print halaman 11

7/23/2019 Print Halaman 11

1/11

LAPORAN TETAP

PRAKTIKUM KIMIA ANALITIK INSTRUMENT

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

DISUSUN OLEH :

KELOMPOK 2

1) ALIFANTO DHIASTAMA (061440410790)

2) ASTRI WIDA SARTIKA (061440410791)

!) DHEA ISRA ATMIKA KINTANI (061440410792)

4) DINA SAFITRI (06144041079!)

") KATARINA PUTRI C#M (06144041079")

6) M# ANJAS A$DUL KHOLIK (061440410796)

7) M# RIF%I PRAKASA (061440410797)

KELAS : 2 EG#$

DOSEN PEM$IM$ING : IKA#R'*+, M#T#

JURUSAN TEKNIK KIMIA

PROGRAM STUDI TEKNIK ENERGI DI-

POLITEKNIK NEGERI SRIWIJAA

TAHUN 2014.201"


2/11

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

I# TUJUAN

Setelah melakukan percobaan ini, mahasiswa diharapkan dapat : Menjelaskan teori kromotografi cair kinerja tinggi

Mengoperasikan alat kromotografi cair dengan baik dan benar

Menganalisis suatu senyawa kimia baik secara kualitatif maupun kuantitatif dengan

menggunakan alat kromotografi tekanan tinggi.

II# ALAT DAN $AHAN ANG DIGUNAKAN

Seperangkat alat KCKT!"#C yang dilengkapi dengan injektor dan pencetak

kromotografi

Kolom #ichosphere milipore Syringe

"enyaring milipore

$eraca analitik

#abu takar %&& ml dan %&&& ml

"ipet 'olume ( ml, ) ml, %& ml

Corong gelas

*elas kimiagelas piala %&& ml, ()& ml

III# DASAR TEORI

High performance liquid chromatography (HPLC) atau yang sering disebut

kromatografi cair kinerja tinggi +KCKT adalah jenis kromatografi yang penggunaannya

paling luas. Kegunaan umum !"#C adalah untuk pemisahan dan pemurnian senyawa obat

serta untuk analisis kuantitatif senyawa obat dalam sediaan farmasetika. -isamping itu, !"#C

juga digunakan untuk identifikasi kualitatif senyawa obat berdasarkan pada parameter waktu

retensi senyawa obat standar serta senyawa obat dalam sampel +*andjar dan ohman, (&%(.

Kegunaan !"#C antara lain:

/ 0ntuk pemisahan sejumlah senyawa organik, anorganik, maupun senyawa biologis

/ 1nalisis ketidakmurnian +impurities

/ 1nalisis senyawa/senyawa tidak mudah menguap +non 'olatile/ "enentuan molekul/molekul netral, ionik, maupun 2witter ion

/ 3solasi dan pemurnian senyawa

/ "emisahan senyawa/senyawa yang strukturnya hampir sama

/ "emisahan senyawa/senyawa dalam jumlah yang sekelumit +trace element, dalam jumlah

banyak, dan dalam skala proses industri.

+*andjar dan ohman, (&&4

2#! P*&*/& HPLC

"arameter yang dapat digunakan untuk mengetahui kualitas suatu kromatogram

adalah esolusi +s, 5aktor etensi +k, 5aktor selektifitas +6, 7fisiensi dan jumlah

lempeng teoritis +$.


3/11

/ esolusi + s

!al yang terpenting dari !"#C adalah mengoptimasi resolusi dalam waktu yang

minimum. $ilai resolusi yang melebihi %,) diantara dua puncak akan memberikan nilai

pemisahan yang baik. esolusi dipengaruhi oleh beberapa parameter diantaranya:

Selectivity, Effieciency, danRetention.

/ 5aktor etensi +k5aktor retensi adalah waktu yang diperlukan untuk membawa keluar suatu

komponen dari dalam kolom kromatografi. $ilai k yang tinggi mengindikasikan sampel

memerlukan waktu dalam berinteraksi dengan fase diam terlebih dahulu hingga keluar

dari kolom saat tepat dalam konsentrasi maksimum.

