bab iv.percobaan mikrobiologi farmasi semester 4

7/23/2019 BAB IV.percobaan mikrobiologi farmasi semester 4

1/36

PERHITUNGAN KUANTITATIF MIKROORGANISME

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Mikrobiologi adalah suatu cabang ilmu biologi yang mempelajari

tentang mikroorganisme dan interaksi mereka dengan organisme lain

dan lingkungannya.

Selama 40 tahun terakhir, mikrobiologi muncul

sebagai bidang biologi yang sangat berarti karena mikroorganisme

digunakan oleh para peneliti dalam meneliti hampir semua gejala

biologis yang utama. Mikrobiologi mengalami perkembangan yang pesat

setelah ditemukannya mikroskop oleh Antony Van Leeuwenhoek !"#$ %

!&$#'. Selain itu jatuhnya teori abiogenesis oleh teori biogenesis yang

membuat orang yakin bahwa pembusukan itu disebabkan oleh

mikroorganisme.

Seperti yang telah kita ketahui bakteri berasal dari kata

bakterion, dalam bahasa (unani itu berarti tongkat atau batang.

Sekarang nama itu dipakai untuk menyebut sekelompok mikroorganisme

yang bersel satu, tidak berkloro)il, berbiak dengan pembelahan diri,

serta demikian kecilnya sehingga hanya tampak dengan mikroskop pada

dunia mikrorganisme terbagi atas berbagai jenis. Seperti bakteri,

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! 1


2/36


proto*oa, alga, )ungi dan lain+lain. Selain bakteri didalam air juga

sering terdapat atau ditemukan pertumbuhan mikroorganisme lain

seperti kapang dan proto*oa dengan jumlah yang lebih terbatas

dibandingkan dengan bakteri.

Mikroorganisme merupakan jasad hidup yang mempunyai ukuran

sangat kecil. Setiap sel tunggal mikroorganisme memiliki kemampuan

untuk melangsungkan aktiitas kehidupan antara lain dapat mengalami

pertumbuhan, menghasilkan energi dan bereproduksi dengan

sendirinya. Mikroorganisme memiliki )leksibilitas metabolisme yang

tinggi karena mikroorganisme ini harus mempunyai kemampuan

menyesuaikan diri yang besar sehingga apabila ada interaksi yang tinggi

dengan lingkungan menyebabkan terjadinya konersi *at yang tinggi

pula. Akan tetapi karena ukurannya yang kecil, maka tidak ada tempat

untuk menyimpan en*im+en*im yang telah dihasilkan.

-erkembangnnya ilmu pengetahuan, maka semakin tinggi pula rasa

ingin tahu seseorang terhadap apa yang terdapat di alam sampai pada

mikrooorganisme yang tak dapat di lihat dengan mata telanjang atau

berukuran kecil. ari hal inilah muncul ilmu pengetahuan yang

mempelajari tentang mikroorganisme tersebut yang disebut dengan

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! "


3/36


mikrobiologi. /ara peniliti mulai mencari tahu akan apa yang

terkandunng pada mikroorganisme tersebut. alam bidang penelitian

mikroorganisme ini, tentunya menggunakan teknik atau cara+ cara

khusus untuk mempelajarinya serta untuk bekerja pada skala

laboratorium untuk meneliti mikroorganisme ini baik si)at dan

karakteristiknya.

umlah mikroorganisme yang ada di dalam suatu bahan sangat

berariasi, tergantung dari jenis bahan itu sendiri dan kondisi

lingkungannya. umlah mikroorganisme dapat dihitung dengan beberapa

cara yaitu seara langsung dan secara tidak langsung. /ada percobaan

ini 1perhitungan kuantitas mikroorganisme1 kita akan melakukan

perhitungan jumlah bakteri dan kapang yang terdapat pada beberapa

makanan yang mungkin sering kita konsumsi setiap harinya.



4/36


B. Maksud percobaan

Maksud dari percobaan ini adalah untuk mengetahui dan

memahami cara perhitungan kuantitas mikroorganisme pada suatu

sampel tertentu.

