acara vii isolasi bakteri

7/24/2019 Acara VII Isolasi Bakteri

1/23

I. PENDAHULUAN

A. JudulIsolasi Bakteri

B. Latar Belakang

Bakteri yang hidup tersebar luas di atmosfer jarang tumbuh sebagai

biakan murni. Isolasi bakteri merupakan suatu cara memindahkan bakteri dari

lingkungannya di alam dan menumbuhkan sebagai biakan murni dalam

medium buatan. Biakan murni adalah biakan mikroba yang terdiri dari satu

jenis mikroba. Metode isolasi bakteri terdiri dari 3 prinsip, yaitu metode

streak plate, pour plate, dan spread plate. Masing-masing metode tersebut

memiliki fungsi utama dan teknik yang berbeda.

Inokulasi bakteri merupakan proses mengambil satu bakteri saja dari

medium isolasi bakteri yang telah dibiakkan secara murni. Pada percobaan

isolasi bakteri ini akan dilakukan isolasi bakteri udara dan tanah serta isolasi

bakteri Escherichia colidanBacillus subtilissecara streak plate, pour plate,

dan spread plate. Pertumbuhan dan sifat bakteri dapat diamati melalui ketiga

metode tersebut.

C. Tujuan

1. Mempelajari cara mengisolasi bakteri secara streak plate, pour plate, dan

spread plate.

. Mengamati pertumbuhan, kontaminasi, dan sifat bakteriEscherichia coli

danBacillus subtilisyang diisolasi.

3. Mengamati pertumbuhan, kontaminasi, dan sifat bakteri udara dan tanah

yang diisolasi.


2/23

II. TINJAUAN PUSTAKA

Bakteri adalah domain yang terdiri dari makhluk hidup yang tidak memiliki

membran inti !prokariota". Bakteri memiliki ciri-ciri antara lain tidak memiliki

membran inti, tidak memiliki organel bemembran, memiliki dinding sel

peptidoglikan dan materi asam nukleatnya berupa plasmid !Postleth#ait dan

$opson, %%&".

Bakteri memiliki beragam 'ariasi bentuk, seperti coccus, basil, dan spiral.

Bakteri dapat hidup soliter maupun berkoloni dan berkembang biak dengan cara

membelah diri. Bakteri memiliki habitat yang ber'ariasi, dari air, tanah, udara,

hingga dalam tubuh he#an, misalnya dalam usus manusia. Bakteri ada yang dapat

hidup secara anaerob murni dan akan mati dengan adanya oksigen, ada yang

bersifat aerob dan memerlukan oksigen untuk metabolismenya, dan ada yang

bersifar aerob fakultatif yaitu dapat hidup pada kondisi anaerob, tapi bila ada

oksigen, metabolismenya bersifat aerob !Betsy dan (eogh, %%)".

*daptasi merupakan suatu proses menyesuaikan diri suatu isolat bakteri ke

dalam sautu medium baru agar isolat bakteri tersebut mampu bertahan hidup.

Perubahan lingkungan dapat mengakibatkan perubahan sifat morfologi dan

fisiologi mikroba sehingga dapat mempengaruhi pertumbuhan dan 'iabilitas

mikroba dalam medium baru. Perbedaan tipe medium dari medium padat ke

medium cair juga dapat mempengaruhi pertumbuhan dan 'iabilitas bakteri,

meskipun medium yang digunakan adalah sama. Pada medium padat,

pertumbuhan bakteri berupa pertumbuhan yang melekat pada permukaan medium,

sedangkan pada medium cair tipe pertumbuhannya akan menyerupai suspensi

larut. Bakteri dalam keadaan tersuspensi akan tumbuh merata di semua bagian

medium, baik yang di permukaan, di kolom air, bahkan di dasar !$idayah dan

+ho'itri, %1".