/ 5aktor selektifitas +6

Selektifitas merupakan kemampuan instrumen dalam mengenali senyawa/

senyawa dalam campuran untuk mendapat selektifitas yang maksimum diperlukan

interaksi yang sesuai +partisi, adsorpsi, sie e!clusion, atau ion e!change. 1pabila

kedua senyawa memiliki k atau nilai 6 8 % kedua senyawa tidak dapat dipisahkan.

akibat waktu retensinya identik. 1gar terjadi pemisahan yang baik maka nilai

selekti'itas +6 harus lebih besar daripada %, semakin besar nilai 6 maka pemisahannyaakan semakin baik. $ilai 6 dapat diubah/ubah dengan cara, mengubah fasa gerak

+misalnya dengan memperbesar polaritas, mengubah fasa diam, mengubah temperatur

karena pada umumnya kenaikan temperatur akan memperkecil waktu retensi, dan

mengubah bentuk komponen

/ 7fisiensi

7fisiensi kolom merupakan kemampuan kolom mengeluarkan hasil yang

diinginkan dengan memuaskan dan dalam waktu yang singkat. !asil yang idel kolom

yang efisien akan menghasilkan puncak yang tajam. 7fisiensi sangat dipengaruhi oleh

kapasitas dari kolom.

/ #empeng teoritis +$Merupakan parameter yang menghitung efisiensi kromatografi. Menyatakan

jumlah peristiwa partisi yang dialami oleh analit pada setiap saat yang dibawa oleh fase

gerak selama elusi. -imana semakin besar harga $ akan memberikan puncak yang

lebih efisien.

+Crawford, (&%%

2#4 I+&3/+

*ambar %. Skema

1lat !"#C

a. "ompa +Pump

5ase gerak dalam KCKT adalah suatu cairan yang bergerak melalui kolom. 1da

dua tipe pompa yang digunakan, yaitu kinerja konstan +constant pressure dan

pemindahan konstan +constant displacement. "emindahan konstan dapat dibagi


4/11

menjadi dua, yaitu: pompa reciprocating dan pompa syringe. "ompa reciprocating

menghasilkan suatu aliran yang berdenyut teratur +pulsating, oleh karena itu

membutuhkan peredam pulsa atau peredam elektronik untuk, menghasilkan garis dasar

+"ase line detektor yang stabil, bila detektor sensitif terhadapan aliran. Keuntungan

utamanya ialah ukuran reser'oir tidak terbatas. "ompa syringe memberikan aliran yang

tidak berdenyut, tetapi reser'oirnya terbatas +"utra, (&&9.

b. 3njektor +#n$ector

1da tiga tipe dasar injektor yang dapat digunakan:

% Stop%&lo': 1liran dihentikan, injeksi dilakukan pada kinerja atmosfir, sistem

tertutup, dan aliran dilanjutkan lagi. Teknik ini bisa digunakan karena difusi di

dalam cairan kecil dan resolusi tidak dipengaruhi.

( Septum: Septum yang digunakan pada KCKT sama dengan yang digunakan pada

Kromatografi *as. 3njektor ini dapat digunakan pada kinerja sampai & /4&

atmosfir. Tetapi septum ini tidak tahan dengan semua pelarut/pelarut kromatografi

cair. "artikel kecil dari septum yang terkoyak +akibat jarum injektor dapat

menyebabkan penyumbatan.

; Loop alve: Tipe injektor ini umumnya digunakan untuk menginjeksi 'olume lebih

besar dari %&


5/11

detektor harus dikendalikan dengan seksama, bila pengukuran yang cermat

dilakukan pada kepekaan tinggi.

; -etektor 7lektrokimia

@anyak molekul organik, termasuk obat, dapat dioksidasi atau direduksi

secara elektrokimia pada elektrode yang cocok. 1rus yang dihasilkan pada proses

ini dapat diperkuat untuk menghasilkan tenaga yang sesuai. Meskipun detektorelektrokimia cukup peka, namun ada pula kelemahannya. 1danya timbrungan

listrik dan goncangan arus juga harus diperhatikan.

9 -etektorPhotodiode%rray+"-1

-etektor "-1 merupakan detektor 0=/=is dengan berbagai keistimewaan.

