bab i identifikasi dna

7/21/2019 BAB I Identifikasi DNA

1/20

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Tujuan

Tujuan dari percobaan identifikasi asam nukleat ini adalah mengerti cara cara

identifikasi senyawa penyusun asam nukelat.

1.2. Dasar Teori

Asam nukleat merupakan molekul terbesar yang ditemukan dalam tubuh. Asam

nukelat pertama kali ditemukan dari inti (nukleus) sel oleh ahli biokimia Swiss Mescher.

Asam nukleat merupakan polimer dan satuan pembentuknya adalah nukleotida. Setiap

nukleotida terdri dari gugus fosfat, gula dengan lima karbon, basa yang mengandung

nitrogen ( James, 2008 ).

Asam nukleat memiliki kemampuan unik untuk memproduksi dirinya sendiri

secara langsung sehingga memungkinkan untuk membentuk duplikat dan

mentransmisikan ADN ke seluruh tubuh sel dari suatu generasi ke generasi berikutnya

secara tepat. ADN memberikan pola cetakan untuk protein dan enzim yang secara

langsung mengontrol perkembangan , proses biokimia, anatomi, fisiologim dan tingkah

laku organisme. ADN terdapat dalam semua sel ( Setyowati, 2007 ).

Terdapat dua jenis asam nukleat yaitu asam deoksiribonukleat ( DNA ) dan asam

ribonukleat ( RNA ). Asam asam ini adalah molekul yang membuat organisme hidupdapat memproduksi komponen komponen kompleksnya dari satu generasi ke generasi

berikutnya. DNA dapat mengarahkan sintesis RNA, mengontrol sintesis protein melalui

RNA. DNA adalah materi genetik yang diwaris organisme dari orangtuanya ( Campbell,

2009 ).

DNA ( deoxyribonucleic acid ) merupakan tempat penyimpanan informasi genetik

yang dikodekan dalam bahasa kimiawi dan diproduksi di dalam semua sel tubuh makhluk

hidup. Struktur DNA pertama kali diungkap oleh James Watson dan Franson Crick pada

tahun 1953 berdasarkan atas foto difraksi sinar X yang dibuat oleh Rosalind Franklin danMaurice Wilkins. Berdasarkan atas data yang diperoleh Watson dan Crick membuat

struktrur DNA yang disebut untai ganda (double helix). Untai ganda DNA tersusun oleh

dua rantai polinukleotida yang terpilin. Kedua rantai tersebut berikatan dengan adanya

ikatan hidrogen antara basa adenin dengan timin sebanyak dua ikatan dan antara guanin

dan sitosin sebanyak tiga ikatan (Triwibowo,2005 ).


2/20

Gambar 1. Struktur DNA double Helix

DNA terdiri dari tiga macam molekul, yaitu gula pentosa, gugus fosfat dan basa

nitrogen. Gula pentosa memiliki 5 atom C dan pada DNA. Gugus fosfat menyebabkan

asam nukleat bermuatan negatif. Basa nitrogen yang menyusun asam nukleat ada dua

macam, yaitu basa purin yang terdiri dari adenin dan guanin dan basa pirimidin yang

terdiri dari timin dan sitosin. Basa purin atau pirimidin adalah basa nitrogen yang terikat

pada atom C nomor 1 suatu molekul gula melalui ikatan N-glukosidik. Ikatan tersebut

menghasilkan molekul yang disebut nukleosida. Nukleosida akan bergabung dengan

fosfat dan membentuk molekul yang disebut nukleotida (Triwibowo, 2005).

Gambar 2. Struktur DNA pada basa nitrogen

RNA adalah polimer asam nukleotida dari empat jenis ribonukleotida. Molekul

RNA dapat berbentuk pita tunggal atau pita ganda yang tidak terpilin heliks. Setiap pita

RNA terdiri atas ribonukleotida ( polinukleotida ). RNA mengandung gula pentosa , basa

nitrogen dan asam fosfat. Gula pentosanya berupa ribosa. Basa nitrogen purinya terdiri

atas adenin dan guanin, sedangkan pirimidinya terdiri atas sitosin dan urasil ( Ariebowo,

2007 ).


