laporan tetap mikrobiologi umum kelompok i

7/22/2019 Laporan Tetap Mikrobiologi Umum Kelompok I

1/98

LAPORAN TETAP

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI UMUM

OLEH :

KELOMPOK I

Oleh :

Kelompok 1

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN

FAKULTAS TEKNOLOGI PANGAN DAN AGROINDUSTRI

UNIVERSITAS MATARANMATARAM

2012


2/98

2


3/98

3

KATA PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan kepada Tuhan, karena atas berkat dan rahmat-Nya

laporan tetap Mikrobiologi Umum ini dapat terselesaikan sesuai dengan waktu yang

telah ditentukan. Laporan ini disusun sebagai salah satu syarat mata kuliah

Mikrobiologi Umum di Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas

Mataram.

Dalam kesempatan ini tidak lupa kami haturkan terima kasih kepada dosen,

koordinator praktikum, dan para Co. Assisten yang telah banyak membantu serta

membimbing kami baik dalam praktikum maupun dalam penyusunan laporan ini.

Kami menyadari sepenuhnya bahwa laporan ini masih banyak kekurangannya baik

dari segi isi, penampilan maupun teknik pengetikannya. Oleh karena itu kami

mengharapkan kritik dan saran-saran yang sifatnya membangun demi perbaikan dan

penyempurnaan laporan ini selanjutnya.

Akhirnya kami mengharap agar laporan ini dapat menjadi sumbangan ilmu

pengetahuan bagi rekan-rekan yang lain dan juga dapat menambah pengetahuan kita.

Mataram, Desember 2012

Penyusun


4/98

4

DAFTAR ISI

HalamanHalaman Judul........................................................................................... 1

Halaman Pengesahan................................................................................. 2Kata Pengantar .......................................................................................... 3

Daftar Isi ............................................................................................... 4Daftar Gambar........................................................................................... 6

Daftar Tabel ............................................................................................... 7

Acara 1. Pengenalam Alat-Alat Praktikum

Pendahuluan ............ ......................................... ........... ........... .................... 8

Tinjauan Pustaka .......................................................................................... 9

Pelaksanaan Praktikum .................... ............ .......... ................................ ...... 12

Hasil Pengamatan .......... ................................ ...................... .......... ............... 13

Pembahasan ............................................................................................... 17

Kesimpulan ............................................................................................... 21

Acara 2. Morfologi Jamur Benang

Pendahuluan ............ ......................................... ........... ........... .................... 22

Tinjauan Pustaka ........... .............. ......... ....................... ......... ............. ........... 23


Hasil Pengamatan .............. ......................................... ......... ............. ........... 28

Pembahasan ............................................................................................... 30

Kesimpulan ............................................................................................... 32

Acara 3. Pembuatan Medium Pertumbuhan Mikroba

Pendahuluan ............ ......................................... ........... ........... .................... 33




5/98

5


Pembahasan ............................................................................................... 40

Kesimpulan ............................................................................................... 43

Acara 4. Morfologi Sel Khamir

Pendahuluan ............ ......................................... ........... ........... .................... 44




Pembahasan ............................................................................................... 53

Kesimpulan ............ ......................................... ........... ........... .................... 55

Acara 5. Pengecatan Bakteri

Pendahuluan ............ ......................................... ........... ........... .................... 56




Pembahasan ............................................................................................... 63

Kesimpulan ............ ......................................... ........... ........... .................... 65

Acara 6. Isolasi dan Morfologi Bakteri

Pendahuluan ............ ......................................... ........... ........... .................... 66





6/98

6

Pembahasan ............................................................................................... 74

Kesimpulan ............ ......................................... ........... ........... .................... 76

Acara 7. Perhitungan Jumlah dan Penentuan Ukuran Mikroba

Pendahuluan ............ ......................................... ........... ........... .................... 77




Pembahasan ............................................................................................... 83

Kesimpulan ............ ......................................... ........... ........... .................... 85

Acara 8. Pengaruh Faktor Lingkungan Terhadap Pertumbuhan Mikroba

Pendahuluan ............ ......................................... ........... ........... .................... 86




Pembahasan ............................................................................................... 93

Kesimpulan ............ ......................................... ........... ........... .................... 95

Daftar Pustaka


7/98

7

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Alat-Alat Praktikum ........... .............. ......... ....................... ........ .. 13

Gambar 2. Morfologi Jamur ...................... .......... ............ .................... ......... 28

Gambar 3. Pengecatan dan Morfologi Bakteri ...................... .......... ............. . 61

Gambar 4. Perhitungan Jumlah dan Penentuan Ukuran Mikroba ....... ........... 81


8/98

8

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Hasil Pengamatan Pembuatan Medium ........... ..................... ........ 39

Tabel 2. Hasil Pengamatan Morfologi Khamir ............. ............................. 50

Tabel 3. Hasil Pengamatan Isolasi dan Morfologi Mikroba ................. ...... 72

Tabel 4. Hasil Pengamatan Perhitungan Jumlah dan Penentuan

Ukuran Mikroba ........... ................................ ..................... ........ 82

Tabel 5. Hasil Pengamatan Pengaruh Faktor Lingkungan

Terhadap pertumbuhan Mikroba .......... ................................ ...... 92


9/98

9

ACARA I

PENGENALAN ALAT- ALAT PRAKTIKUM

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Pengenalan alat-alat laboratorium penting dilakukan untuk keselamatan

kerja saat melakukan penelitian. Alat-alat laboratorium biasanya dapat rusak atau

bahkan berbahaya jika penggunaannya tidak sesuai dengan prosedur. Sebab

pentngnya dilakukan pengenalan alat-alat laboratorium agar dapat diketahui cara-

cara penggunaan alat tersebut dengan baik dan benar. Sehingga kesalahan

prosedur pemakaian alat dapat diminimalisir sedikit mungkin. Hal ini penting

supaya saat melakukan penelitian, data yang diperoleh akan benar pula. Data-data

yang tepat akan meningkatkan kualitas penelitian seseorang.

Tujuan Praktikum

Tujuan praktikum pengenalan alat-alat praktikum adalah untuk

mengetahui alat-alat apa saja yang terdapat di laboratorium mikrobiologi, cara

penggunaan yang benar serta fungsi dan spesifikasi masing-masing alat tersebut.


10/98

10

TINJAUAN PUSTAKA

Dalam sebuah praktikum, praktikan diwajibkan mengenal dan memahami

cara kerja serta fungsi dari alat-alat yang ada dilaboratorium. Selain untuk

menghindari kecelakaan dan bahaya, dengan memahami cara kerja dan fungsi dari

masing-masing alat, praktikan dapat melakukan praktikum dengan sempurna

(Walton 2008).

Pengenalan alat-alat ini meliputi macam-macam alat, mengetahui nama-

namanya, memahami bentuk, fungsi serta cara kerja alat-alat tersebut. Setiap alat

dirancang atau dibuat dengan bahan-bahan yang berbeda satu sama lain dan

memiliki fungsi yang sfesifik (Imamfhasai, 2010).

Mikroskop adalah alat yang paling khas dalam laboratorium mikrobiologi

yang memberikan perbesaran yang membuat kita dapat melihat sruktur organism

yang tidak dapat dilihat oleh mata telanjang. Mikroskop yang tersedia

memungkinkan jangkauan perbesaran yang luas dari beberapa kali hingga ribuan

kali (Lay, 2008).

Peralatan yang dipergunakan di laboratorium mikrobiologi selain

mikroskop adalah tabung reaksi, beaker gelas, labu ukur, gelas ukur, cawan petri,

pipit labu, metric, buret, jarum inakulasi/ose, oven, autoklaf, lampu spritus, alat

timbangan, PH meter, inkubator, water bath (penangas air), refrigator, freezer,

haemocytometer, spektronik 200, colony counter, hot plate, vartex mixer, shaker,

gelas benda, pipet tetes, jarum enter dan sebagainya. Peralatan yang tersebut

diatas merupakan seebagian kecil dari peralatan yang terdapat dilaboraturium

mikrobiologi (Irianto, 2007).


11/98

11

Autoklaf adalah berbagai macam alat dan bahan yang digunakan dalam

mikrobiologi menggunakan uap air panas bertekanan. Tekanan yang digunakan

umumnya 15 psi atau sekitar 2 atm. Lama sterilisasi yang dilakukan biasanya 15

menit untuk 12C (Dwidjoseputro, 2010).

Inkubator adalah alat untuk menginkubasi mikroba pada suhu yang

terkontrol. Alat ini dilengkapi dengan pengatur suhu dan pengatur waktu ( Imam

K, 2010 ).

Oven adalah alat untuk sterilisasi alat-alat yang tahan terhadap panas

tinggi misalnya, cawan petri, tabung reaksi, labu erlenmeyer, dan lain-lain. Alat

ini umumnya dilengkapi dengan thermometer. Temperatur yang digunakan untuk

alat ini umumnya 180C selama 2 jam. Tabung reaksi berfungsi sebagai tempat

media pertumbuhan mikrobia dalam bentuk media tegak atau miring yang

disumbat dengan kapas, dibulatkan lalu disterilkan dengan kapas berada tetap

diatasnya dan diikat. Cawan petri merupakan alat sejenis dengan gelas kimia yang

berfungsi untuk pembuatan kultur media (Irianto, 2007).

Bunsen merupakan alat yang digunakan untuk pemijaran serta untuk

mensterilisasikan mikroba. Bunsen juga mempunyai fungsi lain, yakni

mengamankan praktikan pada saat melakukan penanaman medium. Drigalski

(batang penyebar) berbentuk segi tiga kecil dan ose (loop) berfungsi untuk

mengambil dan menggores mikroorganisme, terdiri dari ose lurus untuk

menanami mikroorganisme dan ose bulat untuk menggores mikroorganisme yang

biasanya berbentuk tig-tag. Engkas merupakan sebuah kotak tertutup, terbuat dari

kaca/playwood yang bagian depannya terdapat dua lubang untuk memasukkan


12/98


13/98

13

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan tempat praktikum

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Kamis, 22 November 2012 di

Laboratorium Mikrobiologi dan Biotekhnologi Fakultas Pertanian Universitas

Mataram.

Alat dan Bahan Praktikum

a. Alat-alat praktikumAdapun alat-alat yang digunakan dalam praktikun ini adalah Mikroskop,

Colony counter, Shaker, Enkas, Water Bath, Centrifuge, Autoklof, Laminar Air

Flow, jarum enter, jarum ose, jarum priparat, Pipet mikro, oven dan petri

dish/cawan.

b. Bahan-bahan praktikumAdapun dalam praktikum tidak menggunakan ini tidak menggunakan

bahan apapun karena hanya pengenalan alat-alat praktikum.

