pengaruh primakuin dan ritonavir interaksi pada cyp3a4

7/21/2019 Pengaruh Primakuin Dan Ritonavir Interaksi Pada CYP3A4

1/9

Pengaruh primakuin dan ritonavir interaksi pada CYP3A4

ekspresi mRNA dalam kultur sel HepG2

Abstrak

Latar Belakang: Pengobatan antimalaria dan anti-HIV secara bersamaan merupakan

tantangan baru dalam penanganan koinfeksi malaria dan HIV. Primakuin merupakan

substrat sekaligus inhibitor bagi CYP3A4 sedangkan ritona!ir merupakan substrat

inhibitor sekaligus inducer bagi CYP3A4. "u#uan penelitian ini adalah untuk mengukur

ekspresi m$%A CYP3A4 pada kultur sel Hep&' (ang diinduksi oleh pemberian

primakuin dan ritona!ir secara bersamaan.

Metode: Pada penelitian pendahuluan sel Hep&' diinkubasi dengan primakuin 3) 4)

*) u+, ritona!ir ' ) ') u+, +/0 1) 2 sebagai kontrol negatif, atau rifampisin

') u+ sebagai kontrol positif. Adapun pada penelitian dengan perlakuan kombinasi obat

sel Hep&' diinkubasi dengan primakuin 4) u+ritona!ir ) u+, +/0 1) 2, atau

rifampisin ') u+ selama ' #am. /el dipanen menggunakan tripsin-5"A dan $%A total

diekstraksi menggunakan reagensia isolasi tripure. /etelah #umlah $%A total

dikuantifikasi menggunakan alat spektrofotometer ekspresi m$%A CYP3A4 diukur

dengan real-time reverse transcription polmerase chain reaction 6$"-PC$7.

Hasil: "er#adi peningkatan ekspresi m$%A CYP3A4 6'' kali lipat terhadap kontrol7

pada sel Hep&' (ang diinkubasi dengan primakuin dan ritona!ir secara bersamaan. Hal

ini menun#ukkan bah8a efek induksi oleh ritona!ir lebih dominan daripada efek inhibisi

oleh primakuin.

Kesimpulan: Pemberian primakuin dan ritona!ir secara bersamaan meningkatkan ekspresi

m$%A CYP3A4 in !itro. (Med J Indones 2012;21:3-!

Pengo!atan !ersamaan dengan o!at antimalaria dan AR" merupakan tantangan !aru dalam

pengelolaan malaria dan H#" co-in$eksi% Aspek penting ang dapat mempengaruhi pencapaian

kesem!uhan klinis sukses adalah interaksi o!at% #nteraksi o!at dapat mene!a!kan pa&anan o!at

diu!ah ang dapat mene!a!kan toksisitas o!at ang !erat atau pengurangan e$$ects%'

$armakologis karena itu( penelitian mekanistik untuk mengeksplorasi ekspresi gen dan en)im


2/9

kontri!usi untuk interaksi o!at pada tingkat sel diperlukan untuk *em!erikan in$ormasi ang

cukup !esar !agi upaa !erkelan&utan untuk mengoptimalkan rekomendasi dosis dalam praktek

klinis%

+itokrom P4, sistem .CYP/ en)im adalah sistem utama di hati !ertanggung &a0a! untuk

meta!olisme o!at hampir 1- dari klinis digunakan drugs%2 anak interaksi o!at adalah

aki!at dari pengham!atan atau induksi ini en)mes%3 CYP CYP4, memiliki !anak iso$orm

!er!eda( termasuk CYP'A'( CYP'A2( CYP2C'5(( CYP267 dan CYP3A4%2 Namun( CYP3A4

!ertanggung &a0a! untuk sekitar 7 dari CYP4,-dimediasi meta!olisme o!at dalam

penggunaan terapi toda%4 demikian( penting untuk menilai CYP3A4 dalam mengidenti$ikasi

interaksi o!at %

Primakuin .PR8/ adalah o!at hana tersedia untuk *encegah Relapse pada malaria dise!a!kan

oleh hpno)oites hati dorman tahap 9 !entuk P% viva: atau P% ovale%,( 7 ;!at ini su!strat dan

inhi!itor CYP3A4%1 se!againa( di sisi lain( ritonavir .R


3/9

Bedokteran% ?niversitas #ndonesia% Bemurnian dan konsentrasi RNA total diukur di

>a!oratorium armakologi dan td .+ingapura/% *edium minimal esensial 6ul!ecco itu .6**/ dan serum &anin sapi