3/20

Tabel 1. Perbedaan antara DNA dengan RNA (Sloane, 2004)

Sintesis protein terjadi di dalam sel. Sintesis protein berlangsung melalui dua

tahap, yaitu: transkripsi dan translasi.Transkripsi adalah proses pembentukan RNA d

oleh DNA template, proses ini berlangsung ketika enzim RNA polymerase melekat pada

nukleotida DNA sehingga pasangan DNA itu lepas dan salah satu rantai melakukan

pencetakan. Translasi adalah proses penterjemahan kode genetika dalam sintesis protein.

Proses translasi adalah dengan melekatnya RNA d ke ribosom, maka RNA t menjadi

aktif dan mengikat asam-asam amino di sekitarnya, kemudian masing-masingmembawanya ke ribosom. Bagian ujung yang melilit RNA t itu berkaitan dengan RNA d

lewat titik basa masing-masing. Titik basa RNA t yang setangkup dengan titik basa RNA

d (kodon) disebut antikodon. Jadi antokodon mengikat dan mengangkut asam amino

khusus sesuai dengan kode yang terdapat pada RNA duta (Poedjiadi, 2006).

DNA RNA

1.

hanya terdapat dalam inti sel

(nucleus) , yaitu pada kromosom

2.

Membentuk rantai ganda yang

amat panjang (double helix)

3.

Berhubungan erat dengan

pengendalian faktor keturunan

dan sintesa protein.

Kadarnya tidak dipengaruhi oleh

kecepatan sintesa protein.

1. Mengandung basa :

A. Pirimidin : S dan T

B. Purin : A dan G

C. Komponen gulanya

deoksiribosa, yaitu ribose

yang kekurangan satu

atom oksigen.

1. Terdapat dalam inti dan

sitoplasma, terutama dalam

ribosom

2. Membentuk rantai tunggal dan

tidak panjang (tanpa rantai

komplemen)

3. Berhubungan dengan sintesa

protein dan kadarnya berubah-

ubah menurut kecepatan sintesa

protein.

1.

Mengandung basa :

A.

Pirimidin : S dan U

(urasil)

B. Purin : A dan G

2. Komponen gulanya ribosa

(pentosa)


4/20

1.3. Tinjauan Bahan

1.3.1. Ammonium Molibdat

Ammonium molibdat berbentuk padatan bewarna putih atau hijau terang ,

memiliki berat molekul 1235,86 g/mole, mudah terdekomposisi. Mudah larut di airdingin, dan air hangat Berbahaya jika terhirup, tertelan, dan dapat menyebabkan iritasi

jika terkena kulit dan mata (Sciencelab,2012).

1.3.2. Kalium Fosfat

Kalium fosfat berbentuk padatan berwarna putih dan memiliki pH 8,8 , memiliki

berat molekul 174,18 g/mol. Mudah larut di air dingin, air hangat, sedikit larut di alkohol.

Berbahaya jika terhirup, tertelan, dan dapat menyebabkan iritasi jika terkena kulit dan

mata (Sciencelab,2012).

1.3.3. Asam Sulfat

Asam Sulfat berbentuk cair tidak bewarna dan bersifat asam , memiliki berat

molekul 98,08 g/mole, memiliki titik didih 270 C dan memiliki titik leleh sebesar -35

C. Mudah larut di air dingin, etil alkohol. Berbahaya jika terhirup, tertelan, dan dapat

menyebabkan iritasi jika terkena kulit dan mata (Sciencelab,2012).

1.3.4. Asam Asetat Glasial

Asam asetat glasial berbentuk cair, tidak berwana memiliki bau kecut yang khas.

Berat molekul senyawa ini adalah 60,05 gr.mol-1, ia akan mendidih pada suhu 118,1oC

dan akan melebur pada suhu 16,6oC . Mudah larut di air dingin, air hangat, dietil eter,

aseton. Berbahaya jika terhirup, tertelan, dan dapat menyebabkan iritasi jika terkena kulit

dan mata (Sciencelab,2012).

1.3.5. HNO3

Asam nitrat ( HNO3) berbentuk cair tidak bewarna hingga berwarna kuning

terang dan bersifat asam , memiliki titik didih 121 C dan memiliki titik leleh sebesar -

41,6 C. Mudah larut di air dingin, air hangat, dietil eter. Berbahaya jika terhirup, tertelan,

dan dapat menyebabkan iritasi jika terkena kulit dan mata (Sciencelab,2012).


