teknik evaluasi bioaktivitas

7/23/2019 Teknik Evaluasi Bioaktivitas

1/38

TEKNIK EVALUASI BIOAKTIVITAS

ANTIBAKTERI

KELOMPOK

1

M. Isnain RamatdaniDebby novrioza Isra Afriani

Dita Heriani Lily Suryani

Dosen : Rahayu Utami, Msc, Apt

PROGRAM

STUDI S

1

FARMASI

SEKOLAH TINGGI ILMU FARMASI

RIAU YAYASAN

UNIVERSITAS

PEKANBARU

2015


2/38

AntiBakteri

senyawa-senyawa kimia alami yang

dalam kadar rendah dapatmenghambat pertumbuhan bakteri.

Menurut Madigan dkk. (2000), toksisitas selektif

senyawaantimikrobia mempunyai 3 mac

pertumbuhan mikrob

Bakteriostatikmemberikan efek denganmenghambat pertumbuhan t

membunuh. Senyawa bakteseringkali menghambat sinte

atau mengikat riboso

Bakteriosidal

memberikan efek dengmembunuh sel tetapi tidak t

sel atau pecah sel.

Bakteriolitik

menyebabkan sel menjadi lpecah sel sehingga juml

berkurang


3/38

Faktor-faktor Berp

Aktivitas Senyawa

Mengganggupermeabilitasmembran sel

bakteri

Menghambatsintesis dinding

sel bakteri

Menghambatsintesis atau

merusak

asam nukleatbakteri

Menghambatsintesis

protein sel

bakteri

Mekanisme Kerja Bahan

Antibakteri

a) pH

b) Suhu stab

senyawa

tersebut

c) jumlah ba

yang ada

d) lamanya

inkubasi

e) dan aktiv

metabolis

bakteri


4/38


5/38


6/38

METODE DIFUSI

discdiffusion

E-test

Gradient-plate

technique

Ditch-platetechnique

Cup platetechnique


7/38

E-test

Pada metode ini digunakan strip plastic yang mengandung antimikroba dari kadar rendah hingga tertinggi dan diletakpermukaan media agar yang telah ditanami mikroorganism

Ditch-plate

technique

Pada metode ini sampel uji berupa agen antimikroba yang dpada parit cawan petri pada bagian tengah secara membujumikroba uji maksimum 6 macam) digoreskan kearah parit yagen anti mikroba

Gradient-plate

technique

Media agar dicairkan ditambahkan. Campuran kemudian dkedalam cawan petri dan diletakkkan dalam posisi miring. kedua dan antibiotic atau anti bakteri selanjutnya dituang

Plate diinkubasi selama 24 jam untuk memungkinkan agenberdifusi membentuk gradien konsentrasi dan permukaan mmengering. Mikroba digoreskan pada arah mulai dari konseke rendah.


8/38

Gradient-platetechnique E-test


9/38

Dibuat su

pada media

yang tel

ditanam

mikroorgan

dan pada s

tersebut dagen antimi

yang akan

PRINSIPCup plate technique


10/38

Metode disc diffusion (tes Kirby & bauer)

1. Kemampuan dandifusi antibiotic ke

media, serta intera

dengan organisme2. Jumlah organisme y

diinokulasi

3. Kecepatan pertumb

organisme

4. Derajat sensitivitas

organisme terhada

Sentivitas suatu organterhadap suatu obat dberdasarkan ukuran d

itu, yang tentunya bervariable-variabel sepe

Prinsip

Metode ini untuk menentukan

aktivitas agen antibakteri. Piringan

yang berisi agen antibakteri diletakkan

pada media agar yang telah ditanami

bakteri yang akan berdifusi pada

media agar tersebut. Area jernih

mengindikasikan adanya hambatan

pertumbuhan bakteri oleh agen

antibakteri pada permukaan media

agar.