-etektor ini mampu memberikan kumpulan kromatogram secara simultan pada

panjang gelombang yang berbeda dalam sekali proses +single run. Selama proses

berjalan, suatu kromatogram pada panjang gelombang yang diinginkan +biasanya

antara %>&/9&& dapat ditampilkan. -engan demikian, "-1 memberikan banyak

lebih banyak informasi komposisi sampel disbanding dengan detector 0=/=is.

-engan detektor ini, juga diperoleh spectrum 0= tiap puncak yang terpisah

sehingga dapat dijadikan sebagai alat yang penting untuk memilih panjang

gelombang maksimal untuk sistem KCKT yang digunakan. -an akhirnya dengan

detektor ini pula, dapat dilakukan uji kemurnian puncak dengan membandingkan

antara spectra analit dengan spectra senyawa yang sudah diketahui.

Spektrum dan kromatogram yang dihasilkan pada detektor "-1 ini dapat

ditampilkan sebagai plot ; dimensi absorbansi, panjang gelombang, dan waktu

sehingga data ini dapat dimanipulasi dan diplotkan kembali pada layar +monitor

lalu dibandingkan dengan data ; dimensi senyawa lain dari perpustakaan data yang

ada di sistem komputernya sehingga bisa digunakan untuk tujuan identifikasi

+*andjar dan ohman, (&&4.

I-# LANGKAH KERJA

a "rosedur operasional instrument !"#C Thermo/-ioneA

%. Terlebih dahulu siapkan fasegerak yang akan digunakan untuk analisa dan masukkan

ke botol fase gerak yang tersedia.

(. "eriksa ketersediaan cairan seaiwash pada pompa, bila habissudah lama harapdi

tambahganti dengan aBuabidest baru.

;. "asang kolom sesuai kebutuhan analisa +posisi panah kolom ke arah bawah

9. $yalakan insirument : pompa , detector +tombol power ada dibelakang instruiment

). $yalakan C"0 computer dan monitor

. 1ktifkan ser'er monitor pada pojok kanan bawah layar monitor

4. @uka sottware chromeion .??. @uka panel instrument : + bila ada warning tekan ok

>. #akukan koneksi software dengan instrurnent dengan memberi tanda ceklist pada

pump dan -etektor

%&. #akukan purging pada channel fase gerak yang akan di gunakan :

/ buka knob purging pada pompa

/ 1tur prosentasi pompa

/ Klik purge pada software

%%. @ila selesai purging jangan lupa tutup kembali knob purge nya

%(. 1lirkan kolom dgn fase gerak yang diinginkan dengan flow % mlmnt

%;. $yalakan lampu 0==is pada detector sesuai kebutuhan analisa

%9. @iarkan kolorn teraliri fasegerak selama ;& / & menit

%). "indah window software ke posisi browser%. @uat seBuence,instrument method + program dan prosesing data + rincian ada pada

bagian Selanjutnya


6/11

%4. @ila seBuence, program dan proses method telah dibuat , klik batch start

%?. Klik ready cheek untuk memastikan seBuence telah siap running , lalu start

%>. #akukan injeksi standard dan sample.

Cat : @ila ingin rneng/ injek sample , posisi injector ada pada posisi #1- D atas E .

@ila sudah ada warning waiting for injection . lalu putar injector ke posisi 3$F7CT

(&. #akukan prosesing -ata + ada pada bagian proses Kuantitasi

(%. @ila analisa telah selesai,cuci terlebih dahulu kolom yang digunakan dengankandungan air :Me! selama ;& / & menit

((. 1khiri pencucian kolom dengan di aliri methanol %&& Gselama ;& menit

(;. Matikan flow pompa dan lampu yang digunakan +lihat no.> dan %&

(9. Tutup software chromereon beserta ser'er monitornya + lihat no. dan 4

(). Matikan instrument !p#C dan computernya.