Isolasi bakteri adalah proses mengambil bakteri dari medium atau

lingkungan asalnya dan menumbuhkannya di medium buatan sehingga diperoleh

biakan yang murni. Bakteri dipindahkan dari satu tempat ke tempat lainnya harus

menggunakan prosedur aseptik. *septik berarti bebas dari sepsis, yaitu kondisi


3/23

terkontaminasi karena mikroorganisme lain. eknik aseptik ini sangat penting bila

bekerja dengan bakteri. Beberapa alat yang digunakan untuk menjalankan

prosedur ini adalah bunsen dan laminar air flow. Bila tidak dijalankan dengan

tepat, ada kemungkinan kontaminasi oleh miroorganisme lain sehingga akan

mengganggu hasil yang diharapkan. eknik aseptik juga melindungi laboran dari

kontaminasi bakteri !+ingleton dan +ainsbury, %%&".

*da beberapa metode untuk menginokulasi bakteri sesuai dengan jenis

medium tujuannya. Pada medium agar tegak, dilakukan metode tusuk

menggunakan jarum ose. Pada medium agar miring, dilakukan metode gores

dengan menggunakan loopose. Pada medium petridisk, dapat digunakan metode

streak plate!metode gores",pour plate!metode tuang" atauspread plate!metode

sebar" +etelah inokulasi, dilakukan proses inkubasi, yaitu menyimpan medium

pada alat atau kontainer ada temperatur tertentu dan periode tertentu, sehingga

tercipta lingkungan yang menyediakan kondisi cocok untuk pertumbuhan bakteri.

!$arley dan Presscot, %%".

Menurut ay !1/", ada beberapa metode yang digunakan dalam isolasi

bakteri, yaitu 0

1. Metode pour plate

Metode ini dilakukan dengan menginokulasikan suspensi bahan yang

mengandung bakteri dengan bantuan mikropipet untuk disemprotkan ke dalam

medium agar yang sedang mencair dan menuangkannya pada petridish. Pada

metode ini, 'olume suspensi yang digunakan lebih dari %,1 ml, biasanya 1 ml.

+uspensi bakteri tersebut diambil dengan mikropipet dan disemprotkan ke

dalam petridish yang berisi medium. +etelah diinkubasi akan terlihat kolonibakteri yang bermacam-macam, kemudian satu koloni dipilih dan diambil

dengan ose, kemudian dilanjutkan dengan pengecatan gram.

. Metode streak plate

+treak plate yaitu suatu cara pengisolasian bakteri yang cara inokulasinya

dengan menggoreskan suspensi bahan yang mengandung bakteri pada

permukaan medium dengan ka#at ose dan digoreskan sesuai dengan petridish.

(ultur media untuk menumbuhkan atau mengisolasikan bakteri dengan metode

streak merupakan suatu teknik untuk memisahkan sel bakteri secara indi'idual.


4/23

+etelah inkubasi, maka pada bekas goresan akan tumbuh koloni-koloni terpisah

yang mungkin berasal dari satu sel bakteri.

3. Metode spread plate

+pread plate adalah metode isolasi bakteri dengan cara menginokulasikan

suspensi bahan yang mengandung bakteri ke atas medium agar lalu diratakan

dengan menggunakan trigalski. +etelah diinokulasikan akan terlihat koloni-

koloni bakteri yang tumbuh tersebar dipermukaan medium agar sehingga dapat

diisolasi lebih lanjut untuk mendapatkan biakan murni.

Memindahkan bakteri dari medium lama kedalam medium yang baru

diperlukan ketelitian dan pengsterilan alat-alat yang digunakan, supaya dapatdihindari terjadinya kontaminasi. Pada pemindahan bakteri dica#an petri setelah

agar baru, maka ca#an petri tersebut harus dibalik, hal ini berfungsi untuk

menghindari adanya tetesan air yang mungkin melekat pada dinding tutup ca#an

petri !#ijoseputro, 12".

+ejumlah kecil bakteri ini didapat dari bermacam-macam tempat tergantung

dari tujuan inokulasi. alam kajian mikrobiologi yang berhubungan dengan

sumber bakteri adalah mikrobia tanah, air, makanan dan udara !alaro, 1".

Pemahaman mengenai bakteri yang diinokulasikan merupakan hal yang #ajib.