2. Tujuan

3ujuan pada praktikum mor)ologi mikroorganisme ini adalah cara

menentukan jumlah angka lempeng total AL3' dan uji M/ dari

beberapa sampel.

D. Prinsip percobaan

/rinsip dari percobaan ini adalah menghitung jumlah

mikroorganisme jamur dan bakteri yang tumbuh pada sampel susu

dencow bubuk, sirup marjan, roti boy,pasta gigi pepsodent dan bubu

somay yang berbeda+beda.

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! #


5/36


BAB II

TINAUAN PU!TA"A

A. TE#$I UMUM

Mikrobiologi adalah ilmu pengetahuan tentang mahluk hidup

yang kecil atau jasad+jasad renik Adam, !55$'. /embiakan sel secara

luas digunakan untuk penelitian dan diagnosis. -erbagai media yang ada

sangat menarik untuk dipakai pada penelitian. 6al ini disebebkan

mudahnya memonitor respon sel pada berbagai media,yang medianya

sendiri muda dimodi)ikasi dalam berbagai kondisi. /ada lingkup

diagnostik, pembiakan sel dapat digunakan misalnya untuk menyiapkan

paparan kromosom pada analisis sitogenik 7nderwood, !555'.

Mikroorganisme ini sendiri tidak hanya bersi)at toleran

terhadap suhu lingkungannya yang bersi)at ekstrim tetapi juga mampu

untuk bertahan hidup dan berkembangbiak pada kondisi suhu yang

ekstrim tersebut. Mikroorganisme termo)ilik menjadi pilihan yang baik

sebagai sumber en*im termostabil. Aplikasi en*im didalam bioteknologi

semakin menuntut en*im yang bersi)at tahan lingkungan. 8arena )aktor

utama yang paling merusak en*im adalah suhu, maka usaha pertama



6/36


yang akan dilakukan adalah mencari mikroba penghasil en*im+en*im

termo)ilik dari berbagai sumber alam 9ahyuna,$0!$'.

Aktiitas dari pertumbuhan mikroba dalam media berminyak

akan menentukan pemilihan isolat terbaik. 8arakterisasi isolat bakteri

dilakukan melalui serangkaian uji biokimia meliputi uji gram, uji

hemolisis:blood agar, uji gula+gula, uji 3S;A, uji indol, uji 6$S, uji

motilitas, uji simon sitrat, uji oksidase, uji katalase dan uji balik

anuar,$0!#'.

-anyak senyawa organik berwarna *at pewarna' digunakan untuk

mewarnai mikroorganisme untuk pemeriksaan mikroskopis.3elah

dikembangkan prosedur+prosedur pewarnaan untuk mengamati dengan

lebih baik tampang mor)ologi mikroorganisme secara kasar,

mengidenti)ikasi bagian+bagian struktural sel mikroorganisme, dan

membantu mengidenti)ikasi juga membedakan organisme yang serupa.

Sedangkan langkah+langkah utama dalam mempersiapkan spesimen

mikroba yang diwarnai untuk pemeriksaan mikroskopik antara lain,

penempatan olesan atau lapisan tipis spesimen pada kaca objek, )iksasi

olesan itu pada kaca objek, serta aplikasi tunggal pewarnaan

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! $


7/36


sederhana' atau serangkaian larutan pewarna atau reagen pewarnaan

di)erensial' /elc*ar dan 2han, !5


8/36


Sel mikroba mempunyai struktur yang terdiri dari membran luar,

dinding sel dan inti sel. Membran luar terdiri dari lipoprotein, lipid dan

karbohidrat. inding sel tersusun dari senyawa organik kompleks yang

disebut dengan peptidoglikan murein'. Sedangkan membran sel disusun

oleh dominan senyawa )os)olipid dan lipoprotein. Spesies radikal

reakti) =>S' yang terdiri dari >6 dan >$' dihasilkan dari proses

)otogenerasi pada permukaan titania merupakan *at oksidati) yang

kuat untuk mendegradasi senyawa organik dari dinding dan membran

sel bakteri =ilda,dkk,$0!0'