5/20

1.3.6. Ammonia

Ammonia merupakan senyawa gas dengan formula NH3, tidak berwarna, berbau

sengit, larut dalam air dan menghasilkan larutan alkali yang mengandung NH4OH (Basri,

2005).

1.3.7. Difenilamin

Difenilaminberbentuk padatan tidak berwarna , memiliki berat molekul 169,23

g/mol, memiliki titik didih 302 C dan memiliki titik leleh sebesar 53 C . Mudah larut di

air dingin, aseton, dietil eter. Berbahaya jika terhirup, tertelan, dan dapat menyebabkan

iritasi jika terkena kulit dan mata (Sciencelab,2012).

1.3.8.

Perak Nitrat

Perak nitrat berbentuk padatan , tidak berwarna ,memiliki berat molekul 169,87

g/mol, memiliki titik didih 440 C dan memiliki titik leleh sebesar 212 C . Mudah larut

di air dingin,dietil eter. Berbahaya jika terhirup, tertelan, dan dapat menyebabkan iritasi

jika terkena kulit dan mata (Sciencelab,2012).

1.3.9. Orsinol

Orsinol berbentuk padatan berwarna coklat , memiliki berat molekul 142,15

g/mol, memiliki titik didih 290 C dan memiliki titik leleh sebesar 59,5 C . Mudah larut

di air dingin, metanol, dietil eter. Berbahaya jika terhirup, tertelan, dan dapat

menyebabkan iritasi jika terkena kulit dan mata (Sciencelab,2012).


6/20

BAB II

METODOLOGI

2.1.Alat

Alat yang digunakan antara lain tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet tetes,

pipet ukur, pipet volume, penangas air, corong pisah, botol semprot, gelas kimia.

2.2.Bahan

Bahan yang digunakan dalam percobaan ini antara lain asam sulfat , DNA,

RNA, larutan ammonium molibdat , HNO3 pekat, aquades, hidrolisa asam nukleat,

kalium fosfat, difenilamin ,asam asetat glasial, orsinol, larutan AgNO3 , ammoniapekat.

2.3. Skema Kerja

2.3.1.Hidrolisa Asam Nukleat

ditambah 10 ml H2SO41 M

dimasukkan dalam 3 tabungreaksi

dididihkan selama 3 menit

disaring fraksi yang tidak pecah selama hidrolisis

disimpan filtrate yang tidak dingin untuk percobaan selanjutnya

Asam Nukleat Hasil Isolasi

Hasil

DNA atau RNA

Hasil


7/20

2.3.2. UjiFosfat

dilarutkan dalam akuades 50 mlditambah HNO3pekattetes demi tetes hingga semua ammonium molibdat larut