.+/ ang di!eli dari Gi!co >td .+ingapura/%

media/% udaa hepatosit ang diselenggarakan dalam media kultur selama satu minggu se!elum

inku!asi dengan o!at u&i% Pada hari kedua( media itu disedot dan diganti dengan media segar

ang mengandung tes-o!at% ;!at dilarutkan dalam 6*+; untuk pengo!atan% ?ntuk penelitian

a0al( sel dio!ati dengan salah satu dari !erikutF PR8 3 u*( 4 u* PR8( , u* PR8( 2 u*

R


4/9

mengukur a!sor!ansi pada 27 nm Bemurnian persiapan akhir ditam!ang dengan menghitung

rasio a!sor!ansi deterministik pada 27 dan 2 nm

Real time RT-PCR

?rutan dari primer ang digunakan untuk real-time PCR ditun&ukkan pada +YR Hi&au R i+cript reverse transcriptase( ' ng RNA template( dan 5(, u> air

RNase gratis% +ampel kemudian 6iinku!asi secara real-time sistem deteksi termal dengan

kondisi !erikutF ' menit pada ,oC untuk sintesis c6NA( , menit pada 5,oC untuk inaktivasi

reverse transcriptase i+cript( dan PCR !ersepeda dan deteksi .4 siklus/ Yang adalah ' detik

pada 5,oC panggung untuk denaturasi dan 3 detik pada ,oC untuk annealing dan ekstensi

panggung% Nilai am!ang !atas .Ct/ dihitung secara otomatis oleh perangkat lunak% 6ata Ct

diolah menurut metode 6i&elaskan oleh P$a$l%

HA+#>

HepG2 sel tidak mor$ologis !eru!ah selama masa pengo!atan o!at di !a0ah mikroskop $ase

kontras ter!alik% Gam!ar ' menun&ukkan normalisasi CYP3A4 ekspresi mRNA dalam dosis

!er!agai primakuin% Paparan 3( 4( dan , u* Primakuin tidak menginduksi ekspresi CYP3A4

mRNA( sedangkan paparan ri$ampisin 2 u* se!agai kontrol positi$ Peningkatan CYP3A4


5/9

ekspresi mRNA dengan 3 kali lipat di!andingkan dengan sel 6*+; diperlakukan se!agai

kontrol negati$%

Para CYP3A4 normalisasi mRNA ekspresi dalam !er!agai dosis ritonavir dihapus

didemonstrasikan pada Gam!ar 2 Paparan 2 ritonavir u* tidak menginduksi ekspresi CYP3A4

mRNA% Namun( sedikit meningkat .'(45 dan '(53 kali lipat le!ih dari kontrol/ dari CYP3A4

ekspresi mRNA ang terdeteksi ketika konsentrasi ritonavir telah meningkat sampai ' dan 2

u*%

kspresi CYP3A4 mRNA sedikit meningkat .'(22 kali lipat le!ih dari kontrol/ dalam sel HepG2

ikut dio!ati dengan primakuin dan ritonavir% 6ata ini menun&ukkan !ah0a e$ek induksi R


6/9

P*AHA+AN

?ntuk pengetahuan kita( ini adalah studi pertama melaporkan interaksi antara o!at anti malaria dan anti-H#" pada tingkat mRNA% 6ari studi a0al( sudah !isa dikon$irmasi !ah0a !ahkan dengan konsentrasi

tertinggi ., u*/( primakuin tidak meningkatkan ekspresi CYP3A4 mRNA% Bonsentrasi tertinggi

primakuin digunakan dalam penelitian ini &auh le!ih tinggi dari konsentrasi maksimum dalam darah