Inokulasi bakteri termasuk pula di dalamnya adalah prinsip untuk membuat

lingkungan medium menjadi semirip mungkin dengan medium aslinya !+uharni

dkk., 1". Menurut +oetarto dkk. !%1%", pemahaman ini meliputi0

1. +ifat dan jenis mikrobia yang akan diisolasi

. empat hidup4atau asal mikrobia tersebut

3. Medium yang sesuai untuk pertumbuhan

/. 5ara inkubasi mikrobia

). 5ara menanam mikrobia

Menurut Pelc6ar dan 5han !12&", bakteri dapat dibagi menjadi / kelompok

dalam hal respon terhadap oksigen bebas yaitu0

1. *erob0 memerlukan oksigen bebas untuk hidupnya

. *naerob0 organisme yang tidak tumbuh bahkan mati bila ada oksigen

3. *naerob fakultatif0 tumbuh pada keadaan anaerob dan aerob

/. Mikro6erofilik0 tumbuh terbaik apabila ada sedikit oksigen

Bakteri mudah ditemukan di air, udara dan tanah. Mereka hidup dalam suatu

koloni, baik bersimbiose, bebas ataupun parasit pada makhluk hidup. 7umlah


5/23

bakteri di alam sangat melimpah dengan keragaman yang sangat tinggi. 8ntuk

mempelajari kehidupan dan keragaman bakteri, diperlukan suatu usaha untuk

mengembakbiakkan mereka dalam skala laboratorium. Pengembangbiakan ini

dilakukan dengan menumbuhkan bakteri dari sumber isolat, seperti tanah, udara,

sisa makanan, dan lain-lain, dalam media yang mengandung nutrisi. Media

pertumbuhan bakteri sangat beragam, mulai dari media selektif, media penyubur,

media diferensial, dll. Masing-masing media memiliki fungsi berbeda dan

digunakan tergantung tujuan dari praktikan. alam mempelajari sifat

pertumbuhan dari masing-masing jenis mikroorganisme, maka mikroorganisme

tersebut harus dipisahkan satu dengan yang lainnya, sehingga didapatkan kultur

murni yang disebut isolat. (ultur murni merupakan suatu biakan yang terdiri dari

sel-sel dari satu species atau satu galur mikroorganisme. (ultur murni diperoleh

dengan cara isolasi menggunakan metode tuang maupun gores !Pelc6ar dan 5han,

12&".

anah terbentuk secara alamiah sebagai hasil dari kombinasi proses fisik,

kimia, dan biologi. 9alaupun di tanah yang keras dan kering, mikroba bersifat

dorman, yang akan tumbuh ketika ada kelembapan. +ebagian besar mikroba

tumbuh dan berkembang biak di permukaan tanah, bahkan pada segumpal tanah

dapat tumbuh beraneka ragam mikroorganisme. Berbagai macam mikroorganisme

atau bakteri tumbuh dengan baik di tanah. (ompleksnya nutrisi untuk

pertumbuhan bakteri yang terkandung dalam tanah menyebabkan bakteri yang

tumbuh sangat beragam. engan demikian banyak bakteri yang dapat tumbuh di

media tanah secara alami, yang akan sulit diisolasi langsung yang kaya nutrisi

seperti media :* yang biasa digunakan di lab !Panagan, %11".

8dara merupakan suatu komponen yang paling utama untuk

mempertahankan kehidupan. (arena metabolisme dalam tubuh suatu makhluk

hidup tidak mungkin bisa terjadi tanpa oksigen dalam udara. (elompok

mikroorganisme yang paling banyak ditemukan sebagai jasad hidup yang tidak

diharapkan kehadirannya melalui udara, umumnya disebut jasad kontaminan

!;ad6kur dkk., %11".


6/23

Menurut 7utono !12%", ada beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam

mengisolasi bakteri, yaitu 0

1. +ifat-sifat spesies mikrobia yang akan diisolasi

. empat hidup atau asal mikrobia tersebut

3. Medium untuk pertumbuhannya yang sesuai

/. 5ara menanam mikrobia tersebut

). 5ara inkubasi mikrobia tersebut

&. 5ara menguji bah#a mikrobia yang diisolasi telah berupa biakan murni dan

sesuai dengan yang dimaksud

. 5ara memelihara agar mikrobia yang telah diisolasi tetap merupakan biakan

murni

E. coli adalah mikrobia yang paling umum digunakan dalam percobaan

mikrobiologi dan :*nya telah dipetakan. Bakteri ini umum ditemukan hidup

dalam usus besar he#an dan manusia, jarang bersifat pathogen, namun beberapa

strain dapat mengakibatkan diare. Bacillus subtilis adalah bakteri yang umum

ditemukan di tanah. B. subtilis tidak tergolong bakteri pathogen bagi manusia.