ditambah akuades 100 ml

diambil sebanyak 3 ml

ditambah 1 ml asam hidrolisat asam nukleat

dipanaskan selama 5 menit

diamati, adanya endapan kuning menunjukkan fosfat positif

2.3.3. UjiDeoksiribosa

ditambah larutan dische


diamati, warna biru menunjukkan adanya deoksiribosa

2.3.4. UjiRibosa

ditambah 1 ml orsinol


diamati, adanya ribose ditunjukkan oleh perubahan warna kuning menjadi

hijau

2.3.5. UjiBasaPurin

ditambah ammonia pekat tetes demi tetes sampai basa

ditambah beberapa tetes larutan AgNO3

diamati, endapan putih yang agak larut menandakan adanya basa-basa purin

10 g ammonium molibdat

Larutan ammonium molibdat

Hasil

0,1 mL Hidrolisat Asam Nukleat

Hasil

0,1 mL Hidrolisat Asam Nukleat

Hasil

1 mL Hidrolisat Asam Nukleat

Hasil


8/20

BAB III

DATA HASIL PENGAMATAN

3.1. Hidrolisat asam nukleat

No Perlakuan Pengamatan

Kecambah

kepala

besar

Kecambah

kepala

kecil

Kecambah

ekor besar

Kecambah

ekor kecil

1. Hasil isolasi

dimasukkan dalamkuvet

Kuning

keruh danada endapan

berwarna

kuning

Keruh dan

ada endapanberwarna

putih

Keruh dan

ada endapanberwarna

putih

Keruh dan

ada endapanberwarna

putih

2. Hasil isolasi

disentriugasi

selama 10 menit

pada 3000 rpm

dan filtrat dibuang

Endapan

kuning

kecoklatan

Endapan

putih

Endapan

putih

Endapan

putih

3. Endapan yang

dipanaskan

ditambahkan 10

ml asam sulfat

pekat + 30 ml

aquades

Larutan

menjadi

coklat muda

bening dan

sedikit

panas

Larutan

menjadi

coklat muda

bening dan

sedikit

panas

Larutan

menjadi

coklat

kemerahan

Larutan

menjadi

kuning

kehijauan

4. Larutan didihkanselama 3 menit

Tidak adaperubahan

warna dan

tidak ada

endapan

Tidak adaperubahan

warna dan

tidak ada

endapan

Tidak adaperubahan

warna dan

tidak ada

endapan

Tidak adaperubahan

warna dan

tidak ada

endapan


9/20

3.2.Uji fosfat

No Perlakuan Pengataman

Kecambahkepala

besar

Kecambahkepala kecil

Kecambahekor besar

Kecambahekor kecil

1. Hidrolisat asam

nukleat

dimasukkan dalam

tabung reaksi

Larutan

berwarna

kecoklatan

jernih

Larutan

berwarna

kecoklatan

jernih

Larutan

berwarna

merah muda

jernih

Larutan

berwarna

kuning

jernih

2. Ditambah 3 mlammonium

molibdat

Larutanmenjadi

tidak

berwarna

Larutanmenjadi

tidak

berwarna

Larutanmenjadi

tidak

berwarna

Larutanmenjadi

tidak

berwarna

3. Dipanaskan pada

suhu 47oC selama

5 menit

Tidak

terjadi

perubahan

Tidak

terjadi

perubahan

Tidak

terjadi

perubahan

Tidak

terjadi

perubahan

4. Setelah 5 menitsuhu dinaikkan

menjadi 50oC

Terdapatendapan

kuning yang

agak larut

Terdapatendapan

kuning yang

agak larut

Tidakterbentuk

endapan

kuning

Terdapatendapan

kuning yang

agak larut


10/20

3.3. Uji deoksiribosa


Kecambahkepala besar

Kecambahkepala

kecil

Kecambahekor besar

Kecambahekor kecil

1. Hidrolisat asam

nukleat

dimasukkan dalam

tabung reaksi

sebanyak 1 ml

Hidrolisat

asam nukleat

berwarna

coklat bening

Larutan

berwarna

coklat

bening

Hidrolisat

asam

nukleat

berwarna

merah

jambu

Hidrolisat

asam

nukleat

berwarna

hijau bening

2. Ditambahkan

reagen dische

sebanyak 2ml

Reagen

dische

berwarna biru

pekat berbau

menyengat,

hidrolisat

terbentuk 2

lapisan,

lapisan atas

biru, lapisan

bawah bening

Warna

campuran

menjadi

biru tua

pekat

Reagen

dische

berwarna

biru pekat

berbau

menyengat,

hidrolisat

terbentuk 2

lapisan,

lapisan atas

biru, lapisan

bawah

bening

Reagen

dische

berwarna

biru pekat

berbau

menyengat,

hidrolisat

terbentuk 2

lapisan,

lapisan atas

biru, lapisan

bawah

bening

3. Campuran

dipanasakan

selama 5 menit

dengan suhu 47 oC

Campuran

menjadi biru

tua pekat

Campuran

menjadi

biru tua

pekat

Campuran

menjadi biru

tua pekat

Campuran

menjadi biru

tua pekat

4. Diamati perubahan

yang terjadi

Campuran

menjadi biru

tua pekat

Campuran

menjadi

biru tua

pekat

Campuran

menjadi biru

tua pekat

Campuran

menjadi biru

tua pekat


11/20

3.4. Uji ribosa


Kecambahkepala

besar

Kecambahkepala

kecil

Kecambahekor besar

Kecambahekor kecil

1. Hidrolisat asam

nukleat

dimasukkan 1 ml

Warna

larutan

menjadi

kuning

kecoklatan

Warna

larutan

menjadi

kuning

kecoklatan

Warna larutan

menjadimerah

muda

kecoklatan

Warna

larutan

menjadi

kuning

2. Ditambahkan

dengan larutan

orsinol 1ml

Berwarna

kuning

(+++)