/engukuran kuantitati) populasi mikroba sering kali amat

diperlukan didalam berbagai macam penelaan mikrobiologis, pada

hakekatnya terdapat dua macam pengukuran dasar, yaitu penentuan

jumlah sel dan penentuan massa sel. /engukuran jumlah sel biasanya

dilakukan bagi organisme bersel tunggal misalnya bakteri' sedangkan

penentuan massa sel dapat dilakukan tidak hanya organisme bersel satu

tetapi juga bagi organisme ber)ilamen misalnya kapang'. Ada beberapa

macam cara untuk mengukur jumlah sel antara lain dengan hitungan

cawan plate count', hitungan mikroskopis langsung direct microskopic



9/36


count' atau elektronis dengan bantuan alat yang disebut perhitungan

coulter 6adioetomo,!55"'.

-eberapa jamur yang penting dari segi klinis tidak dapat tumbuh

pada suhu #? sampai #&@2 atau memerlukan waktu lebih dari &$ jam

untuk membentuk koloni yang dapat dilihat. Secara umum, biakan jamur

harus diinokulasikan ke suatu medium yang tidak mengandung bahan

antimikroba misal agar dekstrosa Sabouraud' suatu medium yang

mengandung hanya bahan antimikroba misal agar kapang inhibitorik'

dan suatu medium yang mengandung darah, obat antimikroba dan obat

antijamur sikloheksimid Sacher, $00$'.

/erhitungan umlah -akteri dilakukan dengan metode cawan

tuang. Selanjutnya koloni yang tumbuh dihitung dengan menggunakan

colony counter kemudian dikonersi sesuai seri pengencerannya jumlah

koloni yang dihitung #0%#00 koloni bakteri cawan+!' umlah bakteri

dihitung dengan menggu+nakan persamaan Andy,$0!0'.

-akteri non patogen umumnya termasuk dalam kelompok bakteri

heterotro)ik. -akteri heterotro)ik pada suatu perairan menjadi salah

satu indikator akti)itas penguraian senyawa organik yang menunjukkan

kesuburan perairan dan berkaitan dengan pakan alami bagi biota laut.

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! &


10/36


-akteri heterotro)ik di lingkungan laut berperan sangat ital sebagai

dekomposer yang menguraikan material organik menjadi komponen yang

lebih. sederhana sebagai unsur hara yang esensial Aksornkoe, !55#'.

-eberapa jenis bakteri heterotro)ik antara lain /seudomonas,

Micrococcus,Sarcina,Staphylococcus dan Blaobacterium;ndah,$0!#'.

;ndicator sanitasi lingkungan selain jumlah bakteri total juga

jumlah koli)orm. -akteri yang termasuk ke dalam kelompok koli)orm

adalahCscherichiacoli,Cdwardsiella,2itrobacter, lebsiella,Cnterobacter,

6a)nia, Serratia, /roteus,Ari*ona, /roidence,/seudomonas dan -acil

paracolon. /opulasi mikroorganisme dalam sludge dipengaruhi oleh

kelangsungan proses pembentukan biogas, sedangkan proses

pembentukan biogas dipengaruhi oleh tersedianya bahan organic dalam

substrat2: rasio' dan aktiitas mikroorganisme. 2: rasio yang

tinggi akan memperlambat proses penguraian, sebaliknya jika 2: rasio

terlalu rendah maka karbon akan segera habis dan proses degradasi

anaerob berhenti dan akan mengakibatkan pertumbuhan

mikroorganisme terganggu -enito,dkk,$0!0'

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! 1'


11/36


B. Uraian Ba%an

&. Pepton 'Ditjen P#M Edisi I() &**+ , Hal. &&*&-

ama resmi D /eptonama lain D /epton

/emerian D Serbuk, kuning kemerahan sampai coklat, bau

khas tidak busuk

8elarutan D Larut dalam air, memberikan larutan berwarna

coklat kekuningan yang bereaksi asam

/enyimpanan Dalam wadah tertutup baik.

