laporan fito kurkumin f5f6.docx

7/21/2019 LAPORAN FITO kurkumin F5F6.docx

1/19

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA

ISOLASI & PEMURNIAN KURKUMIN

SECARA KROMATOGRAFI KOLOM

Kelompok F 5 : Kelompok F 6 :

Nur H!"#" $%%'%() Lo* A+,e- N"."l" $%%''(5)

C/l" Ok." 0erl",.k" $%%'%5) S*"ll#, Aprl" $%%''6')

Prm" H"-.# Nu+r"*e, $%%'%1) I,++r! A+u,+ 2"+r $%%''16)

L" C"*#",,+.#"- $%%'%3) 4,/e,.u- Ro,"l!o $%%''()

Gr"." 4!# Mo,/" T $%%'%73) S.e8e, Sur#" $%%''3)

FAKULTAS FARMASI U0A9A

'%(

1


2/19

0A0 I

TUJUAN PRAKTIKUM

Memahami metode isolasi kurkumin dengan menggunakan metode kromatografi

kolom dan memisahkan senyawa murni kurkumin dari campurannya

Memahami cara ker!a metode identifikasi kurkumin dengan menggunakan

kromatografi lapis tipis " spektra ultra#iolet

Memahami kur#a spektrofotomeri $erdasarkan a$sor$ansi dari kurkumin yang

diidentifikasi

2


3/19

0A0 II

TINJAUAN PU%TAKA

Krom".o+r" kolom

Kromatografi kolom !uga merupakan suatu metode pemisahan preparatif Metode ini

memungkinkan untuk melakukan pemisahan suatu sampel yang $erupa campuran dengan

$erat $e$erapa gram &e$erapa kelemahan dari metode ini adalah'

( )iperlukan !umlah pelarut*eluen yang cukup $esar

+ ,aktu eluasi untuk dapat menyelesaikan pemisahan sangat lama

- )eteksi hasil pemisahan tidak dapat langsung dilakukan .masih

memerlukan K/T0

Pada prinsipnya kromatografi kolom adalah suatu teknik pemisahan yang didasarkan

pada peristiwa adsorpsi %ampel yang $iasanya $erupa larutan pekat diletakkan pada u!ung

atas kolom 1luen atau pelarut dialirkan secara kontinu kedalam kolom )engan adanya

gra#itasi atau karena $antuan tekanan2 maka eluen*pelarut akan melewati kolom dan proses

pemisahan akan ter!adi %eperti pada umumnya2 eluen*pelarut yang digunakan dimulai dari

yang paling nonpolar dan dinaikkan secara gradient kepolarannya hingga pemisahan dapat

ter!adi %ama halnya pada K/T2 pemisahan dapat ter!adi karena adanya per$edaan afinitas

senyawa pada adsor$en dan per$edaan kelarutan senyawa pada eluen*pelarut

Ketika sampel diletakkan diu!ung kolom2 seketika itu !uga sudah ter!adi peristiwa

adsorpsi oleh permukaan adsor$en yang $er$atasan dengan sampel 1luen yang dialirkan

secara kontinu kedalam kolom akan menye$a$kan adanya peristiwa adsor$si dan desorpsi

senyawa3senyawa pada sampel Molekul3molekul senyawa akan di$awa ke $agian $awah

kolom dengan kecepatan yang $er#ariasi $ergantung pada $esarnya afinitas molekul terse$ut

dalam eluen*pelarut 4airan yang keluar dari kolom ditampung dan dilakukan analisis

menggunakan K/T untuk melihat hasil pemisahannya

Pada kromatografi kolom2 hal3hal yang paling $erperan dalam kesuksesan pemisahan

adalah pemilihan adsor$en dan eluen*pelarut2 dimensi kolom yang digunakan serta kecepatan

elusi yang dilakukan

3


4/19

A!-or;e, yang umum digunakan selain %i5+dan selulosa adalah alumina2 yang

tersedia dalam $entuk asam2 $asa atau netral Adsor$en ini dian!urkan hanya dipakai untuk

senyawa3senyawa organic yang sta$il Pemilihan adsor$en dan $entuknya .asam2 $asa atau

netral0 sangat penting untuk menghindari reaksi yang dapat ter!adi di dalam kolom yang

dapat ter!adi didalam kolom yang tidak diinginkan selama proses elusi $erlangsung

