lp. kuljar 4 ster alat, mdia, ekspln.docx

7/24/2019 lp. kuljar 4 ster alat, mdia, ekspln.docx

1/10

TEKNIK STERILISASI ALAT, MEDIA DAN EKPLAN

( Laporan Praktikum Kultur Jaringan Tumbuhan )

Oleh

Eka Nurhasanah13170101

JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS LAMPUNG

2015


2/10

LEMBAR PENGESAHAN

Ju!ul Praktikum " Pembuatan #e!ium Tanam

Tanggal Praktikum " 0 Oktober 01$

Tempat Praktikum " Laboratorium Kultur Jaringan

Nama " Eka Nurhasanah

NP# " 13170101

%akultas " #atematika !an &lmu Pengetahuan 'lam

Jurusan " iologi

Kelompok " (lima)

an!ar Lampung* 0 Oktober 01$

#engetahui*

'sisten

'b!i Tauhi! Li+asaputra

NP#, 11701001


3/10

I. PENDAHULUAN

a. Latar Bea!a"#

-terilisasi a!alah salah satu prose!ur .ang !igunakan untuk menghilangkan

mikroorganisme, Kon!isi steril sangat !ibutuhkan !alam keberhasilan kultur

/aringan , Kea!aan steril !ibutuhkan untuk semua botol kultur* me!ia kultur*

peralatan tanam !an ekplan, -alah satu aktor pembatas !alam keberhasilan

kultur /aringan a!alah kontaminasi .ang !apat ter/a!i pa!a setiap saat !alammasa kultur, Eksplan a!alah bagian keil !ari tanaman baik itu sel* /aringan*

ataupun organ .ang !igunakan untuk memulai suatu kultur, Eksplan .ang

!igunakan !i!alam kultur /aringan harus .ang masih mu!a (primor!ia)* sel2

seln.a masih bersiat meristematik, -el2sel .ang bersiat meristematik !iirikan

!engan siatn.a .ang selalu membelah* seln.a berukuran keil tetapi inti

seln.a relatip besar* penuh plasma* auola keil2keil* !in!ing sel tipis ter!iri

!ari !in!ing primitip .ang berupa selulosa miroibril, agian tanaman .ang

bersiat meristematik antara lain ter!apat pa!a u/ung (kunup) batang atau

akar* !ikenal !engan nama meristem apikal* pa!a batang !isebut shoot apial

meristem se!angkan meristem .ang ter!apat pa!a kunup !iketiak !aun

!isebut meristem aksiler, Oleh karena itu !alam praktikum ini akan !ilakukan

teknik sterilisai alat * me!ia !an eksplan* agar praktikan !apat mengetahui ara

sterilisasi .ang baik !an benar,

$. T%&%a"

'!apun tu/uan !ari praktikum ini a!alah agar praktikan memahami tataara

!an !apat melakukan sterilisasi alat !an me!ia kultur !an agar praktikan !apat

melekukan ara sterilisasi eksplan,


4/10

II. METODE KERJA

a. Aat 'a" Ba(a"

'lat .ang !igunakan a!alah alat2alat Kultur /aringan seperti botol2botol me!ia*

sarung tangan* masker* pinset* lampu bunsen* salpel* a+an petri* gelas

beaker* hotplate stirrer* pani* autokla* timbangan !igital* kertas label* karet*

plastik +arp* batang penga!uk* laminar air lo+* rak kultur* kotak kaa

(enkarkas)* tisu* kamera !igital* !an alat tulis* autokla, -e!angkan bahan .ang

!igunakan a!alah a4ua!s* me!ium* +ortel !an u/ung batang melin/o (sebagai

ekplan)* ba.lean* !eter/en* air,

$. Pr)*e'%r Ker&a

Langkah Ker/a -terilisasi 'lat !an #e!ia Kultur-terilisasi Peralatan 5elas !an Logam

1, Peralatan gelas !an logam !iui !engan sabun !an air llu !isterilkan !an

kemu!ian !i lap !engan kain,, -etelah kering !imasukkan !alam oen untuk !isterilsasi isik kering !an

sebagian !isusun !alam keran/ang logam untuk sterilisasai isik basah !alam

autokla ,3, -etelah semua alat !imasukkan* oen !itutup !engan kuat !an !i stel

suhun.a pa!a 1$021600 !an biarkan, -e!angkan pa!a autokla suhun.a

110 selama 1 /am,8, -terilisai selama1 /am21*$ /am pa!a oen !an 1$230 menit pa!a autokla,