Prosedur Kerja

1. Disiapkan alat-alat praktikum yang akan diperkenalkan2. Diamati alat-alat praktikum3. Diambar dan ditulis fungsi masing-masing alat


14/98


15/98

15

Coloni Counter Untuk menghitung

jumlah mikroba

Centrifuge Untuk memisahkan

senyawa dengan berat

molekul yang

beberbeda dengan

memanfaatkan gaya

centrifuge


16/98

16

Mikroskop untuk melihat benda-

benda atau organismeyang berukuran

sangat kecil.

Mikro pipet Untuk memindahkan

cairan yang

bervolume cukup

kecil

Shakers Untuk

menghomogenkan

larutan dengan

menggunakan tabung

reaksi


17/98


18/98

18

PEMBAHASAN

Oven merupakan alat yang digunakan untuk mengeringkan alat-alat

sebelum digunakan dan digunakan untuk mengeringkan bahan yang dalam

keadaan basah (Irianto, 2007). Oven atau sering juga disebut hot air. Oven adalah

alat sterilisasi yang menggunakan prinsip panas kering. Oven digunakan untuk

mensterilkan alat gelas yang berongga atau material seperti minyak yang tidak

dapat disterilkan dengan autoklafkarna tidak permeable teradap uap air. Alat ini

terdiri dari panas elektrik, pengontrol suhu dan ruang insulasi yang umumnya

dilengkapi kipas untuk mensirkulasi udara sehingga panas merata. Kondisi

sterilisasi yang umumnya adalah 160 - 170C dalam waktu 1 jam.

Autoklaf adalah alat untuk menterilkan berbagai macam alat dan bahan

yang pada mikrobiologi menggunakan uap air panas bertekanan. Tekanan yang

digunakan pada umumnya 15 psi atau sekitar 2 atm dan dengan suhu 121C. lama

waktu untuk mensterilkan alat kurang lebih 1520 menit (Dwidjoseptro, 2010).

Sedangkan lama waktu untuk menstrilkan bahan kurang 1015 menit. Komonen

komponen autoklaf adalah tombol pengatur waktu mundur, katup pengeluaran

uap, pengatur tekanan, klep pengaman, termometer dan lempeng sumber panas.

Autoklaf digunakan untuk sterilisasi bahan yang tidak tahan terhadap panas tinggi,

bahan-bahan yang teroksidasi dengan suhu tinggi, alat yang memiliki skala.

Laminar Air Flow adalah kelengkapan dasar laboraturium khususnya

laboratorium di bidang biologi atau kedokteran. Berbeda dengan lemari asam

yang prinsip kerjanya membuang udara dari dalam ruang kerja,Laminar Air Flow

adalah kebalikannya, membuat kerja tetap steril dengan mengambil udara dari luar


19/98


20/98

20

NI. Dalam penggunaannya mikropipet memerlukan tip-tip yang sudah disterilkan

tidak boleh disentuh tangan karena akan menyebabkab kontaminasi.

Cawan petridish atau talepa pitri adalah sebuah wadah yang bentuknya

bundar dan terbuat dari plastik atau kaca yang digunakan untuk membiakkan sel

Cawan petri selalu berpasangan, yang ukurannya agak kecil sebagai wadah dan

yang lebih besar merupakan tutupnya (Lay, 2008). Cawan Petri dinamai menurut

nama penemunya pada tahun 1877 yaitu Julius Richard Petri (18521921), ahli

bakteri berkebangsaan Jerman. Alat ini digunakan sebagai wadah untuk

penyelidikan tropi dan juga untuk mengkultur bakteri, khamir spora atau biji--

bijian. Cawan petri plastik dapat dimusnahkan setelah sekali pakai untuk kultur

bakteri.

Centrifugeadalah suatu alat yang digunakan untuk memisahkan senyawa

dengan berat molekul yang berbeda dengan memanfaatkan gaya centrifuge.

Besarnya gaya centrifugetergantung dari besarnya gaya jari jari dari titik pusat

dan kecepatan sudut. Ada dua jenis centrifuge yaitu, centrifuge listrik dan

centrifugeputar manual. Jarum ose dibuat dari kawat chrom berukuran 0,5 0,75

mm. Jarum ose berfungsi untuk memindahkan atau mengambil koloni suatu

mikrobia ke media yang akan digunakan kembali. Jarum preparat digunakan

untuk menipiskan dan melepaskan gumpalangumpalan obyek diatas gelas benda,

terutama obyek yang berupa potongan media yang mengandung miselium jamur

sebelum ditutup dengan gelas penutup. Jarum enter berbentuk serupa dengan

jarum preparat, tetapi ujungnya ditipiskan dan dibengkokkann. Jarum enten


21/98


22/98

22

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan, maka dapat ditarik

beberapa kesimpulan sebagai berikut:

1. Oven, autoklaf dan Laminar Air Flow merupakan alatalat yang digunakan

untuk menstrilkan alat dan bahan untuk praktikum.

2. Cawan petri berfungsi sebagai sebagai wadah penyimpan dan pembuatan

kultur media.

3. Coloni counter berfungsi untuk menghitung jumlah koloni mikroba.

4. Mikropipet berfungsi memindahkan cairan yang bervolume cukup kecil.

5. Jarum ose berfungsi untuk memindahkan atau mengambil koloni suatu

mikroba ke media yang akan digunakan kembali.

6. Enkas berfungsi sebagi tempat penanaman mikroba.


23/98


24/98

24

TINJAUAN PUSTAKA

Adapun klasifikasi jamur yang penting dalam pembicaraan mikrobiologi

ialah kelas Mycomycetes, kelas Pycomycetes, kelas Ascomycetes, dan kelas

Ceuteromycetes. Perbedaan yang penting diantara kelas Pycomycetes dan kelas

Ascomycetes ialah bahwa miselium Pycomycetes serupa tabung panjang yang

tidak terbagi-bagi, sedangkan miselium Ascomycetes serupa tabung panjang yang

bersekat-sekat. Miselium dapat bercabang-cabang, suatu helai disebut hifa. Tubuh

Mycomycetes tidak terdiri atas hifa atau miselium, tetapi berupa seonggok plasma

yang tidak selalu terwadahi dalam suatu sel (Dwidjoseputro,1985).

Sebagian besar eukariota tumbuh sebagai filament tubular yang disebut

hifa. Jalinan massa hifa disebut miselium. Hifa adalah senositik, artinya tidak

digolongkan menjadi sel-sel tersendiri. Walaupun sekat dijumpai, beberapa tetap

berlubang-lubang sehingga sitoplasma dan nucleus banyak didalam hifa bebas

mengalir ke seluruh miselium. Dinding hifa diperkuat oleh kitin, suatu polimer

dari N-asetil glukosamina pautan diantara gula-gula seperti yang ada pada

selulosa dan peptidoglikan dan pembentukan macam kekakuan struktur yang sama

seperti halnya polimer-polimer tadi. Fungi tidak mempunyai klorofil dan karena

itu heterotrifik. Fungi dikelompokkan menjadi Phycomycetes berdasarkan dua

kriterianya yaitu pembentukan spora di dalam sporangium dan tidak mempunyai

septa (dinding sekat) pada hifa. Tetapi agaknya kedua kategori itu bukan dasar

yang memadai untuk menyatakan hubungan kerabatnya (Kimball,1999).

Jamur dibagi dalam 4 divisi yaitu, Zygomycetes yang memiliki ciri-ciri

hifa bersifat koenositik. Spora seksualnya adalah zygospora dan spora


25/98


26/98

26

di atas atau ke dalam substrat nutrient. Benang atau hifa ini terdiri dari dinding sel

dan sitoplasma dengan benda-benda inklusi. Keseluruhan massa hifa talus fungi

disebut miselium. Pada fungi derajat tinggi miselium membentuk utas-utas tali

tebal, rizomorf yang berfungsi sebagai pengangkut zat (Schlegel, 1994).

Jamur ada yang menguntungkan dan ada yang merugikan. Contoh jamur

yang menguntungkan adalah Rhizopus oligosporus dan Rhizopus stoloniferus

yang berperan dalam pembuatan tempe, Aspergillus wentii untuk pembuatan

kecap, Penicillium chrysogenum dan Penicilliun rotatum sebagai penghasil

penisilin, Penicillium requeorti dan Penicillium cemmemberti untuk pembuatan

keju. Sedangkan contoh jamur yang merugikan adalahMucorParasiticussebagai

penyebab penyakit kulit dan Aspergillus fumigatus sebagai penyebab penyakit

TBC-semu (Suriawiria, 1993).


27/98

27


Waktu dan Tempat Praktikum

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Kamis, 25 November 2012 dilakukan

di Laboratorium Mikrobiologi dan Biotekhnologi Fakultas Pertanian Universitas

Mataram.


a. Alat-alat Praktikum

Adapun alat-alat yang digunakan pada praktikum ini yaitu gelas benda,

tisu, gelas penutup, mikroskop, jarum enten.

b. Bahan-bahan Praktikum

Adapun bahan yang digunakan dalam praktikum ini yaitu biakan murni

jamur benangAspergillussp.,Mucorsp., Penicilliumsp.,Rhizopussp., Fusarium

sp., Trichodermasp., aquades dan alkohol 70%.

Prosedur Kerja

1.Dibersihkan gelas benda dengan tissue hingga bebas dari lemak dan debu,kemudian diletakkan setetes air suling di bagian tengahnya.

2.Diambil sedikit miselium dari biakan murni jamur dengan jarum preparat dandiletakkan di atas tetesan air suling. Jika miselium ini terlalu padat, diratakan

dengan memisah-misahkan miselium dengan bantuan jarum preparat dan jarum

enten.

3.Ditutup preparat dengan gelas penutup. Dijaga, agar pada saat gelas penutupdiletakkan tidak terbentuk gelembung udara di bawah gelas penutup.


28/98

28

4. Diamati dengan mikroskop, mula-mula dengan perbesaran lemah.5. Digambar dan diberi keterangan.


29/98

29

HASIL PENGAMATAN

Keterangan :

1. Konidia

2. Sterigmata

3. Metula

4. Brancia

5. Konidiofor

6. Sel kaki

Gambar 1. Penicillium sp.

Keterangan :

1. Konidia

2. Konidiofor

3. Sterigmata

Gambar 2. Trchoderma sp.


30/98

30

Keterangan :

1. Konidia

2. Sterigmata

3. Vesikula

4. Konidiofor

5. Sel kaki

6.Miselium

Gambar 3. Aspergilus sp.