Adsor$en lain yang umum dipakai adalah silica gel2 yang terutama digunakan untuk

memisahkan senyawa3senyawa organik yang tidak memiliki kesta$ilan yang memadai untuk

dipisahkan menggunakan alumina

&esarnya $utir*granul adsor$en yang digunakan pada kromatografi kolom harus harus

le$ih $esar di$andingkan dengan yang digunakan pada K/T2 yaitu antara 673+77 8m dengan

ukuran terse$ut2 pengisian kolom secara homogen dapat terlaksana2 kecepatan elusi !uga

$er!alan se$agaimana seharusnya serta pergantian senyawa yang teradsorpsi pada adsor$en

dan kelarutannya pada eluen*pelarut ter!adi cukup cepat

Jumlah adsor$en yang digunakan $ergantung pada tingkat kesulitan pemisahan dan

pada !umlah sampel yang akan dipisahkan %ecara umum diperlukan -7367 gram adsor$en

untuk tiap gram sampel yang akan dipisahkan Jumlah terse$ut $isa mencapai +77 gram

adsor$en !ika pemisahan yang dilakukan cukup sulit )i$utuhkan !umlah adsor$en yang le$ih

sedikit untuk memisahkan senyawa3senyawa yang per$edaan polaritasnya sangat $esar

Elue,


5/19

sehingga tinggi kolom (7 kali diameter kolom2 $iasanya !uga disisakan ruang kosong diatas

adsor$en terse$ut kira3kira (7 cm untuk sampel dan pelarut

Ke/ep".", elu- se$aiknya di$uat konstan Kecepatan terse$ut harus cukup lam$at

sehingga senyawa $erada dalam keseim$angan antara fase diam dan fase gerak2 se$aliknya

!ika kecepatan elusi ini terlalu kecil2 maka senyawa3senyawa akan terdifusi ke dalam eluen

dan akan menye$a$kan pita makin lama makin le$ar yang aki$atnya pemisahan tidak dapat

$erlangsung dengan $aikkecepatan elusi yang $esar dapat dilakukan !ika yang akan

dipisahkan adalah campuran senyawa yang memiliki kepolaran yang sangat $er$eda

5


6/19

0A0 III

A/AT " &A:AN

A Alat " &ahan

( Alat '

&eaker glass

Kertas saring

Pengaduk kaca

4orong kaca

Pipet tetes

;elas ukur

4ham$er

%pektrofotometri

Kolom Kromatografi %tatif < klem holder

=ial

4awan porselin

1rlenmeyer

+ &ahan'

( g ser$uk rimpang kunyit

%ilika gel >7 ? +-7 mesh 67 g

%ilika gel @7 +6B

4:4l-3&enCen31tanol .B6'B6'(70 /arutan K5: 6D dalam etanol

6


7/19


8/19

&A& I=

%K1MA K1RJA

Penyiapan %ampel)itim$ang sampel .ser$uk ekstrak temulawak ( gram < silica gel 6 gram