.Cma:/ setelah pem!erian tunggal primakuin dosis normal pada manusia untuk penem!uhan radikal

atau pencegahan kekam!uhan viva: atau ovale *alaria%'3 Namun demikian( 3 u* dari primakuin

digunakan oleh acklund dkk% ?ntuk menilai pengaruh primakuin pada CYP'A' induksi dan 4 u* dari

primakuin digunakan oleh Bane!ratt dkk% untuk menilai HepaRG sel se!agai model in vitro untuk

evaluasi CYP4, induksi di human%'4( ', Aki!atna( tidak mungkin !ah0a induksi CYP3A4 ekspresimRNA oleh primakuin akan ter&adi dalam keadaan in vivo% Hasilna sesuai dengan penelitian lain

menun&ukkan !ah0a primakuin se!agai su!strat dan inhi!itor se!againa( tetapi !ukan induser dari

CYP3A4%1(

6i sisi lain( e$ek ritonavir tampakna tergantung dosis( konsentrasi ritonavir ang le!ih tinggi(

ekspresi CYP3A4 mRNA ang le!ih tinggi% ukti-!ukti menguatkan milik ritonavir se!agai

induser CYP3A4% Namun( kemampuan ritonavir se!agai inducer tidak sekuat ri$ampisin se!agai

kontrol positi$% Hal ini mungkin karena dosis ang le!ih rendah digunakan dalam penelitian ini%

Para Cma: ritonavir setelah pem!erian dosis tunggal pada manusia adalah sekitar ''(2 ug 9 m>

atau sama dengan ',,(3,' u*( sedangkan dosis ritonavir maksimum ang digunakan dalam

penelitian ini hana 2 u*%'3 Namun demikian( >uo et al% &uga digunakan 2( '( dan 2 u*

ritonavir dalam studi mereka memeriksa induksi CYP3A4 oleh o!at menggunakan hepatosit


7/9

primer culture%'7 ;leh karena itu( ritonavir administrasi in vivo mungkin dapat menghasilkan

induksi CYP3A4 ang le!ih tinggi%

6ari studi co-pengo!atan( itu menun&ukkan !ah0a hasil !ersih administrasi seiring primakuin

dan ritonavir sedikit peningkatan dari CYP3A4 ekspresi mRNA( di mana ritonavir !erperilaku

se!agai inducer% Perilaku ritonavir dalam penelitian ini adalah !er!eda dengan penelitian lain

ang dilaporkan oleh #ke)oe dkk% Co-administrasi ' ritonavir u* dan '-3 doceta:el u* di

6?'4, sel tidak mengaki!atkan peningkatan CYP3A4 ekspresi mRNA di!andingkan dengan

kelompok kontrol 6*+; dio!ati( meskipun doceta:el sa&a meningkat CYP3A4 ekspresi mRNA

dengan 2(,-$old%'1

Peningkatan sedikit CYP3A4 ekspresi mRNA dengan ritonavir dalam penelitian ini dapat

di&elaskan dengan reseptor-mediated mekanisme induksi% #nduksi CYP3A !iasana ter&adi

melalui pengikatan induser untuk reseptor pregnane .PR/ dan 9 atau konstituti$ reseptor

androstane .CAR/% +etelah diakti$kan( reseptor mem!entuk heterodimer dengan $aktor lain(

retinoid reseptor .RR untuk kedua PR dan CAR/ dan kemudian mengikat unsur-unsur

sasaran respon :eno!iotik .R/ ang terletak di kedua promotor proksimal dan distal gen P4,(

mengaki!atkan ketinggian transkripsi CYP masing gene%'