Berwarna

kuning

(++++)

Berwarna

kuning (++)

Berwarna

kuning (+)

3. Dipanaskan pada

suhu 50oC

Tidak

terjadi

perubahan

Tidak

terjadi

perubahan,

namun

bertambahcoklat

Larutan

berubah

warna

menjadi

kuningkehijauan

(++)

Larutan

berubah

warna

menjadi

kuningkehijauan

(++)

3.5. Uji basa-basa purin


Kecambah

kepala

besar

Kecambah

kepala kecil

Kecambah

ekor besar

Kecambah

ekor kecil

1. Diambil hidrolisat

asam nukleat 0,5

ml

Larutan

berwarna

orange

bening

Larutan

berwarna

orange

Larutan

berwarna

merah muda

Larutan

berwarna

orange

bening


12/20

2. Ditambahkan

ammonium 10

tetes

Berbau,

panas,

berwarna

bening

kekuningan

Berbau,

panas,

berwarna

bening

kekuningan

Berbau,

panas,

berwarna

bening

kekuningan

Berbau,

panas,

berwarna

bening

kekuningan

3. Ditambahkan

AgNO310 tetes

Larutan

berwarna

bening

Larutan

berwarna

bening

Larutan

berwarna

bening

Larutan

berwarna

bening

4. Ditambahkan

AgNO3berlebih

Terbentuk

emulsi pada

penambahan

40 teteslarutan

berwarna

bening

Terbentuk

emulsi pada

penambahan

20 teteslarutan

berwarna

bening

Terbentuk

emulsi pada

penambahan

40 teteslarutan

berwarna

bening

Tidak

terjadi

perubahan

Keterangan : (+) = kuning muda

(+) = kuning agak tua

(+++) = kuning tua

(++++) = kuning kecoklatan


13/20

BAB IV

PEMBAHASAN

4.1. Hidrolisat Asam Nukleat

Prinsip percobaan ini adalah menghidrolisis asam nukleat agar mempermudah

dalam mengidentifikasi asam nukleat pada proses selanjutnya, karena penyusun asam

nukleat terpecah, sehingga apabila dihidrolisis lebih lanjut akan menghasilkan asam

fosfat dan nukleosida. Proses hidrolisis asam nukleat ini dilakukan dengan cara

sentriugasi, kemudian endapan yang terbentuk dihidrolisis pada suasan asam dengan

menambahkan asam sulfat pekat dan sedikit air sehingga akan menghasilkan molekul

gula dan basa nitrogen.

Langkah awal yang perlu dilakukan untuk menghidrolisis asam nukleat adalah

hasil isolasi asam nukleat dimasukkan ke dalam kuvet yang kemudian dilakukan

sentrifugasi untuk memisahkan antara pelarut dengan filtratnya. Kemudian, endapan

yang terbentuk atau asam nukleat ditambah dengan larutan H2SO4pekat 10 mL dan 30

mL aquades. Larutan H2SO4pekat berfungsi sebagai larutan untuk membuat larutan

bersuasana asam. Sementara aquades digunakan sebagai pengencer larutan karena

H2SO4 yang digunakan terlalu pekat sehingga dapat merusak asam nukleat bila tidak

diencerkan. Selanjutnya larutan didihkan selama 3 menit untuk mempercepat reaksi

hidrolisis.karena larutan yang terbentuk tidak ada endapan, maka tidak perlu

dilakukan penyaringan. Filtrat yang terbentuk siap untuk diuji fosfat, basa purin,

ribosa dan deoksiribosa.