Bakteri ini memiliki flagella yang massif sehingga dapat bergerak cepat untuk

ukuran bakteri !+ingleton dan +ainsbury %%&".


7/23

III. METODE PERCOBAAN

A. Alat dan Baan1. *lat

a. 7arum ose

b. rigalski

c. abung reaksi

d.


8/23

n.

. Bahan

a. *kuadesb. *lkohol %>

c. anah

d. BakteriEscherichia coli

e. BakteriBacillus subtilis

!.

B. Cara Kerja

1. +treak plate method

p. Biakan Escherichia coli dan Bacillus subtilis dalam

medium cair diambil dengan jarum ose secara aseptis, kemudian

digoreskan pada medium padat dalam petridish. ?oresan dibuat 3

kuadaran, yaitu ranggang, agak renggang, dan rapat. +etelah itu, diinkubasi

selama /2 jam, kemudian pertumbuhan bakteri hasil goresan diamati.

. Pour plate method

@. Biakan bakteriEscherichia colidanBacillus subtilisdalam

medium cair !broth" diambil sebanyak 1 ml dengan mikropipet, kemudian

dimasukkan dalam petridish kosong. +etelah itu, medium ditambahkan dan

diratakan dengan cara digoyang bentuk angka 2. +elanjutnya, diinkubasi

selama /2 jam dan pertumbuhan bakteri diamati.

3. +pread plate method

r. Biakan bakteri Escherichia coli dan Bacillus subtilis dalam

medium cair !broth" diambil sebanyak 1%% Al dengan mikropipet,

kemudian dimasukkan dalam petridish berisi medium agar padat dan

diratakan searah dengan trigalski. +etelah itu, diinkubasi selama /2 jam

dan pertumbuhan bakteri diamati.

/. Isolasi bakteri udara

s.Petridish berisi medium agar padat dibiarkan terbuka selama )-1%menit, kemudian petridish ditutup. +etelah itu, petridish diinkubasi selama

/2 jam dan pertumbuhan bakteri diamati.

). Isolasi bakteri tanah

t. +ampel tanah sebanyak 1 gram disuspensikan dalam 1%% ml

akuades, kemudian dibuat seri pengenceran dari 1% -1 sampai 1%-). $asil

pengenceran tersebut diambil masing-masing 1 ml, kemudian dimasukkan

dalam petridish kosong yang berbeda-beda. Medium dituangkan pada tiap


9/23

petridish, kemudian diratakan dengan bentuk angka 2 !cara pour plate".

+etelah itu, diinkubasi selama /2 jam dan pertumbuhan bakteri diamati.

u.


10/23

I". HASIL DAN PEMBAHASAN

'.

#. Pada praktikum isolasi bakteri dilakukan beberapa macam percobaan

isolasi bakteri, yaitu isolasi bakteri udara dan bakteri tanah dengan seri

pengenceran 1%-1 sampai 1%-), isolasi bakteri =scherichia coli dan

Bacillus subtilis dengan teknik isolasi spread plate, pour plate, dan

streak plate. $asil percobaan isolasi bakteri dapat dilihat pada tabel 1.

. abel 1. $asil Pengamatan Bakteri pada Berbagai eknik Isolasi

y. 6. ekn

ik

aa. Bakteri ab. (etera

ngan

ac. ad. Isola

si

bakt

eri

udar

a

ae.

af.

ag.

ah.

ai.

aj.

ak.

al.

am.

an.

ao.

ap.

a@.

ar.

1. idak rata

. *da

kontaminan

3. Bakteri aerob

as.

at. au. Isola

si

bakt

eri

tanah

peng

ecera

n 1%-

1

a'.

a#.

a.

ay.

a6.ba.

bb.

bc.

bd.

be.

bf.

bg.

bh.

bi.

bj. 1.

bk. .

bl.

bm. 3.

bn.