Keterangan :

1. Konidia

2. Sterigmata

3. Vesikula

4. Konidiofor5. Sel kaki

6. Miselium

Gambar 4. Fusarium Sp.


31/98

31

PEMBAHASAN

Jamur benang merupakan jamur-jamur berbentuk benang multiseluler

(bersel banyak). Adapun ciri-cirinya antara lain tidak berklorofil, bersifat

eukariotik, hidupnya heterotrof baik secara parasit atau saprofit. Dinding selnya

tersusun dari kitin, bentuk tubuhnya bersel banyak dan menyerupai benang yang

disebut dengan hifa. Hifa bercabang-cabang membentuk jaring yang disebut

miselium.

Pada praktikum ini, dilakukan pengamatan terhadap berbagai macam

jamur yaitu Trichoderma sp, Fusarium sp, Aspergillus sp. dan

Penicillium.Trichoderma sp merupakan salah satu jamur yang menguntungkan

yaitu sebagai antagonis terhadap jamur lain yang bersifat patogenik. Trichoderma

sp menghasilkan enzim selulosa yang dapat diisolasi dan dimurnikan. Dengan

selulosa ini, Trichoderma spdapat memproduksi protein sel tunggal.

Fusarium sphidup secara parasit pada batang tebu, padi, pisang, tomat dan

kentang. Hifanya bersepta. Pada praktikum kali ini, tidak ditemukan gambaran

Fusarium spsecara lengkap, yang terlihat hanyalah konidia (makrokonidia) saja.

Hal ini disebabkan karena adanya ketidaktelitian praktikan yang menyebabkan

kesalahan pada saat menyiapkan preparat.

Aspergillus sp umumnya terdapat pada kulit buah, keju, dan bagian

tumbuhan yang mati.Aspergillus spmembentuk konidia berwarna hijau kebiruan.

Konidia terletak dibagian luar ujung hifa yang menggelembung.

Perkembangbiakan seksualnya dengan membentuk badan buah yang berbentuk


32/98

32

bulat,kecil dan berwarna kuning. Aspergillus sp banyak digunakan dalam

pembuatan makanan tradisional seperti tauco, kecap dan sake.

Penicillium spmemiliki tempat hidup dan sifat yang mirip Aspergillus sp.

Akan tetapi berbeda denganAspergillus sp, konidia Penicillium spterdapat pada

ujung hifa yang bercabang. Jamur ini dikenal sebagai jamur penghasil antibiotik

yaitu penicillin.

Jamur-jamur diatas merupakan bagian kecil dari jumlah jamur yang

terdapat di alam. Jamur-jamur ini lebih dapat bertahan dalam keadaaan alam yang

tidak menguntungkan dibandingkan dengan jasad-jasad renik lainnya.


33/98

33

KESIMPULAN

Adapun kesimpulan yang dapat diambil dari hasil pengamatan dan

pembahasan adalah sebagai berikut:

1. Jamur benang merupakan organisme multiseluler (bersel banyak).2. Jamur benang memiliki bentuk tubuh yang menyerupai benang dan disebut

hifa.

3. Penicillium spdan Aspergillus spmemiliki kemiripan dalam hal sifat dantempat hidup, tetapi konidia Penicillium sp terdapat pada ujung hifa yang

bercabang.

4. Bentuk spora jamur benang dibedakan berdasarkan reproduksi seksual danreproduksi aseksualnya.

5. Pada jamur Penicilliumterdapat branchia atau percabangan.


34/98

34

ACARA III

PEMBUATAN MEDIUM

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang

dipakai untuk menumbuhkan mikroba. Selain untuk pembuatan mikroba, medium

dapat pula digunakan untuk melakukan isolasi, memperbanyak, pengujian sifat-

sifat fisiologi dan perhitungan mikroba. Sehingga pembuatan medium itu harus

sesuai komposisi dan tujuan penanamannya, serta cara pembuatan medium iru

harus dengan baik agar medium yang dihasilkan sesuai dengan yang diingikan.

Semua makhluk hidup membutuhkan nutrien untuk pertumbuhan dan

reproduksinya. Nutrien merupakan bahan baku yang digunakan untuk

membangun komponen-komponen baru dan untuk menghasilkan energi yang

dibutuhkan dalam proses kehidupan sel. Untuk menumbuhkan dan

mengembangbiakkan mikroba diperlukan suatu substrat yang disebut medium.

Sedangkan medium itu sendiri sebelum digunakan harus dalam keadaan steril,

artinya tidak ditumbuhi oleh mikroba lain yang tidak diharapkan. Agar mikroba

dapat tumbuh dan berkembang dengan baik didalam medium, maka diperlukan

persyaratan tertentu yaitu diantaranya bahwa di dalam medium harus terkandung

semua unsur hara yang diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembangan

mikroba. Oleh karena hal tersebut, maka diadakan praktikum ini guna menambah

keterampilan dan pengetahuan mengenai pembuatan medium pertumbuhan

mikroba.


35/98

35

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk membuat medium dasar

jamur, untuk membuat medium dasar bakteri dan untuk medium dasar khamir


36/98

36

TINJAUAN PUSTAKA

Mempelajari pertumbuhan bakteri merupakan faktor terpenting dalam

mengetahui beberapa aspek fisiologis. Hal itu karena karakteristik pertumbuhan

mencerminkan kejadian fisiologis suatu bakteri. Oleh karena itu dalam melakukan

penelitian biasanya para peneliti melakukan manipulasi pertumbuhan (misalnya

menggunakan kultur yang baru) untuk dapat mempelajari suatu aspek fisiologis

(Tjahjadi, 2007).

Media adalah suatu substrat untuk menumbuhkan bakteri yang menjadi

padat dan teap tembus pandang pada suhu inkubasi. Medium adalah suatu bahan

nutrisi tempat menumbuhkan bakteri di laboratorium (Tortora, 2007).

Media berfungsi untuk menumbuhkan mikroba, isolasi, memperbanyak

jumlah, menguji sifat-sifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikroba, dimana

dalam proses pembuatannya harus disterilisasi dan menerapkan metode aseptis

untuk menghindari kontaminasi pada media (Anonim, 2009).

Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang

dipakai untuk menumbuhkan mikroba. Selain untuk menumbuhkan mikroba,

medium dapat digunakan pula untuk isolasi, memperbanyak, pengujian sifat-sifat

fisiologis dan perhitungan mikroba (Dwyana, 2009).

Media dibedakan menjadi dua menurut komposisi kimiawinya yaitu

medium sintetik dan medium non-sintetik atau kompleks. Medium sintetik dibuat

dari bahan kimia dengan kemurnian tinggi dan ditentukan dengan tepat,

sedangkan medium non-sintetik tidak diketahui dengan pasti (Hadioetomo, 2010).


37/98

37

Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari

campuran zat-zat makananan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk

pertumbuhannya. Mikrooorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekul-

molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan media

pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan

juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya (Indra, 2008).

Berdasarkan konsistennya atau kepadatannya, medium dibagi menjadi tiga

jenis , yaitu : medium cair/broth/liquid medium, medium setengah padat (semi

solid medium) dan medium padat (solid medium) (Anonimous, 2008).

Untuk menelaah mikroorganisme dilaboratorium, kita harus dapat

menumbuhkan mereka. Mikroorganisme dapat berkembang biak dengan alami

atau dengan bantuan manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia

dilaboratorium melalui substrat yang disebut media. Untuk melakukan hal ini

haruslah dimengerti jenis-jenis nutrien yang disyaratkan oleh bakteri dan juga

macam lingkungan fisik yang menyediakan kondisi optimum bagi

pertumbuhannya (Label, 2008).

Nutrien Agar (NA) digunakan untuk budidaya bakteri dan untuk

pencegahan organisme dalam air, limbah, kotoran dan lainnya. Komposisinya

terdiri dari ekstrak daging, pepton, agar dan aquades (Ruly, 2009).


38/98

38



Praktikum ini dilaksanakan pada hari Kamis, 29 November 2012 di

Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas

Mataram.


a. Alat-alat praktikumAdapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah timbangan,

erlenmeyer, hot plate, kapas, kain saring, gelas kimia, pisau dan pengaduk.

b. Bahan-bahan praktikumAdapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah ekstrak

daging, pepton, agar NA, aquades, kentang dekstrose, tauge, agar PDA dan

sukrosa.

Prosedur Kerja

a. Pembuatan MediumNutrien Agar (NA)1. Dipanaskan air hingga mendidih diatas hot plate.2. Dituangkan ekstrak daging kedalam air yang sudah mendidih, lalu diaduk

rata dan direbus beberapa menit.

3. Ditambahkan pepton, lalu diaduk rata dan direbus kembali beberapa menit.4. Ditambahkan agar sedikit demi sedikit sambil diaduk.5. Dipanaskan beberapa menit.6. Ditutup mulut erlenmeyer dengan kapas dan didiamkan.


39/98

39

7. Diamati.b. Pembuatan MediumPotato Dekstrose Agar (PDA)

1. Dikupas kentang dan dipotong-potong kecil seperti kubus, lalu ditimbangsebanyak 40 gram.

2. Direbus dengan aquades sampai kentang menjadi lunak.3. Disaring dengan kain saring dan atur volumenya hingga menjadi 200 ml.4. Ditmabahkan dekstrose dan aduk sampai larutan homogen. Dipanaskan

hingga larutan tersebut mendidih.

5. Diturunkan dari hot plate, kemudian ditambahkan agar sedikit demi sedikitsambil diaduk.

6. Dipanaskan hingga agar mencair dan larut.7. Ditutup mulut erlenmeyer dengan kapas dan didiamkan.8. Diamati.

c. Tauge Cair (TC)1. Ditimbang tauge sebanyak 10 gram dan direbus tauge dengan aquades

sampai lunak.

2. Disaring dan diambil ekstraknya sebanyak 100 ml.3. Ditambahkan sukrosa dan direbus kembali sampai semua sukrosa larut.4. Diturunkan dari hot platedan ditutup mulut erlenmeyer dengan kapas, lalu

didiamkan dan diamati.