Hasil yang didapat dari hidrolisis asam nukleat ini adalah sebelum dilakukan

sentrifugasi kecambah kepala kecil, ekor besar dan kecil keruh dan terdapat endapan

berwarna putih,dan kecambah kepala besar kuning keruh dan terdapat endapan

kuning, namun setelah dilakukan sentrifugasi kecambah kepala kecil, ekor besar dan

kecil menjadi endapan putih, sedangkan kepala besar memilki endapan kuning

kecoklatan, ketika penambahan asam sulfat pekat dan aquades kecambah kepala kecil

menjadi coklat tua bening, kepala besar menjadi coklat muda bening, ekor kecil

menjadi kuning kehijauan dan ekor besar larutannya menjadi coklat kemerahan,

pendidihan menyebabkan larutan tidak mengalami perubahan, karena asam nukleat

larut dalam pelarut asam, sehingga memepermudah untuk proses selanjutnya.

4.2. Uji fosfat

Prinsip percobaan uji fosfat adalah menguji adanya gugus fosfat dalam sampel

asam nukleat yang dilakukan dengan cara menambahkan asam molibdat dalam larutan

hidrolisat asam nukleat yang kemudian dipanaskan selama 5 menit. gugus fosfat yangpositif dapat ditunjukkan dengan adanya edapan kuning.


14/20

Langkah awal yang dilakukan ialah mempipet larutan hasil hidrolisat asam

nukleat ke dalam tabung reaksi sebanyak 1 mL lalu ditambahkan 3 mL larutan

ammonium molibdat sebagai larutan untuk menguji keberadaan fosfat dalam larutan

hidrolisa asam nukleat. Selanjutnya, dipanaskan pada suhu 47o C untuk mempercepat

reaksi. Namun setelah 5 menit pemansan suhu dinaikkan menjadi 50

o

C.

Hasil yang didapat dari uji fosfat adalah hidrolisat asam nukleat sebelum

ditambahkan asam molibdat, kepala besar dan kepala kecil berwarna coklat jernih,

ekor besar berwarna merah muda jernih, ekor kecil berwarna kuning jernih, namun

setelah ditambahkan asam molibdat larutan pada masing-masing sampel menjadi

tidak berwarna dan ketika dipanaskan pun tidak mengalami perubahan warna, namun

ketika suhunya diperbesar pada kepala besar, kepala kecil dan ekor kecil terdapat

endapan kuning yang agak larut, hal ini menunjukkan bahwa terdapat gugus fosfat

didalamnya, sedangkan pada ekor besar tidak mengalami perubahan artinya tidak ada

gugus fosfat yang terkandung didalamnya. Hal ini menandakan bahwa kecambah ekor

besar merupakan nukleosida karena tidak memiliki fosfat

4.3. Uji deoksiribosa

Prinsip percobaan uji deoksiribosa adalah menguji adanya deoksiribosa dalam

larutan hidrolisat asam nukleat. Dimana untuk menguji keberadaan gula deoksiribosa

tersebut, dilakukan penambahan reagen dische. Adapula proses pemanasan untuk

mempercepat reaksi. Apabila suatu larutan positif terhadap uji ini, makan akan

menghasilkan larutan berwarna biru.

Langkah awal yang dilakukan untuk uji ini ialah larutan hasil hidrolisa asam

nukleat dipipet sebanyak 1 mL dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang

kemudian ditambahkan dengan 2 mL reagen dische. Reagen dische berfungsi sebagai

larutan yang mengindikasikan adanya gula deoksiribosa dalam larutan. Kemudian,

larutan campuran tersebut dipanaskan pada suhu 47o C selama 5 menit untuk

mempercepat reaksi. Lalu diamati warna larutan yang terbentuk.

Hasil yang didapat adalah sebelum penambahan reagen dische larutan pada

kepala besar dan kecil berwarna coklat bening, ekor besar berwarna merah muda

bening, dan ekor kecil berwarna hijau bening, ketika ditambahkan reagen dische

hidrolisat asam nukleat pada masing-masing sampel berwarna biru tua pekat, dan

pada pemanasan dengan suhu 40oC semua sampel berwarna biru pekat. Hal ini

menunjukkan bahwa semua larutan sampel baik kecambah ekor besar dan kecil

maupun kecambah kepala besar dan kecil positif terhadap uji ini. Atau semua sampel

tersebut mengandung gula deoksiribosa.