8egunaan D Sebagai komponen pembuat medium /A

. Natriu/ klorida 'Ditjen P#M Edisi I() &**+ , Hal. +01-

ama =esmi D atrii chloridumama Lain D atrium klorida=M:-M D a2l : ?


12/36


=M : -M D 6$> : !


13/36


Sinonim D Alkohol

=M : -M D 2$6">:4",0&

/emerian D 2airan tak berwarna, jernih, mudah menguap

dan mudah bergerak bau khas rasa panas.

Mudah terbakar dengan memberikan nyala biru

yang tidak berasap.

8elarutan D Sangat mudah larut dalam air, dalam kloro)orm

/ dan dalam eter /.

8egunaan D Sebagai antipiretik

/enyimpanan D alam wadah tertutup rapat, terlindung dari

cahaya di tempat sejuk, jauh dari nyala api.

6. Bro/ Ti/ol Blue 'Ditjen P#M. &*5*. 7I Ed. III-

ama =esmi D -=>M 3;M>L -L7C

ama Lain D -iru -romtimol

/emerian D Serbuk kemerahan atau coklat

8elarutan D /raktis tidak larut dalam air, larut dalam

etanol 5?H' p. alam larutan alkali encer.

/enyimpanan D alam wadah tertutup baik

8egunaan D Sebagai ;ndikator



14/36


5. T8een 04 'Ditjen P#M. &*5*. 7I Ed. III-

ama =esmi D /olysorbatum


15/36


$. Marjan8omposisi D gula pasir, air, kosentrasi stroberi,

pengatur keasaman asam sitrat, prasa

stroberi, pewarna./abrik D /3. Lasalle)ood ;ndonesia,epok+

;ndonesia#. Susu ancow

8andungan D *at besi, kalsium *ink, itamin A,

itamin -!, itamin -$, dan itamin -"8omposisi D susu sapi, susu bubuk skim, mineral,

pengemulsi lesitin kedelai, premiks

itamin.

/abrik D /3. estle ;ndonesia,/asuruan+

;ndonesia4. >bat 8uat Semut A)rika

8omposisi D spartaF epimedium )olium ekstrak,

panaF, butea superba root eFtract

powder, L+arginine InS>4. &6$, In

dan ikalsium )os)at/abrik D Ji*ang jin shengli co.Ltd

?. =oty -oy8omposisi D 3epung, susu, gula, telur, mentega,

margarin, sari kopi./abrik D /3.-intang ;ndo aya. akarta+

;ndonesia



16/36


BAB III

MET#DE "E$A

A. Alat

Alat % alat yang digunakan pada percobaan yang di lakukan D

a. -atang pengadukb. -otol gelapc. 2awan petrid. Cnkase. Crlenmeyer $?0 ml). ;nkubatorg. /ipet tetes

h. Sendok tanduki. Spoitj. Spritusk. 3abung reaksil. 3imbangan analitik

B. Ba%an

-ahan+bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah D

a. Alkohol

b. AEuadest

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! 1$


17/36


c. ancowd. 8apase. utrient agar). >bat kuatg. /asta gigih. /otato dekstrose agari. =oti boyj. Saus somayk. Sirup

9. 9ara "erja

&. Pengenceran sa/pel

a. isiapkan alat dan bahan.b.iambil ! gr roti boy.c. i haluskan menggunakan lumping dan alu.

d. imasukkan ke dalam botol pengencer yang berisi 5 mL air

suling pengenceran !0+!', dihomogenkan.e. ipipet larutan sampel pengenceran !0+!sebanyak ! mL lalu

dimasukkan ke dalam botol pengencer yang berisi 5 mL air

suling pengenceran !0+$', dihomogenkan.). iulangi hingga pengenceran !0+#

. Uji ALT bakteri

a. isiapkan alat dan bahanb. iambil # cawan petri steril

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! 1%


18/36


c. iambil ! ml sampel dengan pengenceran !0+!, lalu dimasukkan

kedalam cawan petri dan diberi tanda, begitupun cawan petri

dengan pengenceran !0+$ dan pengenceran !0+4.