b Cara membuat program

%. Klik new //H "rogram 5ile // H K

(. Klik My Computer //H !"#C //H $eAt

;. Masukkan konsentrasi 5asegerak yang diinginkan, dan 5low rate yang digunakan,

$eAt

9. Masukkan waktu un time setiap injek //H $eAt). Masukkan panjang gelombang yang diinginkan //H $eAt

. #alu menyimpan , 5ile //H @eri nama //H Sa'e

c Cara membuat seBuence

%. Klik $eAt //H SeBuence //H K

(. 5inish

-# DATA PENGAMATAN

5ase diam 8 Silika

5ase gerak 8 Methanol 9& G / 1ir & G Kolom 8 1cclainTM%(&

"anjang gelombang 8 (4( nm

=olume injeksi 8 (& I#

#aju alir 8 % m#menit

S*/5 R# T'/ (/+') A&*

Std. Kafein % 9,( %&,>9

Std. Kafein ( 9,; %&,>)9


7/11


8/11


9/11

-I# ANALISIS DATA

@erdasarkan pratikum yang telah dilakukan, !"#C merupakan metode pemisahan

komponen dengan fase geraknya adalah liBuid yang mana fase geraknya haruslah bersifat

murni, tidak bereaksi dengan wadah +packing, sesuai dengan detektor, melarutkan sampel,

memiliki 'iskositas rendah, bila diperlukan memudahkan sampel recor'ery."ada praktikum !"#C atau high performance liBuid chromotography dengan dua tipe

sampel yang sama diambil sebanyak lebih dari (& I# dengan menggunakan syringe, metanol

dan air dengan 9& G metanol dan & G air. #alu dimasukkan kedalam injektordan mulai

melakukan injeksi sampel +sampel pada percobaan ini merupakan standard kafein. #lau mulai

melakukan prossesing data setelah dilakukannya injeksi. 1dapun waktu yang diperlukan untuk

menghasilkand data yang berupa pergerakan grafik dan data lainnya seperti waktu retensi dan

area adalah waktu yang sebelumnya telah diatur sebelum melakukan percobaan. "ada

percobaan !"#C ini waktunya adalah 4 menit pada pengujian standart kafein % dan ),) menit

pada pengujian standard kafein (.

1dapun fase diam yang digunakan pada percobaan ini adalah silika dan fase geraknya

adalah metanol 9& G dan air & G. -engan kolom 1cclainTM%(&, panjang gelombang (4( nm,

laju alir % m#menit serta 'olume injeksi adalah (& I#.

*rafik yang dihasilkan dari percobaan ini merupakan grafik dengan bentuk segitiga

sama kaki atau bentuk gauss. -engan waktu retensi pada percobaan standard kafein pertama

sebesar 9,(& menit dan pada standard kafein dua 9,;; menit. -engan besar area pada

percobaan standard kafein % adalah %&,>9, sedangkan pada percobaan standar kafein ( besar

areanya adalah %&,>)9.

Jaktu yang digunakan atau diatur dalam percobaan !"#C ini merupakan waktu

perkiraan bereaksinya kedua senyawa yaitu metanol dan air. -an pada !"#C ini sampel

haruslah beerupa liBuid. #alu, pada saat proses injeksi pemasukkan sampel diusahakan sampel

yang dimasukkan tidak disertai dengan adanya gelembung/gelembung +bubble, karena hal ini+gelembung/gelembung dapat menyebabkan terjadinya gangguan yang besar didalam detektro

sehingga dapat mengakibatkan data yang diperoleh tidak akurat atau bahkan tidak dapat

digunakan +the data may be useless. 0ntuk itu pengambilan sampel haruslah lebih banyak dari

yang diperlukan serta tidak memasukkan sempel kedalam injektor.

-II# KESIMPULAN

@erdasarkan hasil dari percobaan yang telah dilakukan dapat disimpulkan antara lain

sebagai berikut.

%. !"#C merupakan metode pemisahan senyawa dari komponen/komponennya dan !"#C

ini merupakan jenis kromotografi yang penggunaannya paling luas yaitu dapat digunakan

dalam bidang farmasi maupun bidang pertanian

(. Terdapat dua macam jenis fasa padu KCKT yaitu, fasa normal dan fasa balik

;. "engoperasian software !"#C cukup rumit sehingga dalam pengoperasiannya haaruslah

berhati/hati dan teliti

DAFTAR PUSTAKA


10/11

Fobsheet "ratikum Kimia 1nalitik 3nstrument. (&%9/(&%). *romotografi Cair *iner$a +inggi.

"alembang : "oliteknik $egeri Sriwijaya.

GAM$AR ALAT


11/11

print halaman 11

Documents