15/20

4.4. Uji ribosa

Prinsip percobaan uji ribosa adalah menguji keberadaan ribose dalam larutan

sampel dengan penambahan reagen orsinol, sebagai larutan yang mengindikasikan

adanya ribose. Selain itu, dilakukan juga pemanasan untuk mempercepat reaksi.Apabila larutan memiliki gula ribose, maka larutan akan mengalami perubahan dari

kuning menjadi hijau sebagai hasilnya.

Langkah awal yang dilakukan untuk uji ini ialah larutan hidrolisat asam

nukleat dipipet sebanyak 1 mL dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Kemudian

ditambah larutan orsinol 1 mL. larutan orsinol berfungsi sebagai reagen yang

mengindikasikan adanya ribosa dalam larutan. Kemudian dilakukan pemanasan

selama 5 menit pada suhu 40o C untuk mempercepat reaksi.

Hasil yang didapat dari percobaan ini adalah sebelum penambahan reagen

orsinol larutan pada kepala besar dan kecil berwarna kuning kecoklatan, ekor besar

berwarna merah muda dan ekor kecil berwarna kuning, setelah penambahan reagen

orsinol larutan berubah warna menjadi kuning dan ketika pemanasan pada suhu 40o C,

terjadi perubahan warna menjadi kehijauan pada ekor besar dan ekor kecil sedangkan

pada kepala besar dan kepala kecil tidak mengalami perubahan artinya larutan tetap

berwarna kuning. Hal ini menunjukkan bahwa kecambah ekor besar besar dan ekor

kecil memiliki ribosa. Namun, kecambah kepala besar dan kecil tidak memiliki ribosa

karena tidak terbentuk larutan berwarna hijau sebagai hasil akhirnya. Tidak mungkin

dalam suatu asam nukleat memiliki ribosa dan deoksiribosa sekaligus. Karena,deoksiribosa merupakan tanda bahwa larutan atau sampel tersebut merupakan DNA.

Sedangkan ribose merupakan tanda bahwa sampel tersebut merupakan RNA.namun,

pada kecambah ekor besar dan kecil, mereka memiliki baik ribosa maupun

deoksiribosa. Hal ini dikarenakan adanya kerusakan pada DNA akibat proses

pengadukan yang terlalu kencang pada proses isolasi asam nukleat serta proses

inkubasi yang kurang optimum. Sehingga berdampak pada struktur asam nukleat.

Namun yang paling parah menerima dampaknya ialah kecambah ekor besar dan ekor

kecil. Sehingga susunannya tidaklah teratur. Hal tersebutlah yang menyebabkan

kecambah ekor besar dan ekor kecil tersebut dapat bereaksi baik dengan orsinol

(reagen uji ribosa) maupun dengan dische (reagen uji deoksiribosa). Sehingga, mereka

menyatakn positif terhadap uji keduanya.

4.5. Uji basa-basa purin

Prinip percobaan uji basa basa purin adalah menguji keberadaan basa purin

pada kecambah atau sampel. Dimana, larutan hidrolisat asam nukleat ditambahkan

dengan ammonium dan AgNO3. Apabila sampel positif terhadap uji ini maka akan

terbentuk endapan berwarna putih.


16/20

Langkah awal yang dilakukan ialah sebanyak 0,5 mL larutan hidrolisat asam

nukleat dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan dengan

ammonium 10 tetes agar larutan bersuasana basa. Selanjutnya ditambahkan 10 tetes

AgNO3untuk membentuk endapan putih. Namun karena 10 tetes masih kurang, maka

ditambahkan AgNO3berlebih agar terbentuk endapan putih yang menandakan adanyabasa purin dalam sampel.

Hasil yang didapat dari uji basa basa purin adalah sebelum penambahan

ammonium larutan pada kepala besa, kepala kecil dan ekor kecil berwarna orange

bening, ekor besar berwarna merah muda, namun ketika penambahan penambahan

ammonium 10 tetes larutan pada masing-masing sampel berwarna bening kekuningan.

