management kolom hplc

7/23/2019 Management Kolom Hplc

http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 1/20

ManajemenKolom HPLC

ManajemenKolom HPLC

Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt.



2HPLC KOLOM

Literatur

Literatur

Ahuja, S. and. Dong, M.W., 2005, Handbookof Pharmaceutical Anal!i! b HP"#,

$olume %, Se&aration Science and

'echnolog, (l!e$ier Academic Pre!!,Am!terdam.

Snder, ".)., *irkland, +.+., and lajch, -/,Practical HP"# Method De$elo&ment,Second (dition, +ohn Wile Son!

1nc., e3 4ork.



3HPLC KOLOM

Jumlah Lempeng Teoritis (N)

Jumlah Lempeng Teoritis (N)

meru&akan karakteri!tik &enting !uatukolom

dideni!ikan !ebagai6

7 kemam&uan kolom untuk mengha!ilkan

&uncak kromatogram ang tajam, !em&ituntuk menca&ai &emi!ahan dengan baik,

dengan nilai α kecil



4HPLC KOLOM

Penggantian Kolom

Penggantian Kolom

*olom haru! diganti a&abila6

7 tidak bi!a lagi menunjukkan kinerja ang

diinginkan7 nilai berkurang 508

7 nilai re!olu!i tinggal 9 nilai original

: )! ; 2 )! ; -,5 <7 nilai a!imetri -,5



5HPLC KOLOM

Pencatatan Kolom

Pencatatan Kolom

Pencatatan kolom !ecara !i!temati!dilakukan dengan cara6

7 kolom ang dio&era!ikan dengan bufer

di&i!ah dengan ang tan&a bufer

7 menacatat jumlah &enginjek!ian &ada

kolom ang digunakan

7 u!ia kolom berki!ar antara = > 2? bulan

atau -000 > =000 &enginjek!ian



6HPLC KOLOM

Kolom

Kolom

Performance kolom menurun !eiring denganlamana 3aktu &enggunaan, ang ditandai

dengan &eningkatan @back&re!!ure dan

lebar &uncak kromatogram


http://slidepdf.com/reader/full/management-kolom-hplc 7/20 7HPLC KOLOM

Pengoperasian KolomPengoperasian Kolom

Bntuk kolom @)e$er!ed7Pha!e :#C, #-C,fenil, dll<, gunakan &etunjuk berikut6

7 !im&an kolom dalam a!etonitril atau metanol

atau cam&uran air dan &elarut organik

7 jangan mengo&era!ikan kolom melebihi &H

ang di&erbolehkan untuk kolom berba!i!

!ilika, di!arankan &H 2,5 > CE.

&H F C !ilika terlarut

&H G 2 bonded !ilika terhidroli!i!



+angan mengo&era!ikan kolom melebihi bata!!uhu ang diijinkan, bia!ana %0 > C0 0#

tan&a kon!ulta!i &enjual kolomE

Pro!edur regenera!i atau @back7u!hing mungkin da&at mem&erbaiki !ebagian

&erformance kolom.

1ngat bah3a, '1DA* !emua kolom da&at diback7u!hed, karena @the inlet frit! mungkin

memiliki ukuran &ori ang lebih be!ar untuk

meminimalkan ma!alah &enumbatan




Kolom (fase diam)Kolom (fase diam)masuk

keluar



Selalu u!h aliriE kolom dengan &elarut kuat!trong !ol$entE !e&erti metanol !ebelum

digunakan untuk mengelimina!i !etia& anlit

ang tertahan kuat

+angan &ernah biarkan kom&onen bufertertinggal dalam dalam &om&a atau kolom,karena kom&onen bufer da&at mengenda&

dan menimbulkan keru!akan




Kunci Suses pada HPLCKunci Suses pada HPLC

-. Pelihara dan kalibra!i !i!tem HP"# !ecara&eriodik. Pemeliharaan &re$entif di!arankan

dilakukan oleh tekni!i ahli !etia& tahunan dan

kalibra!i !i!tem dilakukan !etia& % bulan

2. Perik!a kinerja !i!tem menggunakan !am&el!tandar dengan &arameter ang didokumen7

ta!ikan

=. Selalu lakukan $erika!i !ebelum menganali!i!!am&el bah3a tekanan &om&a dan ba!eline

adalah normal



+ika &elarut !am&el akhir lebih kuatdibanding fa!e gerak, injek!ikan $olumeang lebih kecil untuk meminimalkan di!tor!i

&uncak kromato7gram

Perik!a &om&a dan cuci kolom dengan&elarut ang kuat !ebelum menganali!i!

!am&el

#uci kolomJ!i!tem !ebelum mematikan alatHP"#

Kunci Suses pada HPLCKunci Suses pada HPLC



16HPLC KOLOM

Pencucian KolomPencucian Kolom

Ier!ihkan kolom dengan !ol$en ang kuat.

7 Bntuk kolom )e$er!ed7&ha!e6

gunakan cam&uran %8 diklorometan dan ?8

metanol dengan 0,-8 amonium hidrok!ida

7 Bntuk kolom ormal7&ha!e6

gunakan metanol

Pada keadaan ang !ulit6

7 lakukan @back7u!hing kolom dengan kece7

&atan alir rendah : bila di&erbolehkan KKK <



17HPLC KOLOM

Bntuk &encucian kolom, gunakan aliran 0,5m"Jmin atau kurang untuk mencegah tekanan

berlebih

+ika kolom !ele!ai dio&era!ika dengan fa!egerak ang mengandung bufer, cucilah dengan

air !ecuku&na, kemudian dengan metanol

Bntuk menghilangkan bahan7bahan angter!era& dari bagian ata! kolom, cucilahdengan tetrahidrofuran atau koloroform




18HPLC KOLOM

+ika kolom !ele!ai dio&era!ikan menggu7nakan fa!e gerak ang ditambah6

7 trietilamin

7 tetarabutilamonium

maka lakukan6

7 &encucian kolom dengan cam&uran antara

metanol dan 0,058 a!am fo!fat 50 6 50E, baru kemudian dengan metanol

- Jangan aliri kolom hanya dengan air saja !!!




19HPLC KOLOM

Pada normal &ha!e6

7 #ucilah kolom dengan i!o&ro&anol, dengan

aliran 0,5 m"Jmin untuk mencegah tekanan

berlebih




20HPLC KOLOM

management kolom hplc

Documents