40/98

40

HASIL PENGAMATAN

Tabel 3. Hasil Pengamatan Pembuatan MediumMedia Bahan Keterangan

Potato Dekstrose Agar

(PDA)

Kentang 40 gram Berwarna putih keruh

Dekstrose 4 gram Warna tetap, larutanmenjadi lebih kental

Agar 3 gram Warna lebih jernih,larutan semakin kental

Nutrient Agar (NA) Ekstrak daging 0,6 gram Berwarna orange

Pepton 1 gram Warna tetap, larutan

menjadi lebih kental

Agar 4 gram Warna tetap, larutan

sekamin kental

Tauge Cair (TC) Tauge 10 gram Berwarna putih keruh

Sukrosa 6 gram Warna lebih jernih,

larutan menjadi lebih

kental


41/98

41

PEMBAHASAN

Media adalah substrat dimana mikroorganisme dapat tumbuh dan sesuai

dengan lingkungannya. Kehidupan mikroorganisme tergantung pada nutrisi dalam

substrat/medium dan faktor lingkungan yang baik, karena tidak semua medium

untuk pertumbuhan mikroorganisme sangat bervariasi, tergantung dari apa yang

dijadikan dasar penanaman. Mikroba dapat tumbuh dengan baik jika dalam suatu

medium tersebut memenuhi syarat-syarat, yaitu harus mengandung semua zat hara

yang mudah digunakan oleh mikroba, harus mempunyai tekanan osmosis,

tegangan permukaan dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroba yang

ditumbuhkan, tidak mengandung zat-zat yang dapat menghambat pertumbuhan

mikroba, dan harus berada dalam kondisi steril sebelum digunakan (Hafrah,

2009).

Medium Nutrien Agar (NA) berdasarkan susunan kimianya merupakan

medium non-sintetik/semi alamiah, berdasarkan konsistensinya merupakan

medium padat. Medium ini dibuat dalam dua jenis, yaitu NA miring dan NA

tegak. NA miring digunakan untuk membiakkan mikroba sedangkan NA tegak

digunakan untuk menstimulir pertumbuhan bakteri dalam kondisi kekurangan

oksigen. NA digolongkan pada medium umum sebab dapat digunakan untuk

menumbuhkan beberapa jenis bakteri. Nutrien Agar (NA) merupakan suatu

medium yang berbentuk padat, yang merupakan perpaduan antara bahan alamiah

dan senyawa-senyawa kimia. NA dibuat dari campuran ekstrak daging dan pepton

dengan menggunakan agar sebagai pemadat, karena sifatnya yang mudah

membeku dan mengandung karbohidrat yang berupa galaktan sehingga tidak


42/98

42

mudah diuraikan oleh mikroorganisme. Dalam hal ini ekstrak daging dan pepton

digunakan sebagai bahan dasar karena merupakan sumber protein, nitrogen,

vitamin serta karbohidrat yang sangat dibutuhkan oleh mikroorganisme untuk

tumbuh dan berkembang. Aquades berfungsi sebagai pelarut dan untuk

menghomogenkan larutan. Nutrien Agar (NA) merupakan medium untuk

menumbuhkan bakteri (Waluyo, 2007).

Medium Potato Dekstrose Agar(PDA) menurut konsistensinya termasuk

medium padat, berdasarkan susunan kimianya termasuk non-sintetik/semi

alamiah. Berdasarkan fungsinya, medium PDA ini termasuk medium umum

karena dapat digunakan untuk menumbuhkan satu atau lebih kelompok jamur.

Medium PDA digunakan untuk menumbuhkan jamur (kapang). Komposisinya

terdiri dari dekstrose yang berfungsi sebagai sumber karbon, kentang sebagai

sumber karbohidrat, agar berfungsi memadatkan medium dan aquades berfungsi

sebagai pelarut dan sumbert oksigen.

Medium Tauge Cair (TC) merupakan medium yang bersifat non-sintetik.

Sedangkan berdasarkan konsistensinya, termasuk medium cair. Medium ini

digunakan untuk pertumbuhan dan pembiakan khamir. Komposisi medium tauge

cair terdiri dari tauge yang berfungsi sebagai sumber-sumber zat organik yang

dibutuhkan oleh khamir, sukrosa merupakan sumber karbohidrat bagi khamir,

dimana setelah mengalami fermentasi, sukrosa akan berubah menjadi glukosa dan

fruktosa yang juga dibutuhkan oleh khamir, aquades digunakan untuk melarutkan

bahan pada medium tersebu. Pada medium ini tidak ada penambahan agar untuk


43/98

43

konsistensinya. Oleh karena pada komposisinya tidak terdapat agar sehingga

medium ini disebut medium cair.


44/98

44

KESIMPULAN


beberapa kesimpulan sebagai berikut :

1. Mikroba dapat tumbuh dengan baik jika dalam suatu media tersebutmemenuhi syarat-syarat, yaitu harus mengandung semua zat hara yang

mudah digunakan oleh mikroba, harus mempunyai tekanan osmosa,

tegangan permukaan dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroba yang

ditumbuhakan.

2. Nutrien Agar(NA) merupakan medium untuk menumbuhkan bakteri.3. Medium Potato Dekstrose Agar (PDA) digunakan untuk menumbuhkan

jamur.

4. Medium Tauge Cair (TC) digunakan untuk pertumbuhan dan pembiakankhamir.

5. Ekstrak daging dan pepton merupakan sumber protein, nitrogen, vitaminserta karbohidrat.

6. Agar berfungsi sebagai pemadat, karena sifatnya yang mudah membekudan mengandung karbohidrat.


45/98

45

ACARA IV

MORFOLOGI KHAMIR

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Khamir atau yeast adalah katagori non takson yang mencangkup semua

fungsi uniseluler yang berasal dari kingdom zygomkota, askomykota,dan

basidiomykota. Khamir umumnya berkembang biak baik secara seksual maupun

aseksual (Waluyo, 2007). Pada umumnya khamir terdapat di permukaan buah

buahan, pada debu, ditanah tanah, pada makanan, minuman, dan lain lain.

Khamir sering kali hampir tidak kelihatan karena tidak kontras dengan medium

dimana mereka hidup. Oleh karena itu, perlu dilakukan pewarnaan agar khamir

tampak jelas bila diamati dengan mikroskop. Pewarnaan ini ada yang bersifat non

differensial dan diferensial. Pewarnaan non diferensial hanya bertujuan agar

khamir yang diamati tanpak jelas atau kontras dengan latar belakangnya.

Pewarnaan differensial bertujuan agar dapat membedakan antara jenis bakteri

yang berbeda. Contoh pewarna differensial adalah pewarnaan khamir dengan

methylene blue. Sehingga sel mati dan sel hidup memiliki warna yang berbeda.

Berdasarkan penjelasan diatas maka perlu dilakukan suatu pengamatan untuk

mengetahui morfologi khamir dan membedakan sel khamir yang mati dan hidup.


46/98

46

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengenal bermacam

macam bentuk sel, membedakan sel yang mati dan yang hidup dan menghitung

persentase kematian khamir.


47/98

47

TINJAUAN PUSTAKA

Sel khamir mempunyai ukuran yang bervariasi, yaitu dengan panjang 1,5

mm sampai 20,50 mm dan lebar 1 sampai 10 m. Bentuk khamir bermacam

macam, yaitu bulat, oval, silinder, ogival yaitu bulan panjang dengan salah satu

ujung runcing, segitiga melengkung (tringuler), berbentuk botol, bentuk apikulat

atau lemon, membentuk spedomiselium, dan sebagai ukuran dan bentuk sel

khamir dalam kultur yang sama mungkin berbedabeda karena pengaruh

perbedaan dan kondisi lingkungan selama pertumbuhan (Waluyo, 2007).

Pengamatan sel khamir dapat dilakukan dengan cara pengecetan sederhana

yaitu pemberian warna pada khamir dengan menggunakan larutan tunggal suatu

warna pada lapisan tipis atau olesan yang sudah difiksasi. Pewarnaan sederhana

yaitu pewarnaan dengan menggunakan satu macam zat warna dengan tujuan

hanya untuk melihat bentuk sel khamir dan untuk mengetahui morfologi dan

susunan selnya serta membedakan sel yang mati dan yang hidup (Balley, 2007).

Khamir adalah mikroorganisme bersel tunggal dengan ukuran 5 dan 20

mikron. Biasanya berukuran 510 kali lebih besar dari bakteri. Terdapat berbagai

macam bentuk ragi tergantung dari cara pembelahan selnya. Sel khamir dapat

berbebtuk lonjong, bentuk batang atau bulat. Selsel khamir sering di jumpai

secara tunggal, tetapi apabila anakanak sel tidak dilepas kan dari induknya

setelah pembelahan maka akan terjadi bentuk yang disebut pseudemisellium.

Khamir tidak bergerak karena tidak mempunyai flagela. Beberapa jenis khamir

membentuk kapsul disebelah luar (Buckle,2008).


48/98

48

Dinding sel khamir terdiri atas khitin. Sel yang masih muda dinding selnya

tipis dan lentur, sedangkan yang tua dinding selnya tebal dan kaku. Dibawah

dinding sel terdapat membran sitoplasma yang bersifat permiabel selektif. Tipe sel

khamir adalah Eukariotik. Untuk identifikasi dan determinasi khamir, perlu

dipelajari sifat-sifat morfologi dan fisiologinya. Sifat-sifat morfologi yang perlu

dipelajari meliputi bentuk, ukuran sel, dan jumlah spora, caracara

perkembangbiakan, pembentukan pseudemycellium, ordian, giant cdony,

klamidospora, blastospora dan sebagainya. Sifatsifat fisiologis meliputi pengijian

asimilasi C dan N, fermentasi karbohidrat, kemampuan mencairkan gelatin,

reduksi nitrat dan sebagainya (Dwidjoseputro, 2010).


49/98

49



Praktikum ini dilaksanakan pada hari Kamis 6 desember 2012 di


Mataram.


a. Alatalat PraktikumAdapun alatalat praktikum yang digunakan dalam praktikum ini adalah

jarum, ose, gelas benda, gelas penutup, tisu, mikroskop, dan lampu spiritus.

b. Bahanbahan PraktikumAdapun bahanbahan yang digunakan pada praktikum ini adalah khamir

24 jam, khamir 48 jam dan larutan methylen blue.

Prosedur Kerja

1. Dibersihkan gelas benda dan gelas penutup sehingga bebas dari lemak dandebu.

2. Diambil dua ose khamir secara aseptik yang berumur 24 jam, diletakkandiatas gelas benda.

3. Diambil satu tetes larutan methylen bluedan diletakkan diatas gelas bendayang telah diberi khamir 24 jam, lalu campur sebaikbaiknya.


50/98

50

4. Diletakkan gelas penutup diatas bahan tersebut, juga agar pada waktumeletakkan gelas penutup jangan sampai terbentuk gelembung udara

didalam preparat.