11/23


12/23

pen

gen

cer

an

1%-

/

do.

dp.

d@.

dr.

ds.

dt.

du.

d'.

d#.ed.

ee. ef. Isol

asi

bak

teri

tan

ah

pen

gen

cer

an

1%-)

eg.

eh.

ei.

ej.

ek.

el.

em.

en.

eo.

ep.

[email protected].

es.

et.

eu. 1.

e'. .

e#.

e. 3.

ey.

e6.

fa. fb. +pr

ead

plat

e

fc.

fd.

fe.

ff.

fg.

fh.

fi.

fj.

fk.

fl.

fm.

fn.

fo.

fp.

fq. Escherichia coli

1.


13/23

fv.

fw.

fx.

fy.

fz.

ga.

gb.

gc.

gd.

ge.

gf.

gg.gh.

gi. Bacillus subtilis

. idak ada

kontaminan

3. Bakteri aerobgj.

gk.

gl. gm. P

our

plat

e

gn.

go.

gp.

gq.

gr.

gs.gt.

gu.

gv.

gw.

gx.

gy.

gz.

ha.

hb. Escherichia coli

1.


14/23

hp.

hq.

hr.

hs.

ht. Bacillus subtilis

h'. h#.+tr

eak

plat

e

hx.

hy.

hz.

ia.

ib.

ic.

id.ie.

if.

ig.

ih.

ii.

ij.

ik.

il. Escherichia coli

1. idak rata

. idak ada

kontaminan

3. Bakteri aerob

im.

in.

io. ip. iq.

ir.

is.

it.

iu.

iv.

iw.

ix.

iy.

iz.

ja.

jb.

jc.

jd.

je. Bacillus subtilis

1.


15/23

ji. Isolasi bakteri merupakan suatu cara untuk memindahkan

bakteri dari lingkungannya di alam dan menumbuhkan sebagai biakan

murni dalam medium buatan. Isolasi bakteri penting dilakukan karena

berfungsi untuk memperoleh biakan murni dari suatu biakan campuran

sehingga dapat diketahui jenis mikroba melalui proses inokulasi dan

identifikasi. Biakan murni merupakan biakan mikroba yang terdiri dari

satu jenis mikroba. Isolasi bakteri dapat dilakukan dengan 3 cara, yaitu

streak plate, pour plate, dan spread plate. (etiga metode cara isolasi

bakteri tersebut memiliki teknik dan fungsi utama yang berbeda-beda.

+ebelum proses isolasi tersebut, dilakukan proses inokulasi bakteri terlebih

dahulu. Inokulasi bakteri merupakan proses mengambil satu bakteri saja

dari medium isolasi bakteri yang telah dibiakkan secara murni.

jj. Metode streak plate merupakan teknik isolasi mikroba

dengan cara menginokulasikan kultur mikroba di permukaan media agar

yang telah memadat dalam petridish secara goresan. Metode streak plate

berfungsi untuk melihat morfologi bakteri dan kultur bakteri tidak

diencerkan. Metode ini dilakukan dengan cara membagi medium agar

menjadi 3 kuadran, dimana pada masing-masing kuadran, digores dengan

ose yang telah mengandung bakteri dengan arah 6ig 6ag dari satu kuadran

ke kuadran lainnya melalui satu kali inokulasi bakteri.

jk. Pada kuadran pertama, penggoresan dilakukan rapat-rapat

secara hori6ontal dengan ukuran kuadaran setengah bidang petridish.

(uadaran kedua, penggoresan dilakukan agak renggang secara 'ertikal

dengan ukuran seperempat bidang petridish. Pada kuadran ketiga,

penggoresan dilakukan renggang-renggang secara 'ertikal dengan ukuran

seperempat bidang petridish. +emakin lama gerakan penggoresan, maka

suspensi bakteri yang melekat pada ose semakin berkurang sehingga pada

goresan terakhir akan meninggalkan koloni bakteri tunggal yang terpisah

satu dengan yang lainnya. +ebagian besar koloni bakteri yang bukan

merupakan koloni tunggal akan terdapat pada kuadran pertama yaitu

goresan yang paling tebal, sedangkan pada kuadran ketiga akan terbentuk


16/23

koloni bakteri tunggal, dimana ose yang digunakan mengandung bakteri

paling sedikit dan goresan yang dihasilkan paling tipis.

jl. (elebihan metode streak plate yaitu dapat menghembat

#aktu dan bahan karena jika metode ini dilakukan dengan baik, maka

goresan ose akan menghasilkan koloni bakteri tunggal yang diinginkandan

pertumbuhan bakteri lebih teratur sehingga lebih mudah untuk diamati.

