian bufferpada shi*t 2 sehingga sesuai dengan te"ri

-aitu menjadi 5arna kuning. Hal ini menunjukkan !ah5a sudah tidak adakandungan amilum. Enzim dipengaruhi "leh *akt"r lingkungann-a seperti

temperatur keasaman (pH) k"nsentrasi su!strat k"nsentrasi enzim dan

aktivat"r (&ahri 2/12).

E. %esim&ulan


22/24

=ari praktikum 6cara 1 Enzim dapat diper"leh !e!erapa kesimpulan

se!agai !erikut :

1. 4erja enzim dipengaruhi !e!erapa *akt"r -aitu suhu pH k"nsentrasi

su!strat k"nsentrasi enzim dan ke!eradaan inhi!it"r.

2.


23/24

&ahri -ai*ul. '"h. 'irzan. dan '"h. Hasan. 2/12. &arakteristik Enzim

Amilase dari &ecambah %i-i .agung &etan /0ea mays certain L11 Kurnal

3atural cience N"l.1 3".1.

E-ster +l-de. 1?. !he 3ptimum pH for 4iastase of "alt Acti$ity1The ,hi"

K"urnal "* cience N"l. ? 3". ?.

9irindra 6isjah. 1/.%iokimia #. 9ramedia. Kakarta.

9"mes usana. etall. 2/1/.Physicochemical "icrobiological and Antimicrobial

Properties of 'ommercial Honeys from Portugal. +I', F Esc"la uperi"r

6grOria Institut" #"litPcnic" de &raganca 6partad" 11;2.

Indarti =5i. dan 6sna5ati. 2/11. &arakterisasi Film ,ata 4e 'oco5%enedict

Secara Adsorpsi +ntuk Sensor 6lukosa 4alam +rine1Kurnal Ilmu =asar

N"l. 12 3". 2.

0ehninger 6l!ert. 1>21 4asar5dasar %iokimia .ilid 7. Erlangga. Kakarta.

'ahajan


24/24

acara 1. fix.docx

Documents