-terilisaai #e!ia Tanam1, -iapkan me!ia .ang telah !imasukkan !alam botol kultur,

, #asukkan botol tersebut !alam keran/ang autokla* !an !itutup,3, -tel autokla pa!a suhu 110 !an tekanan 1 atm !an +aktu selama 1$230

menit (1$ menit untuk /umlah a4ua!es kurang !ari 00ml9botol* !an 30

menit untuk a4ua!es 0021000ml9botol),

Langkah Ker/a -terilisasi Eksplan1, #en.iapkan bahan eksplan .aitu +ortel !an tunas puuk melin/o .ang

!isterilkan,, #eren!am eksplan !alam air !etergen pa!a gelas beker !an !ikook

selama 1 menit* lalu bilas !engan a4ua!es !an !itiriskan,


5/10

3, #asukkan eksplan .ang telah !itiriskan ke !alam ba.lean !alam gelas

beaker !an !ikook hingga $ menit,8, 'mbil eksplan tersebut !an !itiriskan * kemu!ian masukan a4ua!es !an

kook kembali hingga ti!ak berbuih lagi,$, Eksplan !iambil !an !itiriskan ke !alam a+an petri steril !an !itutup

untuk siap tanam !i laminar air lo+,6, Tanam eksplan tersebut ke !alam me!ium buatan !alam botol kultur,7, 'mati pa!a hari ke 3 !an ke : setelah penanaman eksplan untuk melihat

keberhasilan sterilisasi,;, atat /umlah botol kultur .ag ter/a!i kontaminasi,

III. HASIL DAN PEMBAHASAN

a. Ha*+ Pe"#aata"

Ta$e (a*+ -e"#aata" !)"ta+"a*+ e!*-a" )rte -a'a e'+a MS 2,/ D

N)

.E!*-a"

K)"ta+"a"

1 O!t)$er 2015 1 O!t)$er 2015

1.


6/10

.


7/10

2 uap merupakan pemba+a (arrier) energi termal paling eekti !an semua

lapisan pelin!ung luar mikroorganisme !apat !ilunakkan* sehingga

memungkinkan ter/a!i koagulasi,

2 ersiat nontoksik* mu!ah !iperoleh* !an relati mu!ah !ikontrol (Lukas*

-teanus, 006),

Laman.a sterilisasi tergantung !ari olume !an /enis, 'lat2alat !an air

!isterilkan selama 1 /am* tetapi me!ia antara 0280 menit tergantung olume

bahan .ang !isterilkan, -terilisasi me!ia ti!ak boleh terlalu lama karena !apat

men.ebabkan "

a, Penguraian gula,b, >egra!asi itamin !an asam2asam amino,

, &naktiasi sitokinin ?eatin ribosi!e,

!, Perubahan p@ .ang berakibat !epolimerisasi agar,

V)%e e'+a 34a!t% 6a"# '+-er%!a"

3121074

02$0 1$ #enit

7$ 0 #enit$02$00 $ #enit

1000 30 #enit

1$00 3$ #enit

000 80 #enit

, -terilisasi Panas Kering (Oen)

Proses sterilisasi panas kering ter/a!i melalui mekanis kon!uksi panas, Panas

akan !iansorpasi oleh permukaan luat alat .ang !i sterilkan* lalu merambat

kebagian !alam permukaan sampai akhirn.a suhu untuk sterilisai terapai,otol2botol9 tabung reaksi9erlenme.er .ang !igunakan sebagai +a!ah biasan.a