(elemahan metode streak plate yaitu pengerjaannya rumit dan

memerlukan keterampilan untuk melalukan proses penggoresan sehingga

diperoleh hasil pengamatan yang baik dan akurat. Metode ini juga hanya

bisa digunakan untuk pengamatan bakteri yang bersifat aerob, sedangkan

pengamatan bakteri anaerob tidak dapat dilakukan dengan metode ini

karena penggoresan bakteri dilakukan di permukaan medium agar padat.

jm. Metode pour plate merupakan teknik isolasi mikroba

dengan cara menabur atau menuang suspensi bakteri ke petridish yang

masih kosong, kemudian medium dituangkan dan diratakan dengan cara

digoyang membentuk angka 2 agar suspensi bakteri tercampur merata

dengan mediumnya. Metode pour plate berfungsi untuk melihat suatu

bakteri bersifat aerob atau anaerob dan kultur bakteri diencerkan.

jn. (elebihan metode pour plate yaitu pengerjaannya lebih

mudah dan sederhana dibandingkan dengan metode streak plate, diperoleh

berbagai jenis koloni bakteri dan lebih mudah diamati, serta tidak ada

persaingan antara bakteri untuk memperoleh oksigen karena bakteri

terleteak menyebar. Melalui metode ini pula, sel-sel bakteri dapat

dipisahkan satu dengan yang lainnya sehingga sel-sel tersebut dapat

tumbuh menjadi koloni-koloni yang terpisah. (elemahan metode pour

plate yaitu boros bahan dan #aktu, mudah terjadi kontaminasi, koloni

yang terbentuk terkadang masih berkumpul jadi satu atau persebaran

koloni bakteri tidak merata sehingga diperlukan kecermatan khusus dalam

isolasi bakteri menggunakan metode ini. Pada metode ini pula, diperlukan

nutrien yang lebih banyak untuk menumbuhkan bakteri.

jo. Metode spread plate merupakan teknik isolasi mikroba

dengan cara menginokulasikan kultur mikroba di permukaan media agar


17/23

yang telah memadat dan diratakan dengan trigalski secara searah. ;ungsi

trigalski adalah untuk menyebarkan suspensi bakteri secara merata dalam

medium pada petridish.. Metode spread plate berfungsi untuk melihat 6ona

hambat suatu bakteri, yaitu suatu 6ona dalam medium pada petridish yang

tidak ditumbuhi bakteri dan kultur bakteri diencerkan.

jp. (elebihan metode spread plate yaitu koloni bakteri dapat

tumbuh dengan baik karena penyebarannya merata di permukaan medium

agar padat dan bakteri memperoleh nutrien yang cukup. Pengerjaan

metode ini juga sederhana dan mudah dilakukakan. (elemahan metode

spread plate yaitu koloni bakteri sulit diisolasi karena koloni bakteri saling

menumpuk dan tidak terpisah secara merata. Metode ini juga hanya dapat

untuk menumbuhkan bakteri aerob, sedangkan bakteri anaerob tidak dapat

ditumbuhkan melalui metode ini.

j@. Pada percobaan isolasi bakteri, dilakukan isolasi bakteri

udara dan tanah. Isolasi bakteri udara dilakukan dengan cara medium agar

padat dibiarkan terbuka selama )-1% menit agar diperoleh bakteri yang

tersebar di udara, kemudian ditutup. Isolasi ini betujuan untuk melihat

berbagai macam bakteri udara. Isolasi bakteri tanah dilakukan dengan cara

melarutkan 1 gram tanah dalam 1%% ml akuades, kemudian dibuat seri

pengenceran dari 1%-1sampai 1%-). Pengenceran perlu dilakukan agar dapat

diperoleh pertumbuhan bakteri yang lebih jelas karena semakin banyak

seri pengenceran, maka populasi bakteri akan lebih sedikit sehingga

pertumbuhan bakteri dapat lebih mudah diamati. +etelah seri pengenceran

selesai dibuat, kemudian isolasi bakteri tanah dilakukan dengan metode

pour plate.

jr. ahap akhir pada proses isolasi bakteri, baik secara metode

streak plate, pour plate, maupun spread plate, serta pada isolasi bakteri

udara dan tanah adalah proses inkubasi selama /2 jam dengan suhu 3o

sebelum dilakukan pengamatan pertumbuhan bakteri. Proses inkubasi

tersebut bertujuan agar diperoleh pertumbuhan bakteri yang optimal.