11/38

Alat bahan

timbangan

dispenser cakram-sensi ataupinset

pembakar Bunsen

kertas cakaram

Autoklaf

tabung reaksi

jarum ose

incubator lumpang dan alu

cawan petri

Biakan bakteri (suspebakteri

Cakram uji sensitivitaantibakteri

Medium agar


12/38

Sebanyak 0,3 ml sus

uji dimasukkan ked

Petri. Sebanyak 15

(pada suhu 40C) d

kedalam cawan P

bakteri. Dikocok sam

lalu dibiarkan m

Penanaman Inok

Pembuatan Suspensi

Mikroba Uji


13/38

PEMBUATAN MEDIA

NUTRIEN AGAR (NA)


14/38

Prosedur Kirby-bauer


15/38


16/38

Biarkan selurbiakan menger

men


17/38


18/38

Diameter hambatan diukur dengan menggunakanjangka sorong dan tentukan konsentrasi hambat

minimum (KHM)


19/38

Respon

hambatan

pertumbuhan

MIC (g/mL)Diameter zona

bening (mm)

Kuat 4 20

Sedang 8-16 15-19

Lemah 32 14

Tabel 1. Klasifikasi Respon Hambatan Pertumbuhan

Mikroba

Sumber : CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institut


20/38

Metode Bioautografi

Bioautografi

merupakan metode

yang spesifik untuk

mendeteksi adanya

bercak pada

kromatogram hasil

kromatografi lapis

tipis daerah hambatnya

ditandai dengan

adanya bercak pada

kromatogram

Kelebihan: Dapat digunakan untu

mengetahui aktivitas bdari antibakteri

Dapat mendeteksi antiyang belum diketahui

Hanya membutuhkansederhana

Interpretasi hasilnya rmudah dan akurat

Kekurangan: Waktu yang lama Kurang efisien Harus digunakan pemb

deteksi bercak

KELEBIHAN & KEK


21/38

Prinsip Metode Bioautografi

METODE

BIOAUT

OGRAFI

KONTAK

LANGSU

NG

AGAR

OVERLAY

Pa

kroma

agar

sud

m

krom

diwar

dye

terb

Bioautografi langsung dilakukan dengan menyemprot lempeng

kromatogram mikroba uji dan diinkubasi. Zona hambat yang

terbentuk divisualisasikan dengan menyemprot lempeng kromatogram

dengan tetrazolium dye


22/38

OVE


23/38

METODE BIOAUTOGRAFI

-Plat KLT ukuran 7 x 5cm

-Chamber (berupa gelasukur)

-Kertas saring

-Pipa Kapiler

-Petri Dish

-Pinset

-Lampu Spritus

-Sinar UV

-Inkubator

-Pensil

-Spidol

-Ekstrak antimtumbuhan

-Konsentrasi 220%, 15%, 10%

-Bakteri Uji(Escherichia co

-Medium Agar(Nutrient Agar

-Eluent (metanasetat)

ALAT BA


24/38

PROSEDURE

1. Plat KLT ukuran 7 x 5 cm disiapkan dan di buat garis pada bagian atas danbawah sebesar 0.5 cm.

2. Plat KLT ditandai 3 titik pada garis bawah.

3. Chamber disiapkan dan dijenuhkan dengan eluent metanol:etil asetat (3:2)4. Masukkan kertas saring untuk mengetahui eluent sudah jenuh sampai tand

batas dan angkat kertas saring tersebut.

5. Plat KLT di masukkan ke dalam chamber yang telah jenuh dengan eluent tad6. Tunggu hingga proses elusi selesai, ditandai dengan eluent telah sampai pada

garis batas atas

7. Plat KLT diangkat dan dikeringanginkan8. Amati di bawah lampu UV, tandai noda yang terbentuk

PEMBUA


25/38

Prosedur Uji aktivitas antibakteri dengan

metode bioautografi

Media disiapkan (panasi media) dan suspensi

mikroba di buat

Plat KLT di tempel diatas media yang mengerastadi sambil agak di tekan, tunggu 30 menit. Di

lingkari noda dengan spidol.

Sediakan petri dish steril, masukkan 0.3 mlbakteri uji (Escherichia coli). Tambahkan media

nutrient agar sampai menutupi bakteri uji. Lalu

homogenkan media dengan memutar petridish,diputar 5 ke kanan dan 5 ke kiri. Biarkan hingga

mengeras

Plat diangkat dan petri dish di inkubasi pada suhu37 selama 1824 jam

Amati dan catat pengamatan (diameter daerah

bening yang terbentuk)