6i sisi lain( #ke)oe menun&ukkan !ah0a ritonavir dapat menghalangi doceta:el diinduksi

ekspresi CYP3A4 dengan mempengaruhi rekan regulator seperti mem!ungkam mediator retinoid

dan reseptor tiroid dan reseptor steroid coactivator-' ang dimediasi !asal dan :eno!iotik ang

dise!a!kan aktivitas transkripsional CYP3A4%'1

Peningkatan CYP3A4 ekspresi mRNA dilaporkan dalam penelitian ini dapat mene!a!kan

peningkatan en)im CYP3A4 ang dapat menurunkan konsentrasi plasma kedua primakuin dan

ritonavir% Hasil dari studi ini mem!eri kita sinal !ah0a kedua khasiat ritonavir dalam re&imenanti-H#" dan primakuin se!agai agen anti-malaria dapat dikurangi &ika kedua o!at di!erikan

!ersamaan pada manusia%

6ari eliminasi 0aktu paruh .t' 9 2/ sudut pandang( ritonavir memiliki t' relati$ singkat 9 2 ang

3-, hours%5( '3 $akta ini mungkin akan mene!a!kan e$ek induksi ritonavir pada primakuin tidak


8/9

akan !erlangsung lama% Namun( kita harus mempertim!angkan !ah0a durasi induksi o!at tidak

hana tergantung pada t' 9 2( tapi &uga tergantung pada 0aktu ang di!utuhkan untuk degradasi

en)im CYP% 6ise!utkan !ah0a t' 9 2 dari CYP4, !erkisar antara '-7 das%3 ;leh karena itu(

ritonavir hana dapat menginduksi CYP3A4 selama 3-, &am( tetapi e$ek induksi mungkin akan

!erlangsung selama !e!erapa hari%

+elain itu( se!agai monoterapi atau se!agai !ooster untuk antiretroviral lain( ritonavir di!erikan

dua kali sehari .setiap '2 &am/ %'3 ?ntuk itu( e$ek induksi ritonavir akan !erlangsung sehari

penuh%

Penghapusan paruh primakuin adalah 3(1-5(7 hours%'3 =ika primakuin di!erikan !ersamaan

dengan ritonavir( t' 9 2 dari primakuin akan dipersingkat( sehingga durasi e$ek terapi primakuin

&uga akan dipersingkat%

Ada !e!erapa keter!atasan dari studi ini% *enurut He0itt dkk( ditemukan !ah0a sel HepG2

memiliki CAR ang sangat rendah( PR( ekspresi CYP3A4( tetapi relati$ tinggi CYP3A1

ekspresi% Pro$il ini sudah sesuai dengan pro$il ekspresi &anin dan tidak de0asa dari hepatosit%

Burangna atau kelimpahan rendah PR dan CAR mem!uat mereka tidak cocok untuk tes

induksi meli!atkan ini path0as%'

Hal ini mungkin men&elaskan mengapa ' u* ritonavir dalam penelitian ini hana mem!erikan

sedikit peningkatan .'(45 kali lipat le!ih dari kontrol/ dari CYP3A4 ekspresi mRNA tetapi dosis

ang sama ritonavir dalam penelitian menggunakan kultur hepatosit primer !isa menghasilkan

2(2-2' kali lipat alih CYP3A4 ekspresi mRNA% '7 Namun( mekanisme pengendalian ekspresi

CYP3A4 dalam sel HepG2 identik dengan ang dari hepatoctes%'5 manusia

Pem!atasan lain dari penelitian ini adalah !ah0a kita tidak mengukur aktivitas en)im CYP3A4%

*eskipun ada hu!ungan !aik antara tingkat mRNA dan aktivitas en)im untuk CYPs paling( titik

akhir de$initi$ adalah aktivitas en)im daripada ekspresi karena peru!ahan keseluruhan dalam

aktivitas en)im pada akhirna akan mempengaruhi pem!ersihan o!at itu sendiri atau dari rekan-

di!erikan drug%'


9/9

Besimpulanna( administrasi seiring primakuin dan hasilna ritonavir sedikit peningkatan dari

CYP3A4 ekspresi mRNA in vitro( di mana ritonavir !ertindak se!agai inducer% Namun

demikian( pentingna temuan ini harus le!ih diper&elas dengan melakukan pengukuran en)im

CYP3A4 aktivitas%

?capan

pengaruh primakuin dan ritonavir interaksi pada cyp3a4

Documents