+ebelum diinkubasi, petridish dibungkus terlebih dahulu dengan kertas

payung dan diletakkan secara terbalik, dimana bagian tutup petridish


18/23

berada di ba#ah dan medium isolasi bakteri berada di atas untuk

menghindari tetesan air pada permukaan agar dari hasil kondensasi karena

hal ini dapat menyebabkan terhambatnya pertumbuhan dan penyebaran

bakteri. Isolasi bakteri harus dilakukan secara aseptis untuk menghindari

masuknya kontaminan pada medium dalam petridish sehingga

pengerjaannya dilakukan di ruang laminair flo#.

js. Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan, diperoleh

hasil pengamatan isolasi bakteri udara dan bakteri tanah seri pengenceran

1%-, pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Bacillus subtilis pada

teknik isolasi secara spread plate, pour plate, dan strak plate. $al-hal yang

diamati pada hasil isolasi bakteri antara lain rata atau tidaknya

pertumbuhan bakteri, adanya kontaminan atau tidak pada hasil isolasi, dan

sifat bakteri yaitu aerob, aerob fakultatif, anaerob fakultatif, atau anaerob.

jt. Pertumbuhan bakteri tanah tidak rata dan tumbuh

kontaminan yaitu kapang, dimana kapang merupakan jamur benang dan

bukan bekteri, maka kapang tersbut merupakan kontaminan yang terdapat

di udara pula. Bakteri udara yang diperoleh terdiri dari berbagai macam

bakteri, hal ini dapat dilihat dari ukuran dan #arna bakteri yang berbeda-

beda. Bakteri udara yang diperoleh bersifat aerob karena berada di

permukaan atas medium.

ju. Isolasi bakteri tanah yang diamati adalah pada bakteri tanah

seri pengenceran 1%-. Pertumbuhan bakteri tanah rata dan tidak tumbuh

kontaminan. Bakteri tanah yang diperoleh terdiri dari berbagai macam

bakteri dilihat dari ukuran dan #arna bakteri yang berbeda-beda. +ifat

bakteri tanah yang diperoleh tidak dapat diidentifikasi secara akurat

apakah termasuk aerob atau anaerob karena medium agar padat dalam

petridish tidak tebal seperti pada medium dalam tabung reaksi.

j'. Pada teknik isolasi secara spread plate, E. colitumbuh rata

dan bersifat aerob serta tumbuh kontaminan, hal ini dikarenakan

kurangnya aseptis saat pengerjaan isolasi bakteri ini. Pada hasil percobaan,

dapat dilihat bah#a hasil spreader menggunakan trigalski tidak rata karena

kurangnya ketelitian atau keterampilan praktikan dalam menggunakan


19/23

trigalski saat melakukan spreader. Pada teknik isolasi ini pula,B. subtilis

tumbuh rata dan bersifat aerob, namun tidak tumbuh kontaminan, hal ini

dapat disimpulkan bah#a proses pengerjaannya dilakukan secara aseptis.

j#. Pada teknik isolasi secara pour plate, =. coli tumbuh rata

dan bersifat aerob serta anaerob serta tidak tumbuh kontaminan. Pada

teknik isolasi ini pula, B. subtilis tumbuh rata dan bersifat anaerob serta

tidak tumbuh kontaminan. (ontaminan yang tidak tumbuh pada kedua

isolasi bakteri ini menunjukkan bah#a pengerjaan isolasi bakteri

dilakukan secara aseptis.