Pel"k-","", Krom".o+r" Kolom

Pasang pada statif

Isi dengan fase gerak .E (*- tinggi kolom0

Tuang cepat suspensi silika gel dalam fase gerak

:indari ter$entuk gelem$ung udara

)iamkan semalam

&uka kran untuk mengeluarkan fase gerak hingga fase diam masih E

726 cm

Tutup kem$ali kran

Masukkan sampel ( g

Tutup kem$ali dengan suspensi silika gel

&uka kran

Tampung fase gerak dalam 1rlenmeyer

Tam$ahkan fase gerak dalam kolom

Tampung filtrat ke dalam 67 #ial .yang telah di$eri penomoran (3670yang

telah dikali$rasi masing3masing 6 ml

I!e,.k"- Se/"r" KLT

Kolom

Kolom Kromatograf + ase

Kolom Kromatograf + ase diam

Kolom Kromatograf + ase

Kolom Kromatograf +

Pita-pita warna sampai di dasar

Filtrat (nomor vial semakin esar! warna fltrat "ang ditamp#ng semakin

#ial (2 #ial @2 #ial ((2 #ial (@2

#ial +@2 #ial2 -@2 #ial B@

Noda 4ampuran %enyawa


9/19

+(

I!e,.k"- Kurkum, Se/"r" Spek.roo.ome.r U4=4IS

0A0 4

P1M&A:A%AN

Kromatografi Kolom

Pada praktikum isolasi dan pemurnian kurkumin dengan teknik kromatografi kolom

digunakan temulawak .Curcuma xanthorhiza Ro9$0 Analisis kimia menun!ukkan $ahwa

senyawa utama yang terkandung dalam Curcuma xanthorhiza Ro9$ antara lain adalah pati

.BF(F36G@BD02 serat .+6F3BF-D02 minyak menguap seperti phelandren2 camphor2 tumerol2

sineol2 $orneol dan 9anthorrhiCol .(BF3(@-D02 dan !uga kurkuminoid seperti kurkumin2

desmeto9ikurkumin2 $idesmetho9ycurcumin .(@3++D0

)itotolkanpada lempeng %ilika ;el @7+6B

)ieluasi dengan fase gerak 4:4l-3&enCen31tanol

.B6'B6'(70

=isualisasi dengan penampak noda larutan K5: 6D

dalam etanol

Mengga$ungkan filtrat dalam #ial3#ial yang

mempunyai profil kromatografi yang sama

.yang diduga adalah kurkumin yaitu noda tunggal

paling atas0

Melakukan K/T lagi terhadap fitrat hasil ga$unganNoda tunggal :asil ;a$ungan iltrat

Uapkan larutan kurkumin hasil pemurnian sampai

kering

/arutkan dalam ethanol Hs

Amati spektronya pada pan!ang gelom$ang -773@77

nm pada %pektrometer U=3=is

Amati spektrumnya

Tam$ahkan campuran Na5: dalam etanol se$anyak

- tetes


10/19

Untuk mendapatkan isolat murni kurkumin dari Curcuma xanthorhiza Ro9$2

dilakukan teknik kromatografi kolom Kromatografi kolom adalah salah satu metode yang

digunakan untuk pemurnian senyawa dari campuran dengan menggunakan kolom

Kromatografi kolom menggunakan adsor$en sillika gel karena kolom yang di$entuk dengan

silika gel memiliki tekstur dan struktur yang le$ih kompak dan teratur %ilika gel memadat

dalam $entuk tetrahedral raksasa2 sehingga ikatannya kuat dan rapat )engan demikian2

adsor$en silika gel mampu menghasilkan proses pemisahan yang le$ih optimal

Alat utama yang digunakan dalam kromatografi kolom adalah se$uah ta$ung dengan

diameter 6367 mm dan tinggi 6 cm 3 ( m Pada $agian dasar ta$ung di$eri semacam

penyaring dari glass wool untuk menghindari hilangnya fasa diam

;am$ar ( Alat Kromatografi kolom

asa gerak atau eluen adalah campuran cairan murni Pada isolasi kurkumin ini

digunakan eluen 4:4l- ' $enCen ' etanol .B6'B6'(70 Jenis eluen yang digunakan pada

kromatografi kolom dipilih supaya senyawa yang $er$eda dapat dipisahkan secara efektif

ase gerak mem$awa komponen3komponen yang akan dipisahkan2 menggunakan suatu

pelarut organik atau campuran $e$erapa pelarut organik

asa diam yang digunakan dalam kromatografi kolom adalah suatu adsor$en padat2

senyawa yang digunakan adalah silica gel .%i5+0 5leh karena silica gel memiliki gugus

hidroksil pada permukaan menye$a$kan sifatnya sangat polar2silica gel dapat mem$entuk

ikatan hidrogen di permukaan %ementara itu2 fase gerak yang digunakan yaitu 4:4l- '