26/38

ANALISIS DATA

B


27/38

Metode dilusi

Dilusi Cair

MikrodilusiDilusiPadat

PRINSIP


28/38

metode ini serupa dengan metode dilui cairnamun menggunakan media padat (solid)

keutungan metode ini yaitu satu konsentrasi

agen anti mikroba yang diuji dapatdigunakan untuk menguji beberapa mikrobauji

Dilusi

padat

Selama pengujian, beberapa piring mikro diisidengan Bakteri. Berbagai konsentrasi antibiotik

dan bakteri yang akan diuji kemudian ditambahkanke piring. Piring tersebut kemudian ditempatkan

dalam inkubator dan dipanaskan pada 35 C selama16-20 jam. Setelah waktu yang diberikan, diperiksa

untuk pertumbuhan bakteri. Jika media menjadikeruh atau lapisan sel yang terbentuk di bagian

bawah, maka pertumbuhan bakteri terjadi

Mikrodilusi

PRINSIP

MetodePrinsip dilusi cair


29/38

Metode

Metode ini serupa dengdifusi cair namun mengmedia padat (solid). Ke

metode ini adalah satu k

agen antibakteri yang ddigunakan untuk mengu

bakteri uji.

Prinsip dilusi cair

Prinsip dilusi pad


30/38

Alat :- Gelas beker 100ml, 250 ml

- Pipet tetes

- Spiritus

- Tabung reaksi

Bahan :- Media Cair

- Bakteri

- Aquades

ALAT

BAHAN

ALAT & BAHAN

PROSEDURE DILUSI CAIR


31/38

Disiapkan 7 buah tabung reaksi ( 2tabung untuk kontrol dan 5 tabunguntuk perlakuan )

Dilakukan pengenceran larutanstreptomisin/penisilin dengan

menggunakan media TSB/NB sebagaipengencer.

Dibuat seri pengenceran 400 g / ml,200 g / ml, 100 g/ ml, 50 g/ ml, dan25 g/ ml dengan volume akhir dalam

tabung 2 ml.

Di inkulasikan setiap tabung (kecualdengan menggunakan 0,1 ml biakan E

108 CFU/ml) diinkubasi selama 2

PROSEDURE DILUSI CAIR


32/38

Diamati tabung yang menunjukan


33/38

pertumbuhan yang dikocok. Apabila tabungkeruh (+) menunjukan pertumbuhan dan

apabila tabung jernih (-) tidak terjadipertumbuhanDilaporkan dihasil dalam

bentuk tabel

Dipindahkan satu mata ose biakan dari tabung jernihkedalam media TSB dan media TSA yang baru.

Dinkubasi pada suhu 37 derajat C selama 24 jam

Diamati tabung yang menunjukan pertumbuhandengan di kocok. Apabila tabung keruh (+)

menunjukan pertumbuhan dan tabung jernih (-)tidak ada pertumbuhan .Dilaporkan hasilnyadalam bentuk tabel .

Ditentukan konsentrasi bahan kimia

yang bersifat bakteriostatik atau

bakterisidal.

Teknik Mikrodilusi


34/38

Teknik Mikrodilusi


35/38

ANALISI DATA


36/38

Difusidan

Dilusi

Data hasil uji antibakteri yang didapat dari haspengukuran zona hambat dianalisis menggunakaANOVA satu arah dengan taraf kepercayaan 95%yang kemudian dilanjutkan dengan analisis BNT

MIC dan MBC ditentukan dari hasil kadarabsorbansinya dimana kadar mencapai 90 % ata

lebih maka antibiotik memiliki MIC yang baik,apabila


37/38

METODE PENERAPAN

Hitungan mikroskopik perhitungan mikroorganisme dlm

Membaran atau filter molekuler Perhitungan mikroorganisme dala

makanan, tanah, kultur dan lain

Pengukuran kekeruhan Uji mikrobiologi, pendugaan hasildalam kaldu , kultur atau suspens

Penentuan nitrogen Pengukuran panen sel dri suspensutk digunakan pada penelitian memetabolisme

Penetuan berat Pengukuran panen sel dri suspensuntuk digunakan pada penelitianmetabolisme

Pengukuran aktivitasbiokimiawi

Uji mikrobiologi

Teknik plating Perhitungan mikroorganisme dala

makanan, tanah, kultur danlain

PERTUMBUHAN MIKROORGANISME


38/38

TERIMAKASIH

teknik evaluasi bioaktivitas

Documents