5. Diamati dengan mikroskop, mulamula dengan perbesaran sedangdibedakan antara sel khamir yang hidup dan yang mati.

6. Dihitung jumlah khamir yang hidup dan yang mati pada lima bidangpandang.

7. Dihitung persentase kematian dengan rumus :% kematian =

8. Diulangi pekerjaan 1 sampai 6 dengan menggunakan khamir yangberumur 48 jam.


51/98

51

HASIL PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN

Hasil Pengamatan

Tabel 5.1 Hasil pengamatan persentase kematian Khamir 24 jam

Bidang pandang Sel hidup Sel mati

1 1 18

2 3 11

3 3 6

4 2 4

5 2 6

Jumlah 11 45% 80% 20%

Perhitungan

Misal : sel hidup = x, sel mati = y

% kematian1= x 100 %

= x 100 %

= 95 %


= x 100 %

= 78 %


= x 100 %

= 67 %



52/98

52

= x 100 %

= 67 %

% kematian5 = x 100 %

= x 100 %

= 75 %

% kematianrata - rata= x 100 %

= x 100 %

= 80 %

Tabel 5.2. Hasil pengamatan persentase kematian Khamir 48 jam

Bidang pandang Sel hidup Sel mati

1 4 10

2 2 12

3 3 46

4 2 15

5 5 41

Jumlah 16 124

% 88% 12%


= x 100 %

= 71 %


= x 100 %

= 86 %



53/98

53

= x 100 %

= 94 %


= x 100 %

= 88 %


= x 100 %

= 89 %

% kematianrata - rata= x 100 %

= x 100 %

= 88 %


54/98

54

PEMBAHASAN

Khamir merupakan salah satu mikroorganisme yang termasuk ke dalam

fungsi mikroskopik. Khamir terdapat sebagai sel bebas yang sederhana. Khamir

yang ditemukan memiliki berbagai bentuk seperti bulat, lonjong, tringular dan

sebagainya. Khamir tidak bergerak karena tidak mempunyai flagela. Khamir dapat

tumbuh dalam media cair dan padatdengan cara seperti bakteri yaitu pembelahan

sel.

Di alam terdapat berbagai bentuk khamir, namun khamir dalam

pengamatan berbentuk bulat. Dalam pengamatan dilakukan dengan pengecatan

sederhana menggunakan methylen blue. Penggunaan methylen blue pada

pengecetan sederhana dimaksudkan untuk dapat membedakan sel yang mati dan

sel yang hidup dengan perbedaan atau perubahan mana yang ditimbulkan.

Pengecetan sederhana yaitu pengecetan yang di lakukan untuk membedakan

antara mikroba yang hidup dengan mikroba yang mati. Sel khamir yang mati dan

sel khamir yang hidup dapat dibedakan dengan adanya perbedaan warna pada sel

khamir tersebut. Sel khamir yang mati akan berwarna biru, sedangkan sel khamir

yang hidup tidak berwarna (transparan). Terbentuknya warna biru pada sel khamir

yang telah mati disebabkan karena sifat semi perneabel membran dari sel khamir

yang mati tersebut tidak berfungsi lagi sehingga sel khamir yang mati tersebut

tidak berfungsi lagi sehingga sel khamir yang mati menyerap warna biru dari

larutan methylen blue. Pada khamir yang berumur 24 jam jumlah sel yang mati

sebanyak 80 %. Sedangkan pada khamir yang berumur 48 jam, jumlah sel mati


55/98

55

sebanyak 88 %. Jumlah sel khamir yang mati, pada khamir yang berumur 24 jam

lebih sedikit dari pada khamir yang berumur 48 jam. Hal ini dikarenakan oleh

beberapa faktor yang mempengaruhi pertumbuhannya, di antaranya seperti

kandungan nutrisi substrak, pH, suhu, tersedianya oksigen dan ada tidaknya

senyawa penghambat, penyinaran lampu mikroskop dan lainlain. Pada khamir

yang berumur 48 jam sel yang mati lebih banyak dibandingkan sel khamir yang

berumur 24 jam juga disebabkan karena pada sel khamir yang berumur 48 jam sel

yang mati lebih banyak dibandingkan sel khamir yang berumur 48 jam sudah

berada pada fase menuju kematian dimana pada fase ini nutrisi dalam substrak

sudah habis dan energi cadangan didalam sel habis. Kecepatan kematian juga

bergantung pada kondisi nutrien, lingkungan dan jenis dari khamir tersebut.

Kandungan nutrisi substrat, sel khamir yang saling berkompetisi untuk

mendapatkan nutrisi yang saling memakan satu sama lainnya. Kebanyakan khamir

lebih cepat tumbuh pada pH 4,04,5, suhu optimum khamir yaitu 2530 C dan

suhu maksimum 3547C, tetapi beberapa khamir dapat tumbuh pada suhu 0 C.

Tersedianya oksigen, khamir tumbuh baik pada kondisi aerobik, meskipun lambat.

Akibat penyinaran lampu mikroskop yang terlalu lama, suhu untuk pertumbuhan

khamir menjadi lebih dari batas maksimumnya, sehingga khamir yang diamati

lebih banyak mati.


56/98

56

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat di ambil

kesimpulan sebagai berikut :

1. Khamir merupakan salah satu mikroorganisme yang termasuk kedalamfungsi mikroskopik.

2. Khamir tidak bergerak karena tidak mempunyai flagela.3. Persentase kematian sel khamir yang berumur 24 jam lebih sedikit

dibandingkan sel khamir yang berumur 48 jam.

4. Sel khamir yang diamati berbentuk bulat.5. Perbedaan sel khamir yang berumur 24 jam dan 48 jam disebabkan oleh

beberapa faktor, yaitu kandungan nutrisi substrak, pH, suhu, tersedianya

oksigen dan ada tindaknya senyawa penghambat, lampu mikroskop dan

lainlain.


57/98

57

ACARA V

PENGECATAN DAN MORFOLOGI BAKTERI

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Bakteri atau mikroba lainnya dapat dilihat dengan mikroskop biasa tanpa

pengecatan, yaitu dengan cara-cara khusus. Tetapi pengamatan dengan tanpa

pengecatan akan lebih sulit dan tidak dapat dipakai untuk melihat bagian-bagian

sel yang diteliti, karena umumnya sel bakteri bersifat tembus cahaya (transparan)

atau semi transparan. Oleh karena itu perlu dilakukannya praktikum ini untuk

mengetahui cara pengecatan dan morfologi bakteri.

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mempelajari cara

pembuatan preparat bakteri dengan latar belakang gelap dan mengamati bentuk

serta besar sel sesungguhnya. Selain itu juga, untuk mempelajari cara pengecatan

gram dan mengamati bentuk serta sifat bakteri terhadap pengecatan gram.


58/98

58

TINJAUAN PUSTAKA

Pewarnaan gram adalah tekhnik pewarnaan diferensial yang paling banyak

digunakan dalam bakteriologi, pewarnaan ini memisahkan bakteri menjadi 2

kelompok yaitu gram positif dan gram negatif. Larutan yang digunakan dalam

pewarnaan ini ada 4 yaitu gram A, B, C dan D ( Harley, 2007 ).

Bakteri gram positif adalah jenis bakteri dengan dinding peptidoglikan

yang tebal, sementara bakteri gram negatif adalah jenis bakteri dengan dinding

peptidoglikan yang tipis. Perbedaan ketebalan dinding ini mengakibatkan

perbedaan kemampuan aktifitas dengan pewarnaan gram (Savada, 2008).

Pewarnaan negatif adalah pewarnaan yang tidak langsung mewarnai

bakteri, melainkan mewarnai latar belakang preparat bakteri tersebut. Pewarnaan

ini dilakukan menggunakan pewarnaan yang bersifat asam seperti nigrosin, tinta

india atau eursin. Pewarna ini tidak akan menembus atau berikatan dengan

dinding sel bakteri karena daya muatan negatif dinding sel bakteri. Pewarna akan

membentuk deposit disekitar bakteri atau menghasilkan latar belakang hitam

sehingga bakteri tampak tidak berwarna, sementara latar belakangnya berwarna

gelap (Presscot, 2009).

Selain berdasarkan genetis, terkadang bakter diklasifikasikan berdasarkan

pewarnannya, misalnya dengan pewarnaan gram, bakteri dibagi menjadi bakteri

gram positif dan bakteri gram negatif (Purvess, 2009).


59/98

59


Waktu dan Tempat praktikum

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Kamis, 6 Desember 2012 di


Mataram.


a.

Alat-alat Praktikum

Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini yaitu antara lain

mikroskop, gelas benda, ose,dan lampu spirtus.

b. Bahan-bahan PraktikumAdapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah

biakan murni Bacillus Sp. , Ralstonia Sp. , larutan nigrosin, larutan

alkohol, larutan cat gram A,B,C dan D.

Prosedur Kerja

a. Pengecatan Negatif1. Dibersihkan terlebih dahulu gelas benda dan gelas penutup agar bebas

lemak dan debu , dilewatkan diatas lampu spiritus hingga kering dan

didinginkan.

2. Diamati suspensi biakan murni masing-masing bakteri secara spesifikdengan ose dan diletakkan pada permukaan gelas benda.


60/98

60

3. Ditambahkan satu tetes larutan cat nigrosin pada suspense bakteritersebut dan campurkan dengan batang gelas hingga berbentuk lapisan

tipis preparat, selanjutnya dikeringkan.

4. Diamati preparat tersebut dengan mikroskop, mula-mula denganperbesaran kecil, sedang dan kemudian perbesaran yang besar atau

kuat. Untuk perbesaran yang terakhir ini ditambahkan setetes minyak

imersi di atas lapisan bakteri untuk memperjelas kenampakan objek,

bagaimana warna bakteri yang tampak.

5. Digambar preparat bakteri yang tampak dengan latar belakang di arsir.Perhatikan bentuk dan ukuran masing-masing bakteri.

b. Pengecatan Gram1. Dibersihkan terlebih dahulu gelas benda dengan alkohol dan dilewatkan

pada lampu spiritus hingga kering.

2. Diambil secara diseptik satu ose suspense bakteri dan diratakan diataspermukaan gelas benda sehingga membentuk bidang seluas 1 cm2.

3. Difiksasi dengan cara dipanaskan di atas lampu spirtus sebanyak 6-7kali.

4. Ditambahkan 2-3 tetes cat utama (gram A) pada permukaan lapisanbakteri sampai menutup lapisan tersebut.

5. Dibiarkan selama 1 menit, dilakukan pencucian dibawah air mengalirdan dikeringanginkan.


61/98

61

6. Diteteskan larutan mordan (gram B) dan diamkan selama 1 menit,kemudian dicuci dengan air mengalir dan didinginkan.

7. Dibubuhkan larutan peluntur (gram C) dan dibiarkan selama 30 detikkemudian dicuci dengan air mengalir dan dikeringanginkan.