$enCen ' etanol .B6'B6'(70 sifatnya non3polar Maka pada saat campuran dimasukkan2

senyawa3senyawa yang semakin polar dalam ekstrak akan semakin lama tertahan di fasa

diam2 dan senyawa3senyawa yang semakin kurang polar akan ter$awa keluar kolom le$ih

cepat

Pada kromatografi kolom ada dua metode utama yang digunakan yaitu metode kering

dan metode $asah'


11/19

Metode kering

Pada metode kering2 kolom diisi dengan fasa diam kering2 diikuti dengan penam$ahan fasa

gerak yang disiramkan pada kolom sampai $enar3$enar $asah

Metode $asah

Pada metode $asah2 $u$ur .slurry0 disiapkan dengan mencampurkan eluen pada

ser$uk fasa diam dan dimasukkan secara hati3hati pada kolom )alam langkah ini harus

$enar3$enar hati3hati supaya tidak ada gelum$ung udara /arutan senyawa organik dipipet di

$agian atas fasa diam2 kemudian eluen dituangkan pelan3pelan melewati kolom

Untuk isolasi dan pemurnian kurkumin kali ini2 digunakan metode $asah Kemudian

kolom yang telah terisi suspensi fase diam dalam fase gerak didiamkan selama semalam

hingga fase diam mampat Kemudian sample akan dimasukkan ke dalam kolom dan ditutup

lagi dengan suspensi silica gel2 lalu kran di$uka untuk menampung fase gerak yang akan

keluar ke dalam #ial yang telah dikali$rasi4ara ker!a kromatografi kolom dimana komponen tunggal ditahan pada fasa diam

$erupa ador$en karena telah terikat Ketika eluen dialirkan2 maka senyawa akan melakukan

migrasi2 ter$awa oleh eluen sesuai dengan kesesuaian kepolaran Masing3masing senyawa

dalam komponen mempunyai kecepatan yang $er$eda3$eda dalam melewati kolom %elama

proses $erlangsung2 akan didapatkan $e$erapa fraksi Masing3masing fraksi kemungkinan

mengandung senyawa yang $er$eda Untuk mengu!inya2 fraksi hasil kromatografi kolom

dapat diamati menggunakan K/T raksi dengan Rf yang mirip2 kemungkinan mengandung

senyawa yang sama raksi dapat diamati le$ih lan!ut menggunakan spektroskopi

%eluruh proses kromatografi kolom dapat dilihat pada gam$ar $erikut'

;am$ar +

Proses

Kromatografi kolom

Identifikasi secara K/T( %inar Tampak K/T ( .urutan no dari kiri ke kanan(2 @2 ((2 (@2 +@2 -@2 B@0


12/19

1. 6 11 16 26 36 46a

1.

6

11

16

26

36

46a

1. 6 11 16 26 36 46a

+ U= +6Bnm .urutan no

dari kiri ke kanan(2 @2 ((2 (@2 +@2 -@2 B@0

- U= -@@nm .urutan no dari kiri ke kanan(2 @2 ((2 (@2 +@2 -@2 B@0

B Penampak noda K5: K/T ( .urutan no dari kiri ke kanan(2 @2 ((2 (@2 +@2 -@2 B@0

6

46

16

2611

1


13/19

1'

)

*

6

5

4

3

2

2 4 6 ) 1'

3 5 *

6 %inar tampak K/T + .urutan dari kiri ke kanan+2-2B262@2>2F2G2(70

@ U= +6Bnm .urutan dari kiri ke kanan+2-2B262@2>2F2G2(70


14/19

3 5 *

2 4 6 ) 1'