j. Pada teknik isolasi secara streak plate, E. colitumbuh tidakrata, hal ini dapat dilihat dari adanya bakteri yang tidak tumbuh pada hasil

goresan di medium agar padat. $al ini dikarenakan kurangnya ketelitian

atau keterampilan praktikan saat melakukan goresan di medium. +ifat

bakteri E. coliadalah aerob dan tidak tumbuh kontaminan. Pada teknik

isolasi ini pula, B. subtilis tumbuh rata dan bersifat aerob serta tidak

tumbuh kontaminan. (ontaminan yang tidak tumbuh pada kedua isolasi

bakteri ini menunjukkan bah#a pengerjaan isolasi bakteri dilakukan secara

aseptis.

jy. Berdasarkan hasil pengamatan, sifat bakteri, baik pada

teknik isolasi spread plate, pour plate, maupun streak plate tidak dapat

ditentukan secara akurat karena sulitnya diamati persebaran bakteri berada

di bagian atas, ba#ah, atau tengah permukaan medium. $al ini

dikarenakan medium dalam petridish tidak tebal seperti medium dalam

tabung reaksi. Pertumbuhan rata pada bakteri menunjukkan bah#a bakteri

tumbuh secara merata pada hasil teknik isolasi yang dilakukan, misalnya

pada hasil goresan pada streak plate dan hasil perataan dengan trigalski

pada spread plate. (ontaminan yang tumbuh pada pertumbuhan bakteri

merupakan mikroorganisme selain bakteri karena mikroorganisme yang

diamati pada percobaan ini adalah bakteri. (ontaminan yang tumbuh

misalnya jamur benang !kapang" atau khamir, dimana kedua

mikroorganisme tersebut adalah golongan fungi.

j6.

ka.


20/23

k#.


21/23

". KESIMPULAN

k$.

kd. Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bah#a0

1. Metode streak plate dilakukan dengan cara menginokulasikan kultur mikroba

di permukaan media agar yang telah memadat dalam petridish secara goresan.

. Metode pour plate dilakukan dengan cara menabur atau menuang suspensi

bakteri ke petridish yang masih kosong, kemudian medium dituangkan dan

diratakan dengan cara digoyang membentuk angka 2 agar suspensi bakteri

tercampur merata dengan mediumnya.

3. Metode spread plate dilakukan dengan cara menginokulasikan kultur mikroba

di permukaan media agar yang telah memadat dan diratakan dengan trigalski

secara searah.

/. $asil pengamatan pertumbuhan, kontaminasi, dan sifat bakteri pada bakteri

Escherichia coliadalah rata, ada kontaminan, dan aerob secara spread plate,

rata, tidak ada kontaminan, dan aerob, anaerob secara pour plate, serta tidak

rata, tidak ada kontaminan, dan aerob secara streak plate.

). $asil pengamatan pertumbuhan, kontaminasi, dan sifat bakteri pada bakteri

Bacillus subtilisadalah rata, tidak ada kontaminan, dan aerob secara spread

plate, rata, tidak ada kontaminan, dan anaerob secara pour plate, serta rata,

tidak ada kontaminan, dan aerob secara streak plate.

&. $asil pengamatan pertumbuhan, kontaminasi, dan sifat bakteri pada bakteri

udara adalah tidak rata, ada kontaminan berupa kapang, dan termasuk bakteri

aerob.

. $asil pengamatan pertumbuhan, kontaminasi, dan sifat bakteri pada bakteri

udara adalah rata, tidak ada kontaminan, dan termasuk bakteri anaerob.

2.


22/23

ke. DA%TAR PUSTAKA

k&.

kg. Betsy, om dan (eogh, 7im. %%). Microbiology emystifed. Mc?ra#-$ill

Publisher, 8+*.

kh. #idjoseputro, . 12.asar!asar Mikrobiologi.jambatan, Malang.

ki. ;ad6kur, *., +urtiningsih, ., risnadi. %11. *nalisis (ualitas 8dara


23/23

ku. LAMPIRAN

k'.

k(.

k.

ky.

k6.

la.

lb.

?ambar . Isolasi Bakteri anah

Pengenceran 1%-?ambar 1. Isolasi Bakteri 8dara

?ambar 3. Isolasi BakteriE. -oli

secara +pread Plate

?ambar 3. Isolasi BakteriE. -oli

secara +treak Plate

acara vii isolasi bakteri

Documents