8. Diberi cat penutup (gram D), didiamkan selam 1 menit dan kemudiandicuci dengan air mengalir dan dikering anginkan.

9. Diamati dengan mikroskop perbesaran kuat dengan menambahkanminyak inersi dan bagaimana perbedaan antara bakteri gram positif dan

bakteri gram negatif.

10. Digambar dan diberi keterangan bakteri yang tampak serta diperhatikanbentuk sel, warna dan reaksi pengecatan.


62/98

62

HASIL PENGAMATAN

Hasil Pengamatan

Pengecatan Nefatif Keterangan :

1. Latarnya berwarnaUngu.

2. Bakterinyaberbentuk basil

dan terlihat

transparan.

Gambar 4.Bacillus Sp. ( 10 x 100 )

Pengecatan Gram

Keterangan :

1. Latarnya berwarnaputih.

2. Bakterinyaberwarna merah

muda dan

termasuk gram

negatif.

Gambar 5.Ralstonia Sp. ( 10 x 100 )


63/98

63

Pengecatan Gram

Keterangan :

1. Latarnya berwarnaputih

2. Bakterinyaberwarna merah

Gambar 6.Bacillus Sp. ( 10 x 100 )


64/98

64

PEMBAHASAN

Bakteri atau mikroba lainnya dapat dilihat dengan mikroskop biasa tanpa

pengecatan yaitu dengan cara yang khusus. Pewarnaan negatif, metode ini bukan

untuk mewarnai bakteri tetapi mewarnai latar belakangnya menjadi hitam gelap.

Pada pewarnaan ini, mikroorganisme kelihatan transparan. Tekhnik ini berguna

untuk menentukan morfologi dan ukuran sel. Pewarnaan olesan tidak mengalami

penangai mordant atau penguat warna.

Pada pengamatan pengecatan negatif, nampakBacillussp. Berbentuk basil

atau batang dan merupakan bakteri gram positif. Ini bisa diketahui pada tahap

dekoldrisasi. Pada tahap tersebut warna yang dihasilkan sama dengan warna

utama yaitu warna ungu. Ini menunjukkan bahwa bakteri tersebut memiliki

dinding yang tebal sehingga pada saat bakteri mengalami dehidrasi, pori-porinya

menciut yang akhirnya menyebabkan warna utama tidak bisa keluar.

Pada pengamatan pengecatan gram, bakteri Ralstoniasp. Memiliki warna

bakteri merah muda dan warna latar belakangnya adalah warna putih. Bakteri ini

termasuk dalam gram negatif sedangkan bakteri Bacillus sp. Memiliki warna

merah dan latar belakangnya berwarna putih. Kedua bakteri ini termasuk dalam

Gram negatif.

Perbedaan antara pengecatan Negatif dan pengecatan Gram, pertama

pengecatan negatif merupakan pengecatan yang dilakukan secara tidak langsung.

Dikatakan demikian karena yang dicat adalah latar belakangnya bukan bakterinya,

sedangkan bakterinya sendiri tidak mengalami pengecatan. Pada pengecatan gram

termasuk pengecatan diferensial, artinya pengecatan ini dilakukan untuk


65/98

65

membedakan bakteri-bakteri gram positif dan negatif. Pada pengecatan gram,

kedua bakteri tersebut merupakan bakteri gram negatif karena bakteri yang daya

ikatnya terhadap cat utama tidak kuat sehingga dapat dilunturkan oleh peluntur

oleh cat lawan atau cat penutup.


66/98

66

KESIMPULAN



1. Pewarnaan bakteri dapat dilakukan dengan cara pengecatan negatif danpengecatan gram.

2. Pada pengecatan negatif, Bacillussp. berbentuk batang dan latar belakangnyaungu.

3. Pada pengecatan gram Ralstonia sp. dan Bacillus sp. membentuk warnamerah muda dan merah saja dengan latar belakang keduanya sama-sama

putih,termasuk dalam gram negatif.

4. Perbedaan antara pengecatan negatif dan pengecatan gram adalah pengecatannegatif itu merupakan pengengecatan yang dilakukan secara tidak langsung

sedangkan pengecatan gram termasuk dalam pengecatan diferensial yaitu

pengecatan yang membedakan bakteri-bakteri gram positif dan negatif.

5. Pada bakteriRalstonia sp. danBacillus sp. sama-sama termasuk gram negatifkarena bakteri yang daya ikatnya terhadap cat utama tidak kuat sehingga

dapat dilunturkan oleh peluntur dan dapat diwarnai oleh cat penutup.


67/98

67

ACARA VI

ISOLASI MIKROBA DAN MORFOLOGI MIKROBA

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Suatu mikroba yang hidup dialam terbuka jarang dijumpai tumbuh sebagai

biakan murni. Tetapi pada umumnya dalam populasi campuran dengan mikrobia

lainnya. Untuk mengidentifikasi mikrobia, termasuk pengujian morfologi,

fisiologi, dan serologi, sebelumnya perlu dilakukan isolasi dari habitatnya. Jadi

isolasi suatu mikrobia adalah memindahkan mikrobia tersebut dari lingkungannya

di alam dan dapat menjadi suatu biakan murni.

Di dalam bidang mikrobiologi, untuk dapat menelaah mikrobia, khususnya

skala laboratorium, maka terlebih dahulu mikroba tersebut dapat ditumbuhkan

dalam suatu biakan yang mana didalamnya hanya terdapat mikroba yang

dibutuhkan tersebut tanpa adanya kontaminasi dari mikroba lainnya. Oleh karena

itu, perlu dilakukannya praktikum ini, agar kita dapat mengetahui tekhnik-tekhnik

isolasi dan morfologi dari mikroba tersebut.

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui dan dapat

melakukan beberapa cara dalam mengisolasi mikroba, dan untuk mengetahui

pertumbuhan mikroba, mengamati bentuk-bentuk dan sifat karakteristiknya jika

ditumbuhkan dengan tekhnik-tekhnik isolasi.


68/98

68

TINJAUAN PUSTAKA

Mikroorganisme terdapat dimana-mana, jadi persiapan untuk biakan murni

tidak saja isolasi mikroorganisme tertentu dari populasi mikroba campuran di

alam, tetapi juga pemeliharan individu yang diisolasi itu dan keturunannya pada

lingkungan buatan, dan di dalamnya dicegah pemasukan mikroorganisme lain.

Mikroorganisme tidak memerlukan banyak ruangan untuk perkembangannya,

sebab itu media buatan dapat dimasukkan ke dalam sebuah tabung percobaan,

labu, atau cawan petri. Ketiga jenis ini sangat umum digunakan untuk

membiakkan mikroorganisme. Pada permulaanya bejana biakan harus dijadikan

steril (bebas dari setiap mikroorganisme yang hidup) dan setelah diamasukkan

jenis mikroorganisme yang diinginkan, bejana itu harus dilindungi terhadap

kontaminasi yang berasal dari luar atau sumber utama pencemaran dari luar

adalah udara, yang selalu mengandung mikroorganisme yang berterbangan

(Stanier, 1982).

Mikroorganisme dibiakkan di laboratorium pada bahan nutrient yang

disebut medium. Banyak sekali medium yang tersedia macamnya yang dipakai

bergantung pada banyak faktor, salah satu diantaranya ialah macam

mikroorganisme yang akan ditumbuhkan (Pelczar, 2008).

Pekerjaan memindahkan mikroba dari medium lama ke medium yang baru

harus di laksanakan secara teliti. Terlebih dahulu harus diusahakan agar semua

alat-alat yang ada sangkut pautnya dengan medium dan pekerjaan inokulasi

(penanaman) itu benar-benar steril. Hal ini untuk menghindarkan kontaminasi,

yakni masuknya mikroorganisme yang tidak kita inginkan. Beberapa langkah


69/98

69

pada pekerjaan inokulasi dan isolasi mikroba adalah sebagai berikut, menyiapkan

ruangan, pemindahaan dengan kawat inokulasi, dan pemindahan dengan pipet.

Menyiapkan ruang; ruang tempat inokulasi harus bersih, dan bebas angin. Pada

waktu mengadakan inokulasi, baik sekali bila meja tempat inokulasi didasari

dengan kain basah. Dinding ruang yang basah menyebabkan butir-butir debu

menempel. Pekerjaan inokulasi dapat dilakukan di dalam suatu kotak berkaca

(enkas). Dialam bebas tidak ada mikroba yang hidup sendiri atau terlepas dari

spesies yang lain. Sering kali mikroba patogen kedapatan secara bersama-sama

dengan mikroba saprobe (saprobakteri). Dalam teknik biakan murni tidak saja

diperlukan bagaimana memperoleh suatu biakan murni, tetapi juga bagaimana

memelihara serta mencegah pencemaran dari luar. Medium untuk membiakan

mikroba haruslah steril sebelum digunakan. Pencemaran (kontaminasi) dari luar

terutama berasal dari udara yang mengandung banyak mikroorganisme. Teknik

biakan murni untuk suatu spesies dikenal dengan beberapa cara, yaitu, cara

pengenceran, cara penuangan, cara penggoresan. Cara pengenceran, cara ini

pertama dilakukan oleh Lister pada tahun 1865. Lister berhasil memelihara murni

Streptococcus lactis yang diisolasi dari susu yang sudah masam. Caranya adalah

dengan mengencerkan suatu suspensi yang berupa campuran bermacam-macam

spesies kemudian diencerkan dalam suatu tabung tersindiri. Dari pengenceran ini

kemudian diambil 1 ml untuk diencerkan lebih lanjut (Waluyo, 2007).

Cara penuangan yaitu, terdiri atas penginokulasian biakan campuran

kedalam tabung uji yang mengandung agar mencair yang telah didinginkan pada

suhu 45o C. Isinya diaduk untuk memencarkan bakteri keseluruhan medium.


70/98

70

Campuran itu kemudian dituangkan kedalam cawan petri steril dan dibiarkan

menjadi padat. Secara alternatif, inokulum ditempatkan pada cawan petri kosong

dan medium yang mencair dituangan diatasnya. Cawan ini diputar untuk

mencampur isinya sebelum medium menjadi padat (Volk dan Wheeler, 1988).

Cara penggoresan, cara ini dilakukan pada medium pembiakan padat

bentuk lempeng. Bila dilakukan dengan baik cara ini adalah cara yang paling

praktis. Setiap laboratorium memiliki cara atau metode pengerjaan yang berbeda-

beda, tetapi tujuannya adalah sama, yaitu untuk membuat garis sebanyak mungkin

pada permukaan lempeng medium pembiakan dengan ose atau jarum bahan

pemeriksaan yang terlepas pada garis-garis terakhir koloni-koloni bakteri yang

terbentuk akan terpisah agak jauh (Irianto, 2006).