d. itambahkan !0 ml medium utrien agar A' kedalam cawan

petri kemudian dihomogenkan, dibiarkan memadat, lalu

dibungkus

e. iinkubasi diinkubator selama ! F $4 jam pada suhu #&02.). iamati jumlah bakteri yang tumbuh dan dihitung nilai S/2

nya2. Uji ALT kapang

a. isiapkan alat dan bahanb. iambil # cawan petri yang steril dan diberi tanda masing+

masing label !0+!, !0+$, !0+#

c. ari botol pengenceran !0+!, !0+$, !0+#, masing+masing cawan

petri diisi ! ml sampel berdasarkan tempat:label

pengencerannyad. itambahkan !0ml medium /A /otato eFtrosa Agar'

kedalam cawan petri kemudian dihomogenkan, dbiarkan

memadat dan diinkubasi pada enkas selama #F$4 jame. iamati jumlah koloni yang tumbuh dan dihitung nilai S/2nya.

1. Uji MPN

a. isiapkan alat dan bahan.



19/36


b. ibuat # seri yaitu seri A, -, dan 2, tiap seri masing % masing

terdiri dari # tabung reaksi yang berisi !0 ml medium L-

Laktosa -roth' dengan tabung durham terbalik didalamnya.c. Seri A untuk pengenceran !0+! , seri - pengenceran !0+$ , dan

seri 2 pengenceran !0+#.d. 7ntuk seri A diambil ! ml larutan sampel dengan pengenceran

!0+! kemudian dimasukkan pada tiap % tiap tabung reaksi lalu

dihomogenkan, diberi perlakuan yang sama untuk seri - dan 2.e. iinkubasi pada suhu #&o 2 selama ! F $4 jam.

). iamati perubahan warna medium yang terjadi dari hijau

menjadi kuning dan timbulnya gelembung gas dalam tabung

durham.

g. ihitung nilai M/ nya.

BAB I(

HA!IL PEN:AMATAN DAN PEMBAHA!AN

A. Hasil penga/atan

&. :a/bar Hasil Penga/atan

a. Metode M/

N# :AMBA$ !AMPEL "ET

! /C/S>C /CGC2C=A

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! 1&


20/36


!0+!

2 /C/S>C /CGC2C=A

!0+$

3 /C/S>C /CGC2C=A

!0+#

4 >-A3 87A3 /CGC2C=A

!0+!

5 >-A3 87A3 /CGC2C=A

!0+$

6 >-A3 87A3 /CGC2C=A

!0+#

7 S;=7/ /CGC2C=A

!0+!

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! "'


21/36


8 S;=7/ /CGC2C=A

!0+$

9

S;=7/ /CGC2C=A!0+#

10 =>3; /CGC2C=A

!0+!

11 =>3; /CGC2C=A

!0+$

12 =>3; /CGC2C=A!0+#

b. Gambar pengamatan Alt

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! "1


22/36

K!t!ra(a()

1* Kapa+

"* ta-( r!a.+/

3* M!0/-m L

#* Ga+ 2a( t!r!(t-.

5* Ta-( 0-ram

LAORATORIUM MIKROIOLOGI

FAKULTAS FARMASI

UNI4ERSITAS HALO OLEO

MEDIUM ) Lat6+a r6t

SAMPEL ) Sparta7


. Tabel %asil penga/atan uji MPN

a. ancow

Sampel ! $ # 3otal M/

!0+! K + +

!0+$

+ + +!0+# + + +

umlah ! 0 0 4

/erhitungan D M/ ilai M/ F1

fptengah

M/ 4 F1

102

WA ODE LISTIAWATI SAERA RINA ADRIYANI S,farm A,ptF1F1 13158 Pa! ""


23/36


4 F !0$

b. =oti boy

Sampel ! $ # 3otal M/

!0+! K K K

!0+$ K K +

!0+# + + +

umlah $ $ ! $

bab iv.percobaan mikrobiologi farmasi semester 4

Documents