Pada penmabahan Ag NO3 larutan berubah warna menjadi bening dan tidak ada

endapan putih yangg sedikit larut, hal ini menunjukan bahwa baik kecambah ekor

besar dan kecil maupun kepala besar dan kecil negatif terhadap uji basa purin. Atau

tidak mengandung senyawa basa burin dalam susunan asam nukleatnya. Hal inidikarenakan keadaan awal asam nukleat hasil isolasi sudah rusak. Sehingga,

mempengaruhi uji-uji yang lainnya. tidak memungkinkan suatu asam nukleat tidak

memiliki basa purin di dalamnya. Hasil uji yang negatif terhadap uji ini menunjukkan

bahwa asam nukleat yang digunakan sebagai sampel dalam keadaan rusak, yang

memungkinkan, basa purinnya hancur.


17/20

BAB V

PENUTUP

5.1. Kesimpulan

Kesimpulan dari percobaan ini ialah bahwa uji identifikasi senyawa penyusun

asam nukleat dapat dimulai dengan menghidrolisis asam nukleat terlebih dahulu untuk

memperudah identifikasi senyawa penyusunnya. Selanjutnya dapat dilakukan uji-uji

senyawa penyusunnya seperti uji ribosa, uji deoksiribosa, uji basa purin, dan uji fosfat.

Hasil dari uji ini ialah untuk uji fosfat semua menunjukkan hasil positif terkecuali

kecambah ekor besar. Untuk uji deoksiribosa, semua sampel menunjukkan hasil

positif. Uji ribose, yang menunjukkan hasil uji positif ialah kecambah ekor besar dan

kecil. Sedangkan untuk basa purin, tidak ada sampel yang menunjukkan hasil positif.

Hal ini menandakan bahwa sususan asam nukleat sudah rusak saat proses isolasi.

Karena, hasil identifikasinya tidak memberikan hasil yang sesuai.

5.2. Saran

Untuk praktikum identifikasi DNA, jangan sampai salah memilih bahan dan

praktikan harus menguasai job desknya masing-masing.


18/20

DAFTAR PUSTAKA

Ariebowo, Moekti. 2007.Biologi.Jakarta : Visindo Media Perkasa.

Campbell, Neil A et all. 2009. Biology Consepts and Connection. San Fransico : PearsonBenjamin Cummings.

James, Joyce. 2008.Principles of Sciece for Nurses.England : Blackwell Publishing.

Poedjiadi, Anna, 2006.Dasar-dasar Biokimia, Universitas Indonesia PRESS,Jakarta.

Sciencelab1, 2012, MSDS Acetic Acid Glacial, http://www.sciencelab.com, diakses tanggal

06 november 2014.

Sciencelab2, 2012, MSDS Ammonia, http://www.sciencelab.com, diakses tanggal 06

november 2014.

Sciencelab3, 2012,MSDS Ammonium Molibdate,http://www.sciencelab.com,diakses tanggal

06 november 2014.

Sciencelab4, 2012, MSDS Diphenylamine, http://www.sciencelab.com, diakses tanggal 06

november 2014.

Sciencelab5, 2012, MSDS Nitric Acid, http://www.sciencelab.com, diakses tanggal 06

november 2014.

Sciencelab, 2012, MSDS Orcinol,http://www.sciencelab.com,diakses tanggal 06 november

2014.

Sciencelab6, 2012, MSDS Potassium Phospate, http://www.sciencelab.com,diakses tanggal

06 november 2014.

Sciencelab7, 2012, MSDS Silver Nitrat, http://www.sciencelab.com, diakses tanggal 06

november 2014.

Sciencelab8, 2012, MSDS Sulfuric Acid, http://www.sciencelab.com, diakses tanggal 06

november 2014.

Setyowati. Tetty, 2007.BiologiInteraktif.Jakarta : Azka Press.

Sloane, Ethel, 2004.Anatomy And Phsiology . Sudbury: Jonwa and Bartlet Publisher.

Triwibowo, Y. 2005.Biologi Molekular.Erlangga, Jakarta: Erlangga
http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/http://www.sciencelab.com/


19/20

LAMPIRAN

Reaksi-reaksi

1. Isolasi Asam Nukleat

2. Hidrolisat Asam Nukleat

3. Uji Fosfat


20/20

4. Uji Deoksiribosa

5.

Uji Ribosa

6. Uji Purin

bab i identifikasi dna

Documents