71/98

71



Praktikum ini dilaksanakan pada hari Kamis, 14 Desember 2012 di

Laboraturium Mikrobiologi dan Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas

Mataram.


a. Alat-alat praktikumAdapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah cawan petri,

lampu spiritus, pipet mikro, jarum enten, jarum ose, dan driglaski.

b. Bahan-bahan praktikumAdapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah alkohol,

Bacillus sp, Ralstonia sp, Trichoderma sp, danFusarium sp.

Prosedur Kerja

a. Metode Goresan1. Diambil satu ose suspensi biakan bakteri secara aseptis, kemudian

digoreskan ujung ose sehalus mungkin diatas permukaan medium.

2. Diberi label pada masing-masing cawan petri.3. Diinkubasi selama 3 hari.4. Diamati bantuk-bentuk pertumbuhan koloni bakteri hasil inkubasi.

b. Metode Sebaran


72/98

72

1. Diambil 0,1 ml suspensi biakan bakteri dengan mikro pipet steril dandiletakkan diatas permukaan medium.

2. Diratakan biakan dipermukaan dengan driglaski.3. Diberi label pada masing-masing cawan petri.4. Diinkubasi selama 3 hari.5. Diamati bentuk-bentuk pertumbuhan koloni bakteri hasil inkubasi.

c. Metode Taburan1. Diambil 1 ml suspensi bakteri dengan pipet mikro steril dan diletakkan

dalam cawan petri.

2. Dituangkan secara aseptis medium NA yang sudah disiapkan kedalamcawan petri steril dan digoyangkan cawan petri dengan arah memutar di

atas permukaan meja untuk meratakan penyebaran biakan.

3. Diinkubasi selama 3 hari.4. Diamati bentuk perubahan koloni bakteri.

d. Isolasi Jamur1. Diambil suspensi jamur dengan jarum enten secara aseptis.2. Diletakkan pada media PDA yang steril.3. Diinkubasi selama 3 hari.4. Diamati bentuk perubahan jamur.


73/98

73

HASIL PENGAMATAN

Hasil Pengamatan

Tabel. 6.1. Hasil Pengamatan Perubahan Bentuk Jamur.

Hari

ke -

Trichoderma Sp. Fusarium Sp.

Diameter (cm) Warna Diameter (cm) Warna

Pertama 2,55 Putih 1,45 Putih

Kedua 7Putih

Kehijauan2,8 Putih

Ketiga 8,95 Hijau 4,45 Putih

Tabel. 6.2. Hasil Pengamatan Bentuk Pertumbuhan Koloni Bakteri

ParameterBacillus Sp.

Sebar Tabur Gores

Bentuk (dari

atas)Bulat-bulat Titik-titik Bulat-bulat

Tepi Koloni

(dari samping)Utuh Utuh Berkelompok

Permukaan

Koloni (dari

samping)

Datar - Melengkung

WajahPermukaan

Suram - Mengkilap

Kepekatan Lunak - Lunak seperti lender

Warna Putih Bening Putih Kekuningan


74/98

74

Tabel. 6.3. Hasil Pengamatan Bentuk Pertumbuhan Koloni Bakteri

Parameter Ralstonia Sp.

Sebar Tabur Gores

Bentuk (dari atas) Tak teratur Bulat-bulat Titik-titik

Tepi Koloni (dari

samping)

Berkelompok Utuh Rata

Permukaan

Koloni (dari

samping)

Timbul datar Timbul datar Mencembung

Wajah Permukaan Suram Suram Suram

Kepekatan Lunak Lunak sepertimentega

Lunak

Warna Putih Kekuningan Putih Kekuningan Putih Kekuningan


75/98

75

PEMBAHASAN

Isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikrobia dengan mikrobia

lainnya yang terdapat di alam dan menumbuhkannya dalam suatu medium

buatan. Beberapa cara yang dilakukan untuk mengisolasi mikroorganisme yaitu

seperti dengan cara goresan, tabur, sebar, pengenceran, serta mikropanipulatur.

Pada pengamatan yang menggunakan cara sebar yaitu mendapatkan hasil,

pada bakteriBacillus sp. berbentuk bulat sedangkan padaRalstonia sp. tak teratur.

Dilihat dari tepi koloni Bacillus sp. utuh dan Ralstonia sp. berkelompok. Pada

permukaan koloniBacillus sp.datar sedangkanRalstoniasp.timbul datar, wajah

permukaan pada Bacillussp.dan Ralstoniasp.sama-sama suram. Kepekatannya

sama-sama lunak dan warna yang terbentuk pada Bacillus sp. adalah putih

sedangkanRalstoniasp.putih kekuningan.

Pada cara taburanBacillus sp.berbentuk titik-titik sedangkanRalstonia sp.

bulat-bulat. Tepi koloninya sama-sama utuh, kemudian pada permukaan koloni

pada Bacillus sp.utuh sedangkan Ralstonia sp. timbul datar. Wajah permukaan

sama-sama suram, kepekatannya pada Bacillus sp. lunak, Ralstonia sp. lunak

seperti mentega. Dan warna yang terbentuk pada Bacillus sp. yaitu bening

Ralstonia sp.putih kekuningan.

Pada pengamatan menggunakan cara gores pada dasarnya dilakukan

dengan cara menggoreskan suspensi bahan yang mengandung bakteri pada

permukaan medium agar dalam cawan petri steril atau tabung reaksi (medium


76/98

76

agar miring) dan alat yang digunakan untuk teknik goresan adalah ose. Pada

pengamatan ini didapatkan hasil bakteri Bacillus sp.bentuknya bulat sedangkan

Ralstonia sp. titik-titik. Di lihat dari tepi koloninya Bacillus sp. berkelompok

sedangkan Ralstonia sp. rata. Permukaan koloninya melengkung dan

mencembung. Wajah permukaan sama-sama suram, kepekatannya sama-sama

lunak dan wana keduannya sama-sama putih kekuningan.

Dari setiap metode isolasi akan menghasilkan morfologi yang berbeda-

beda walaupun bakteri yang digunakan sama. Hal itu dikarenakan perlakuan yang

berbeda-beda pada setiap metode.

Pada pengamatan perubahan bentuk jamur, didapatkan hasil pada bakteri

Trichorderma Sp. Pada hari pertama didapatkan diameternya 2,55 cm dan

warnanya putih, hari kedua diameternya bertambah atau tumbuh menjadi 7 cm

dan warnanya pun berubah menjadi putih kehijauan, hari ketiga diameternya terus

tumbuh hingga mencapai 8,95 cm dengan warna hijau. Sedangkan pada jamur

Fusarium Sp. Pada hari pertama diameternya 1,45 cm dengan warna putih, hari

kedua 2,8 cm dan hari ketiga 4,45 cm dengan warna yang sama atau tetap yaitu

putih. Dari hasil pengamatan yang didapat dari kedua jamur tersebut yaitu jumlah

diameter dari Trichorderma Sp. lebih besar dari pada Fusarium sp., hal ini terjadi

karena pertumbuhan optimumnya pada bakteri Trichorderma sp. lebih cepat

dalam pengamatan selama 3 hari tersebut karena setiap jamur pertumbuhannya

berbeda-beda.


77/98

77

KESIMPULAN


beberapa kesimpulan berbagai berikut:

1. Isolasi mikroba adalah memisahkan jenis mikroba dengan mikroba lainnyayang terdapat dialam dalam suatau medium-medium.

2. Ada beberapa cara yang digunakan dalam praktikum ini yaitu dengan caragoresan, tabur, dan sebar.

3. Dari hasil pengamatan pada praktikum isolasi dan morfologi bakteri inimendapat hasil yang berbeda-beda walaupun menggunakan media yang sama.

4. Pada pengamatan perubahan bentuk mikroba didapat hasil diameter dariTrichorderma sp.2,55 cm hari pertama, hari kedua 7cm, dan ketiga 8,95 cm

dengan warna hari pertama yaitu putih, kedua putih kehijauan, dan ketiga

hijau.

5. Fusarium sp. diameternya 1,45 cm pada hari pertama, kedua 2,8 cm danketiga 4,45 cm dengan warna yang tetap yaitu putih.

6. Diameter pada hari ketiga, jamur Trichorderma sp. lebih besar daripadaFusarium sp.


78/98

78

ACARA VII

PERHITUNGAN JUMLAH DAN PENENTUAN UKURAN MIKROBIA

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Mikroorganisme merupakan makhluk hidup yang sangat banyak, baik

ditanah, air, maupun udara. Penyebaran mikroorganisme yang tumbuh pada bahan

hasil pertanian atau pada hasil olahannya. Umumnya terdiri dari bakteri,

jamur/kapang, virus dan disamping itu terdapat juga binatang satu sel.

Pertumbuhan dan perkembangan mikroorganisme dalam bahan atau makanan,

akan menyebabkan perubahan-perubahan tertentu yaitu, perubahan yang bersifat

fisik dan kimiawi, sebagai contoh yaitu, konsistensi bahan menjadi lunak, timbul

gas atau aroma tertentu dan zat racun yang membahayakan. Jumlah penyebaran

bakteri/mikroorganisme pada bahan atau makanan yang sedang mengalami

pembusukan sangat bervariasi jumlahnya dan tidak sama jenis (spesies)nya serta

tegantung pada varietas, habitat, susunan kimia, cara penanganan, suhu

penyimpanan dan lain-lain. Oleh karena itu, perlu dilakukan pengamatan dan

perhitungan mikroba, sehingga penyebaran mikroba dapat diketahui dan ukuran

dari mikroba tersebut juga dapat diketahui.

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui jumlah dan

menentukan ukuran mikroba


79/98

79

TINJAUAN PUSTAKA

Haemocytometer ditemukan oleh Louis Charles dan terdiri dari sebuah

slide mikroskop kaca tebal dengan lekukan persegi panjang yang menciptakan

sebuah kamar. Ruangan atau kamar tersebut diukir dengan laser grid tergores

garis tegak lurus. Perangkat tersebut dibuat dengan hati-hati sehingga daerah yang

dibatasi oleh garis diketahui dan kedalaman ruang tersebut telah diketahui. Oleh

karena itu, alat tersebut berguna untuk menghitung jumlah sel atau partikel dalam

suatu volume cairan tertentu, sehingga dapat menghitung konsentrasi dalam cairan

secara keseluruhan (Pelczar, 2011).

Haemocytometer sering digunakan untuk menghitung sel-sel darah,

organel dalam sel, sel-sel darah dalam cairan tulang punggung ke otak setelah

melakukan tusukan lumbal atau jenis sel lain (Waluyo, 2009).