1')642 3 5 *

> U= -@@nm .urutan dari kiri ke kanan+2-2B262@2>2F2G2(70

F Penampak noda K5: K/T + .urutan dari

kiri ke kanan+2-2B262@2>2F2G2(70

Pada perco$aan ini sampel yang digunakan adalah Curcuma xanthorrhiza yang

diperoleh dari proses Kromatografi kolom kemudian dikeringkan atau diuapkan dan

dilarutkan pelarut etanol %ampel terse$ut ditotolkan pada lempeng K/T lalu dicelupkan ke

dalam cham$er yang telah $erisi pelarut dalam !umlah tidak terlalu $anyak .4:4l- '

&enCen'1tanol B6 ' B6 ' (7 0 ketika $ercak dari campuran terse$ut mengering Perlu


15/19

diperhatikan $ahwa $atas pelarut $erada di $awah garis dimana posisi $ercak $erada =ial

yang ditotolkan pertama kali adalah isi #ial kelipatan lima .(2@2((2(@2+@2-@2B@0 %etelah

dieluasi2 lempeng silicagel disemprot dengan penampak noda Na5: 6D2 kemudian diamati

noda dengan profil kromatografi yang sama2 dan dilakukan K/T lagi terhadap filtrat hasil

ga$ungan #ial dengan profil kromatografi yang sama .#ial +3(70

%e$elum disemprot penampak noda2 ter$entuk warna kuning pada plat K/T terse$ut2

setelah disemprot noda $erwarna oranye ang menye$a$kan warna dari senyawa3senyawa

pada kromatografi lapis3tipis adalah per$edaan tingkat kepolaran warna dari senyawa3

senyawa yang se!auh mana tingkat kepolaran itu mempengaruhi per$edaan atau pemisahan

yang ditandai dengan te$entuknya spot3spot senyawa dalam kromatografi lapis3tipis itu

tergantung dari migrasi pelarut .fase mo$il*fase gerak0 terhadap fasa diamnya2 yaitu

kromatografi lapis3tipis terse$ut %etelah letak noda komponen diketahui dan di$eri tanda $atas2 maka harga Rf

.Retardation factor0 dapat dihitung :arga Rf merupakan parameter karakteristik

kromatografi kertas dan kromatografi lapis tipis :arga ini merupakan ukuran kecepatan

migrasi suatu senyawa pada kromatogram dan pada kondisi konstan merupakan $esaran

karakteristik dan reprodusi$el :arga Rf didefinisikan se$agai per$andingan antara !arak

senyawa dari titik awal dan !arak tepi muka pelarut dari titik awal

Rf Jarak yang ditempuh komponen

Jarak yang ditempuh pelarutNilai Rf $ersifat karakteristik dan menun!ukkan identitas masing3masing komponen

Komponen yang paling mudah larut dalam pelarut harganya akan mendekati satu %edangkan

komponen yang kelarutannya rendah akan mempunyai Rf hampir nol Ada $e$erapa faktor

yang menentukan harga Rf yaitu pelarut2 suhu2 ukuran dari $e!ana2 kertas dan sifat dari

campuran

Nilai Rf digunakan untuk identifikasi kualitatif dari senyawa yang tidak diketahui

dengan mem$andingkan terhadap senyawa standard &ila harga Rf3nya sama2 $erarti kedua

senyawa terse$ut identik*sama Pada perco$aan ini2 nilai Rf adalah #ial +3(7 72@ .terlihat

dari noda nomer -3@0 sedangkan pada noda >3F ter!adi tailing dan noda nomer G3(7 suda

ter$agi men!adi + titik .diduga desmetoksikurkumin0 Nilai Rf kurkumin pada Curcuma

xanthorrhiza pada pustaka yaitu 72@ Karena nilai Rf pada #ial +3(7 sesuai dengan pustaka

kurkumin yaitu 72@ maka dapat disimpulkan $ahwa #ial +3(7 diduga mengandung senyawa

kurkumin


16/19

2 4 6 ) 1'

3 5 *

Rf

noda -3@ 0,48

8 72@

Identifikasi secara %pektrofotometri U#3=is

=ial +3(7

%e$elum ditam$ah Na5:

Pan!ang gelom$ang ma9 B+7267 nm A 72>7G

%esudah ditam$ah Na5:

Pan!ang gelom$ang ma9 B6-26 nm A72>+F

%elain dilakukan identifikasi kurkumin menggunakan K/T2 dilakukan !uga

identifikasi dengan spektrofotometri U=3#is untuk melihat spektra dari kandungan3

kandungan yang terdapat pada #ial 2 terutama yang dicurigai mengandung kurkumin

=ial yang digunakan yaitu #ial nomor +3(7 yang telah dicampur 4ampuran terse$ut diuapkan

di atas water$ath dan dilarutkan dalam metanol2 kemudian diamati spektranya pada

spektrofotometri

4ampuran #ial +3(7 diamati spektranya dengan dimasukkan pada ku#et dan

spektrofotometer2 dan didapat pan!ang gelom$ang maksimumnya yaitu B+726 nm dan

a$sor$ansi nya 72>7G Kemudian setelah teramati spektranya2 dilakukan penam$ahan pereaksi

geser Na5: +M dalam air se$anyak +3- tetes2 untuk mengamati adanya pergeseran spektra

yang menun!ukkan adanya degradasi .pengurangan kekuatan spektrum0 %etelah ditam$ah

Na5: didapatkan pan!ang gelom$ang B6-26 nm dan a$sor$ansi 72>+6 yang menun!ukkan


17/19

adanya pergeseran $atokromik .pergeseran serapan maksimum pada pan!ang gelom$ang yang

le$ih $esar0

&erdasarkan pustaka2 ke$eradaan kurkumin menga$sor$si maksimum pada pan!ang

gelom$ang +>(2 B+72 dan B-6 nm .Naama2 dkk +7(70 )ari #ial hasil praktikum kami2 #ial +3

(7 menun!ukkan adanya kurkumin karena pan!ang gelom$ang se$elum ditam$ah pereaksi

geser adalah se$esar B+726 nm2 yang mendekati pan!ang gelom$ang maksimum kurkumin

pada pustaka


18/19

&A& =I

K1%IMPU/AN

%implisia yang digunakan adalah 4urcuma 9anthorrhiCa atau temulawak

Temulawak mengandung senyawa kurkuminoid2 yaitu curcumin2

demetho9ycurcumin dan $idesmetho9ycurcumin

Isolasi dilakukan dengan menggunakan metode kromatografi kolom dengan fase diam

$erupa silica gel dan fase gerak $erupa 4:4l-' $enCene ' etanol B6 'B6 '(72 di mana

hasil eluasi ditampung dalam 67 #ial

Identifikasi dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis .K/T0 dan

spektrofotometri U=3=is

Identifikasi dengan K/T untuk #ial -3> menghasilkan Rf 72@ yang sesuai dengan Rf

kurkumin pada pustaka

Identifikasi dengan spektrofotometri U=3=is2 yaitu #ial -3> menghasilkan pan!ang

gelom$ang maksimum B-726 nm yang mendekati pan!ang gelom$ang maksimum

pada pustaka yaitu B-6 nm

Pada #ial -3@ dan >3(+ setelah ditam$ahi Na5: .pereaksi geser0 mengalami

pergeseran $atokromik

%ampel yang diteliti mngandung kurkumin


19/19

&A& =II

)ATAR PU%TAKA

Unesco2 Airlangga Uni#ersity " %epuluh Nopem$er Institute of Technology2 .(GF>02

Programme and A$stracts :and$ooks2 Unesco %u$3regional %eminar*,orkshop on

Transformation and %ynthesis Related to Natural Products

Afinda no#i kristanti2 Nanik siti aminah2 Mulyadi tan!ung2 &am$ang kurniadi &uku A!ar

itokimia +77F Pener$it Airlangga Uni#ersity Press %ura$aya

http'**wwwilmukimiaorg*+7(-*76*kromatografi3kolomhtml

http'**wwwchemistryorg*materikimia*instrumenanalisis*kromatografi(*kromatografikolo

m*

laporan fito kurkumin f5f6.docx

Documents