!isterilkan menggunakan oen, ila botol kultur akan !isimpan untuk beberapa

lama* maka se+aktu sterilisasi mulut botol harus !itutup !engan alumunium

oil,

Panas lembab sangat eekti meskipun pa!a suhu .ang ti!ak begitu tinggi*

karena ketika uap air berkon!ensasi pa!a bahan2bahan .ang akan !isterilkan

!ilepaskan seban.ak 6;6 kalori pergram uap air pa!a suhu 11A, Panas ini


8/10

men!enaturasikan atau mengkoagulasikan protein pa!a organisme hi!up !an

!engan !emikian mematikann.a, #aka sterilisasi basah !apat mensterilkan

bahan apa sa/a .ang !apat !itembus oleh uap air (min.ak misaln.a ti!ak !apat

!itembus uap air) !an ti!ak rusak bila !ipanaskan !engan suhu .ang berkisar

antara 110A !an 11A (@a!ioetomo* 1BB3),

>iban!ingkan !engan panas lembab* panas kering kurang eisien !an

membutuhkan suhu tinggi serta +aktu .ang lama untuk sterilisasi, @al ini

!isebabkan karena tanpa kelembapan ti!ak a!a panas laten, -ebagai ontoh*

albumim telur !engan kelembapan baru menggumpal pa!a $6A* se!angkan

tanpa kelembapan baru menggumpal pa!a suhu 160217$A, Karena bentuk

kehi!upan .ang paling tahan panas .aitu en!ospora bakteri* berprilaku seakanC

akan ti!ak memiliki kelembapan* maka panas kering (oen) harus menapai

suhu 160A217$A untuk !apat mematikann.a, Pemansan seperti ini men/amin

bah+a suhu pa!a ben!a2ben!a .ang !ipanaskan !alam oen akan menapai

160A 2 17$A selaman.a sekurang2kurangn.a 10 menit (@a!ioetomo* 1BB3),

-terilisasi basah biasan.a !ilakukan !i!alam autokla (pa!a hakikatn.a*

autokla a!alah pressure ooker berukuran besar) atau sterilisator uap .ang

mu!ah !iangkat atau (portabel) !engan menggunakan uap air /enuh bertekanan

pa!a suhu 11o selama 1$ menit, Karena naikn.a titik !i!ih air men/a!i

11o itu !isebabkan oleh tekanan 1 atmoser (atm) pa!a ketinggian

permukaan laut* maka !aur sterilisasi tersebut sering kali /uga !in.atakan

sebagai " 1 atm selama 1$ menit, Namun perlu !iingat bah+a pern.ataan ini

han.a berlaku pa!a tempat2tempat .ang tinggin.a sama !engan permukaanlaut, Pa!a tempat2tempat .ang lebih tinggi !iperlukan tekanan lebih besar

untuk menapai suhu 11o, Karena itu !aripa!a men.atakan besarn.a

tekanan* lebih baik men.atakan bah+a kea!aan steril !iapai !engan ara

mempertahankan suhu 11o selama 1$ menit, >apat pula !ipakai kombinasi

suhu !an +aktu .ang lain .ang memberikan hasil sama (@a!ioetomo* D, -,*

1B;$), #ekanisme penghanuran bakteri oleh uap air panas a!alah kerena


9/10

ter/a!in.a !enaturasi !an koagulasi beberapa protein esensial organisme

tersebut.

'ir steril a!alah air .ang bebas !ari kuman termasuk bakteri* irus ataupun

/amur, '4ua!es a!alah air hasil !estilsi atau pen.ulingan sama !engan air

murni atau @O* karena @O hampir ti!ak mengan!ung mineral, >istilasi itu

sen!iri merupakan suatu meto!e pemisahan bahan kimia ber!asarkan

perbe!aan keepatan atau kemu!ahan menguap bahan atau !iartikan sebagai

teknik pemisahan bahan kimia ber!asarkan perbe!aan itik !i!ih,

IV. KESIMPULAN

'!apun kesimpulan .ang !apat !iambil !ari hasil praktikum ini a!alah sebagai

berikut "

1, Pen.ebab ter/a!in.a kontaminasi !apat ter/a!i akibat sterilisasi me!ia .ang

kurang sempurn* lingkungn ker/a !an pelaksanaan .ang ti!ak steril* ataupun

keerobohan !ari praktikan saat sterilisasi,, %aktor .ang !apat mempengaruhi tingkat kontaminan permukaan bahan tanam

a!alah /enis tanamann.a* bagian tanamn .ang !igunakan* morologi

permukaan tanaman* lingkungan tumbuhn.a* umur tanaman* kon!isi tanaman

saat !iambil,3, Eksplan .ang terkontaminasi /umlahn.a sangat se!ikit han.a a!a 3 botol .ang

teramati ter!apat kontaminan !i hari pengamatan ke!ua,


10/10

DAFTAR PUSTAKA

'nsel* @,,* 1B;B, Pengantar entuk -e!iaan %armasi e! ke 8, niersitas

&n!onesia, Jakarta,@a!ioetomo* D, -,* 1B;$, #ikrobiologi >asar !alam Praktek, PT, 5rame!ia,

Jakarta,Lukas* -teanus, 006, %ormulasi -teril, 'n!i, Fog.akarta,

lp. kuljar 4 ster alat, mdia, ekspln.docx

Documents