Cara menghitung sel individu didalam volume sangat kecil biasanya

dilakukan dengan Counting Chamber. Counting Chamberdiatur sedemikian rupa

sehingga kotak-kotak dengan luas tertentu dengan lapisan cairan dengan

kedalaman yang diketahui dapat dimasukkan diantara gelas objek dengan gelas

tutup. Akibatnnya volume cairan yang menutupi setiap kotak diketahui dengan

tepat. Perhitungan langsung ini dikenal dengan jumlah sel total (Stainer, 2007).

Pada perhitungan mikroskopis langsung, sampel ditaruh disuatu ruang

hitung sepertiHaemocytometerdan jumlah sel ditentukan secara langsung dengan

bantuan mikroskop. Keuntungan metode ini ialah pelaksaannya adalah cepat dan

tidak memerlukan banyak peralatan. Namun kelemahannya ialah tidak dapat


80/98

80

membedakan sel-sel yang hidup dan yang mati. Dengan perkataan lain hasil yang

diperoleh ialah jumlah total sel yang didalam populasi (Campbell, 2009).

Perhitungan jumlah koloni atau mikroorganisme dengan cara Reable

Count atau disebut juga sebagai standar plate countdidasarkan asumsi, bahwa

setiap sel mikroorganisme hidup dalam suspensi akan tumbuh menjadi satu koloni

setelah diinkubasi dalam media biakan dan lingkungan yang sesuai. Setelah masa

inkubasi, jumlah koloni yang tumbuh dihitung dan merupakan perkiraan atau

dugaan dari jumlah mikroorganisme dalam suspensi tersebut (Bibiana, 2010).


81/98

81



Praktikum ini dilaksanakan pada hari Kamis 13 Desember 2012 di

Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Fakultas Pertanian Uviversitas

Mataram.


a. Alat-alat praktikumAdapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah mikroskop,

Haemocytometer,pipet tetes dan gelas penutup.

b. Bahan-bahan praktikumAdapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah suspensi

biakan Trichodermasp.dan Fusarium sp..

Prosedur Kerja

1. DibersihkanHaemocytometerdan dikeringkan.2. Ditempatkan gelas penutup padaHaemocytometertepat pada petak-petaknya.3. Diambil suspensi jamur dengan pipet tetes dan didekatkan ujung pipet pada

bagian berlekuk padaHaemocytometer.

4. Diamati pada mikroskop pada pembesaran sedang.5. Dihitung jumlah sel jamur pada 5 bidang pandang.


82/98

82

HASIL PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN

Hasil Pengamatan

Gambar 8.1. Trichoderma sp.(40 X 10)

Deskripsi : berbentuk bulat dan berwarna transparan

Gambar 8.2. Fusarium Sp.( 40 X 10)Deskripsi : Berbentuk bulan sabit, ujungnya tidak runcing dan berwarna

transparan

Perhitungan


83/98

83

Tabel 8.1. Hasil Pengamatan Jumlah Trichoderma sp. pada

Haemocytometer

Bidang Pandang Jumlah Mikroba

1 14

2 23

3 45

4 56

5 25

Jumlah 163

Total Sel 8,2 X 106

Jumlah sel mikroba = 163 X 5

= 815/0,1 mm2

= 8.150 mm2

= 8.150 X 1000

= 8.150.000 ml

= 8,2 X 106sel/ml

Tabel 8.2. Hasil Pengamatan Jumlah Fusarim sp. pada Haemocytometer

Bidang Pandang Jumlah Mikroba

1 5

2 14

3 30

4 15

5 3

Jumlah 67

Total Sel 3,4 X 106

Jumlah sel mikroba = 67 X 5

= 335/0,1 mm2

= 3.350 mm2

= 3.350 X 1000

= 3.350.000 ml

= 3,4 X 106sel/ml


84/98

84

PEMBAHASAN

Mikroba ialah jasad renik yang mempunyai kemampuan sangat

baik untuk bertahan hidup. Jasad tersebut dapat hidup hampir disemua

tempat dipermukaan bumi. Penentuan jumlah angka mikroorganisme

sangat penting dilakukan. Berbagai metode telah dikembangkan untuk

menghitung jumlah mikroorganisme. Metode tersebut menghitung jumlah

sel, massa sel atau isi sel yang sesuai dengan jumlah sel. Salah satu dari

metode tersebut adalah perhitungan langsung (Direct Count)

(Bibiana,2010).

Perhitungan langsung (direct count) digunakan untuk jumlah sel

atau biomassa mikroorganisme dan sel dihitung langsung dibawah

mikroskop atau perhitungan partikel elektronik (electronik particle

counter). Metode perhitungan langsung dapat menggunakan Counting

Chamber. Perhitungan ini dapat menggunakan Haemocytometer,

Peroffhauser Bacterial Counter atau alat-alat yang sejenis. Pada praktikum

ini digunakan Haemocytometer untuk menghitung jumlah miroba.

Haemocytometer ialah perangkat atau alat yang berfungsi untuk

menghitung jumlah sel serta partikel mikroskopis lainnya.

Haemocytometer memiliki kelemahan dan kelebihan dalam

penggunaannya dalam proses perhitungan bakteri secara langsung.

Kelebihannya antara lain ialah cepat dalam menghasilkan data dan tidak

perlu menunggu lama, serta datanya atau jumlah selnya langsung didapat


85/98

85

pada saat itu juga setelah menghitung menggunakan rumusnya dan

menghemat biaya. Sedangkan kelemahannya ialah tidak dapat

membedakan sel yang hidup dan yang mati karena perhitungan secara

keseluruhan dan data yang dihasilkan tidak akurat karena setiap pengamat

memiliki mata yang berbeda-beda dan terdapat keterbatasan dalam melihat

serta menghitung sel yang ada dalam kamar Haemocytometer (Waluyo,

2009). Dalam pengamatan ini digunakan dua bakteri yaitu Fusarium sp.

dan Trichoderma sp.. Dari hasil pengamatan dapat diketahui bahwa

jumlah sel yang terdapat dalam kamar Haemocytometer untuk Fusarium

sp.adalah 3,4 X 106sel/ml dan untuk Trichoderma sp.adalah 8,2 X 10

6

sel/ml. Terjadinya perbedaan jumlah dalam perhitungan pada kamar

Haemocytometer disebabkan oleh beberapa faktor, salah satunya adalah

pada saat pengambilan mikroba menggunakan mkropipet untuk diletakkan

padaHaemocytometer.


86/98

86

KESIMPULAN



1. Perhitungan langsung digunakan untuk jumlah sel atau biomassamikroorganisme dan sel dihitung langsung dibawah mikroskop.

2. Haemocytometer adalah perangkat atau alat yang berfungsi untukmenghitung jumlah sel suatu partikel mikroskopis lainnya.

3. Jumlah sel Fusariumsp. adalah 3,4 x 106sel/ml.4. Jumlah sel Trichodermasp. adalah 8,2 x106sel/ml.5. Salah satu faktor terjadinya perbedaan jumlah mikroba pada kamar

Haemocytometer adalah pada saat pengambilan mikroba

menggunakan mikro pipet.


87/98

87

ACARA VIII

PENGARUH FAKTOR LINGKUNGAN

TERHADAP PERTUMBUHAN MIKROBA

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Populasi mikroba di alam sekitar kita sangat banyak, mereka berasal dari

air, tanah dan atmosfer. Masing-masing mikroorganisme memiliki cara tersendiri

utnuk hidup mulai dari lingkungan maupun cara untuk hidup.Kehidupan

mikroorganisme pada umumnya sangat tergantung pada faktor lingkungan. Faktor

lingkungan ini meliputi faktor biotik dan faktor abiotik.Faktor abiotik adalah

faktor luar seperti pada pengaruh suhu, pengaruh pH, pengaruh tekanan osmose

dan lain-lain. Sedangkan pengaruh faktor biotik adalah dari mikrooganisme itu

sendiri.

Faktor-faktor biotik tersebut meliputi faktor fisik (suhu, pH, tekanan

osmose) faktor kimia (senyawa racun), dan faktor biologi (interaksi dengan

mikroorganisme lainnya). Faktor inilah yang sering terjadi dan dialami di dalam

pertumbuhan suatu mikroorganisme yang banyak dari organisme tersebut suatu

senyawaan dapat berlaku sebagai sumber energi.Oleh karena itu dilakukan

percobaan ini, untuk mengetahui bagaimana pengaruh lingkungan sehingga

mikroorganisme tersebut dapat hidup dan berkembangbiak untuk melangsungkan

kehidupannya.


88/98

88

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah Untuk mengetahui temperatur

minimum, optimum dan maksimum terhadap pertumbuhan mikroba.


89/98

89

TINJAUAN PUSTAKA

Dari pengaruh suhu pada kecepatan reaksi kimia, dapat diramalkan

bahwa semua bakteri dapat melanjutkan tumbuhnya (meskipun dengan

kecepatan yang semakin lama semakin lebih rendah). Selama suhu

diturunkan sampai sistem itu membeku akan tetapi kebanyakan bakteri

berhenti tumbuh pada suhu (suhu minimum untuk tumbuh). Jauh diatas

titik beku air setiap mikroorganisme mempunyai suhu yang tepat untuk

pertumbuhan, tetapi dibawah suhu ini pertumbuhan tidak terjadi

berapapun lamanya masa inkubasi (Stanier, 1984).

Nilai suhu kardinal menurut angka (minimum, optimum dan

maksimum) dan kisaran suhu yang memungkinkan pertumbuhan sangat

beragam pada bakteri. Beberapa bakteri yag diisolasi dari air sumber air

panas dapat tumbuh pada suhu setinggi 95C yang diisolasi dari

lingkungan dingin dapat tumbuh pada suhu rendah -10C, jika konsentrasi

solut yang tinggi mencegah mediumnya jadi beku. Berdasarkan kisaran

suhu tumbuh bakteri sering kali dibagi atas tiga golongasn besar

diantaranya Termofilyang tumbuh pada suhu tinggi (diatas 55C), Mesofil

yang tumbuh baik antara 20C sampai 45C dan Psikrofil yang tumbuh

baik pada suhu 0C (Volk & Wheeler, 1984).

Bakteri memerlukan tekanan osmotik yang sangat berbeda-beda.

Beberapa dapat tumbuh dalam larutan encer sekali dan beberapa dalam

larutan jenuh dengan larutan klorida. Mikroorganisme yang dapat tumbuh

dalam larutan osmolaritas yang tinggi dinamak

laporan tetap mikrobiologi umum kelompok i

Documents